携Apoptin和PEG3启动子双特异性溶瘤腺病毒对结直肠癌的抑制作用

目的:探讨携带凋亡素基因(Apoptin)和进行性增量基因3(progression-elevated gene 3,PEG3)启动子的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a对结直肠癌的体内、外抑制效果。方法:以Ad-Apoptin-PEG3p-E1a、Ad-PEG3p-E1a、AdApoptin、Ad-mock(均为前期工作构建)分别感染人结直肠癌SW1116细胞和胃黏膜上皮GES细胞,MTT法检测感染后细胞的增殖水平;流式细胞术检测细胞的凋亡情况;采用DCFH-DA和Rho123染色流式细胞术分别检测细胞活性氧水平和线粒体膜电位,Western blotting检测细胞色素C的释放。建立BALB/c小鼠结直肠癌CT26细胞皮下移植瘤模型,观察Ad-ApoptinPEG3p-E1a对结直肠癌皮下移植瘤的抑制作用。结果:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a抑制SW1116细胞增殖,并具有一定的剂效和时效关系,以MOI=100感染72 h后抑制率达到(56.23±6.64)%,其抑制能力明显强于Ad-p EG3p-E1a和Ad-Apoptin等对照组(均P<0.05)。Ad-Apoptin-PEG3p-E1a感染导致SW1116细胞活性氧水平上调、线粒体膜电位下降以及细胞色素C释放增加,最终诱导SW1116细胞凋亡,凋亡率为(37.97±3.78)%,但对正常GES细胞的上述各项指标均无明显影响。Ad-ApoptinPEG3p-E1a能显著抑制小鼠皮下移植瘤生长(P<0.05);有效延长模型动物平均生存期,Ad-Apoptin-PEG3p-E1a治疗组平均生存期为(41.0±0.7)d,显著高于Ad-PEG3p-E1a的(34.4±1.6)d、Ad-Apoptin的(33.2±1.2)d和Ad-mock的(28.4±1.4)d(均P<0.05)。结论:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a可以特异性有效抑制结直肠癌细胞增殖及皮下移植瘤的生长。

PIGF和PEG3在辅助生殖妊娠与自然妊娠胎盘中的差异表达及临床意义

目的 分析辅助生殖技术(ART)与妊娠并发症及子代不良结局的相关性,探讨ART技术对胎盘生长因子(PIGF)和父系表达基因3(PEG3)的影响。方法 收集2021年9—12月在广东医科大学顺德妇女儿童医院产科分娩的产妇资料,根据妊娠方式分为ART组(经ART获得妊娠,n=113)和自然妊娠组(n=153)。比较两组产妇的基本资料、妊娠期并发症及子代不良结局。分别收集两组的胎盘组织各18例,标记为自然妊娠组(A1-A18)和ART组(B1-B18),HE染色观察两组胎盘组织的形态结构,qRT-PCR检测PIGF和PEG3的mRNA表达水平,Western blot及免疫组化检测PIGF和PEG3的蛋白表达水平及定位,统计分析两组间的差异。结果 与自然妊娠组相比,ART组的产妇年龄、体质量指数(BMI)、剖宫产比例显著上升,产次显著下降(P均<0.05),妊娠期高血压和妊娠期糖尿病(GDM)的发生率显著升高(P<0.05)。ART组的新生儿早产及低出生体重儿比率显著高于自然妊娠组(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,ART组产妇胎盘组织中PIGF的mRNA表达水平显著低于自然妊娠组(P<0.05),而PEG3的mRNA表达水平在两组间无显著性差异(P>0.05)。Western blot结果显示,ART组胎盘组织中的PEG3蛋白灰度值显著低于自然妊娠组(P<0.05),而PIGF蛋白的灰度值有低于自然妊娠组的趋势,但差异尚无统计学意义(P>0.05)。HE染色结果显示,ART组和自然妊娠组胎盘光镜下结构大体正常;免疫组化结果显示,PEG3蛋白主要表达于胎盘合体滋养细胞的细胞膜中,PIGF蛋白主要表达于胎盘的合体滋养细胞的细胞膜和细胞质中。结论 通过ART助孕的产妇,孕期发生妊娠期高血压和GDM的几率增加,且新生儿不良结局发生风险增加;ART助孕影响胎盘组织中PIGF和PEG3 mRNA及蛋白的表达,但是不影响胎盘结构,ART助孕对胎盘的影响还需进一步研究。

