利用聚乙二醇(PEG8000)纯化小球藻病毒FJ-1

为了提取小球藻病毒基因组DNA ,探索利用 3%～ 1 0 %的PEG80 0 0加 3%～ 7%的NaCl沉淀病毒。其中以 7%的PEG和 4%的NaCl沉淀效果最好 ,但其沉淀效率较低。

气相色谱法测定PEG8000中乙酸和乙二醇的残留量

目的建立气相色谱法（GC）测定聚乙二醇（PEG）8000中乙酸和乙二醇的残留量。方法以二甲基亚砜（DMSO）为内标物,用DB-624毛细管柱（30 m×0.32 mm,1.8μm）,以氢火焰离子化检测器（FID）检测;程序升温起始温度为65℃,以10℃·min^-1的速率升温至100℃,再以30℃·min^-1的速率升温至250℃;进样口温度为200℃,检测器温度为300℃;分流进样;氮气为载气,流速为2.0 mL·min^-1。结果当乙酸和乙二醇与DMSO内标物浓度比分别为2.5：1和0.3：1时,乙酸在49.51-495.1μg·mL^-1内线性关系良好（r=0.9997）,乙二醇在6.15-61.52μg·mL^-1内线性关系良好（r=0.9997）;乙酸的平均回收率（n=3）分别为99.3%、100.8%、99.6%,RSD分别为1.4%、1.1%、1.3%;乙二醇的平均回收率（n=3）分别为99.2%、99.0%、99.9%,RSD分别为0.8%、1.9%、1.4%。结论经方法学验证,方法的精密度、重复性、专属性好,可用于PEG8000中乙酸和乙二醇残留量的测定。

融合蛋白ELP30-Trx的表达及PEG8000对其相变温度的影响

目的:研究不同浓度的PEG8000对融合蛋白ELP30-Trx相变温度的影响。方法:将硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)基因克隆到pET28-ELP30-Trx表达载体中,经IPTG诱导在宿主菌E.coli BLR(DE3)中表达ELP30-Trx,通过可逆相变循环(Inverse transition cycling,ITC)纯化融合蛋白。测量相变温度(T t),并检测不同浓度的PEG8000对ELP30-Trx T t的影响。结果:经酶切及测序鉴定证实成功构建了ELP30-Trx表达载体,经Westen-Blot检测表明成功表达ELP30-Trx融合蛋白。经ITC纯化后的ELP30-Trx纯度可达95%以上。5%、10%、15%、20%的PEG8000(W/V)使终浓度为25μmol/L ELP30-Trx的T t从37.9℃分别降低至34.6℃、28.5℃、14.0℃、6.0℃。结论:成功构建、表达融合蛋白ELP30-Trx,PEG8000能显著降低ELP30-Trx相变温度。通过对类弹性蛋白的研究,为类弹性蛋白的扩大应用提供理论依据。

引发对马尾松种子细胞周期和发芽率的影响

采用流式细胞术研究不同引发处理下马尾松种子胚细胞DNA含量的差异,测定不同引发处理下马尾松种子的发芽率。结果表明:(1)PEG 8000溶液引发处理能促进胚细胞DNA的复制,4倍体细胞的比例增加,其中以20%PEG 8000溶液引发3～4 d的处理对种子胚细胞DNA合成的促进作用最明显。(2)胚细胞增殖指数最高的引发处理是20%PEG 8000溶液在15℃时引发3～4 d。(3)较高浓度的PEG 8000溶液和较长的引发时间有利于提高马尾松种子发芽率。(4)在一定范围内,胚细胞增殖指数与种子发芽率呈显著正相关。

重组人乙酰胆碱受体原核表达条件的优化及初步应用

在已建立的重组人乙酰胆碱受体表达质粒的基础上进一步优化试验条件,初步应用于ELISA分析实验性重症肌无力模型(EAMG)中抗体的滴度。取构建好的pET28a(+)-hAChRα1-210经小规模诱导,确定IPTG诱导的最佳浓度为0.006mmol/L,最佳时间为5h,最佳温度为37℃;大规模诱导培养后离心,超声得到菌体沉淀,1mol/L尿素洗涤后8mol/L尿素溶解,过Ni2+亲和层析柱,紫外吸收及Folin酚法确定表达量较多而蛋白最纯的4℃透析过夜,PEG8000浓缩后免疫雌性近交系Lewis鼠构建EAMG,ELISA检测分析模型大鼠血清中抗体的效价。结果表明,制备了大量较纯的rhAChR,并成功应用于ELISA法分析EAMG模型中抗体的滴度。因此,获得的纯化rhAChR可用于构建EAMG模型及鉴定。