携Apoptin和PEG3启动子双特异性重组腺病毒的构建及鉴定

目的利用凋亡素基因(Apoptin)和进行性增量基因3(progression-elevated genes 3,PEG3)构建具有特异性杀伤和特异性复制功能的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a,为研究Ad-Apoptin-PEG3p-E1a的抗肿瘤作用奠定基础。方法从pMT-E1a和pIRES-neo获得目的基因E1a和PolyA并连接入pKS-PEG3p,用XhoⅠ和SpeⅠ双酶切后连接入pAd-Apoptin,获得穿梭载体pacAd-Apoptin-PEG3p-E1a。用pacAd-Apoptin-PEG3p-E1a和腺病毒骨架质粒(pAd5)共转染HEK293细胞,获得重组腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a,利用RT-PCR、Western blot和电镜对重组病毒进行鉴定,采用MTS检测病毒对A549细胞的抑制效果及其对L02细胞的影响;通过绘制一步生长曲线,检测重组毒在细胞内的复制情况。结果构建的重组病毒基因组中含有Apoptin目的基因,电镜下具有正常形态。MTS检测重组腺病毒对A549细胞的抑制作用具有时效和量效关系(P<0.05),抑制作用在100MOI、96h时达峰值为(79.84±1.0)%,对正常细胞L02无显著影响,该双特异性重组腺病毒能够在A549肿瘤细胞内复制,在L02细胞内几乎无复制能力。结论成功包装重组腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a,且该病毒具有肿瘤特异性杀伤和肿瘤特异性复制功能。

饮酒对男性精子印记基因Peg3 DNA甲基化的影响

目的探讨饮酒对男性精子印记基因Peg3 DNA甲基化水平的影响。方法分别于2015年3—4月和2016年3—4月,在山西省妇幼保健院和山西医学科学院山西大医院不孕不育男科门诊中进行婚前检查或孕前检查的就诊者中选取213名健康育龄期男性作为研究对象,分为饮酒组(n=83)和非饮酒组(n=130)。通过结构式问卷,收集研究对象的行为习惯及生活方式等人口学信息资料。使用焦磷酸测序法检测精子印记基因Peg3 DNA甲基化水平。结果饮酒组的人群吸烟率和精子中Peg3 DNA的甲基化率均高于非饮酒组,差异有统计学意义(P<0.05);而2组人群年龄、水产品摄入情况、受教育水平和BMI间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。经多重线性逐步回归分析结果显示,排除混杂因素后,饮酒组男性精子Peg3 DNA甲基化水平较高(P<0.05)。结论饮酒可能会导致男性精子印记基因Peg3 DNA甲基化水平升高。

肝癌细胞HepG2基因表达谱的构建与分析

为从转录组水平识别HepG2与正常肝组织间的基因表达差异,寻找可能参与肝癌发生发展的重要基因,应用基因表达系列分析技术(SAGE)构建了HepG2的基因表达谱.通过DGED软件进行SAGE标签序列的注释,并与NCBI公共数据库中已有的正常肝脏数据进行比较分析,使用KEGG软件对差异表达基因进行功能分类.共发现HepG2与正常肝组织间差异表达的基因733个,其中表达上调的基因主要与MAPK信号传导通路、细胞周期、细胞粘附等相关,下调基因则主要与烟酸/烟酰胺代谢以及凝血和补体功能相关.荧光实时定量RT-PCR证实了在HepG2中表达升高的IGF2BP2和PEG3基因,在原发性肝癌中的表达亦上调(P<0.05),提示该基因可能是肝癌相关基因.