培养基成分对黑松体胚发育成熟的影响

【目的】对日本抗性黑松体细胞胚成熟的影响因子进行研究,探究各因素在体细胞胚发生过程中的作用,为进一步提高体细胞胚发生的质量和数量提供理论依据。【方法】胚性细胞团在固体增殖培养基上继代生长10天,使用灭菌(75%乙醇擦拭、紫外灭菌30 min)的电子天平称量1 g胚性细胞团,采用50 mL无菌量筒(紫外灭菌30 min)量取30 mL培养液中于100 mL的三角瓶中,将1 g胚性细胞团转至100 mL的三角瓶中,手动搅拌至细胞团分散,置于90 r·min^(-1)摇床上,25℃黑暗培养7～8天。随后,取3 mL沉淀悬浮细胞进行继代增殖,每星期继代增殖一次至胚性细胞全部均匀散落于培养液。将继代4次的胚性细胞充分摇匀,取2 mL(鲜质量约200 mg)胚性悬浮细胞喷洒在不同组分麦芽糖(30、45、60 g·L^(-1))、脱落酸(ABA)(0、5、10、20、30、50 mg·L^(-1))、聚乙二醇(PEG8000)(0、50、75、100、125、150 g·L^(-1))、活性炭(AC)(1、2、3 g·L^(-1))、琼脂(琼脂6、8、10、12 g·L^(-1),植物凝胶2、2. 5、3、3. 5 g·L^(-1))以及麦芽糖、ABA、PEG 3因素的组合固体成熟培养基上。【结果】以#1337为材料的体细胞胚成熟发育过程中,麦芽糖45 g·L^(-1),获得的体细胞胚数量显著增多。ABA浓度为5～20 mg·L^(-1),体细胞胚数量呈显著上升趋势,ABA为20 mg·L^(-1)时,获得的体细胞胚最多。125 g·L^(-1)PEG8000为体胚发生最佳浓度; AC 2 g·L^(-1)时,胚性细胞形成结构完整、数量较多的成熟体胚;成熟培养基中添加琼脂粉,培养基不能凝固,植物凝胶更适合作为成熟培养基凝固剂。3 g·L^(-1)植物凝胶为抗性黑松体胚发育成熟的最佳浓度。在设计的9种成熟培养基组合中(胚性细胞#1337、#1537、#1637),胚性细胞产生体细胞胚最多的成熟培养基组合为麦芽糖45 g·L^(-1)、ABA 10 mg·L^(-1)、PEG8000 125 g·L^(-1)。在不同的麦芽糖、ABA和PEG组合中,不同无性系生产体细胞胚数量呈现出不同的变化趋势:胚性细胞系#1337体胚发育成熟的最佳组合为麦芽糖45 g·L^(-1)+ABA 10 mg·L^(-1)+PEG 125 g·L^(-1);#1537和#1637体胚发育成熟的最佳组合为麦芽糖30 g·L^(-1)+ABA 10 mg·L^(-1)+PEG 125 g·L^(-1);在3个无性系中PEG的极差最大,对抗性黑松体细胞胚发育成熟的影响最大。【结论】抗性黑松体胚发育成熟过程中,麦芽糖45 g·L^(-1)、ABA20～30 mg·L^(-1)、PEG8000 125 g·L^(-1)、AC 2 g·L^(-1)和植物凝胶3 g·L^(-1)对体细胞胚成熟都具有促进作用。30 g·L^(-1)麦芽糖、10 mg·L^(-1)ABA、125 g·L^(-1)PEG为抗性黑松体胚发育成熟的最佳组合。

聚乙二醇双脂肪酸酯(PEG 8000DS)

聚乙二醇（８０００）双脂肪酸酯（代号ＰＥＧ８０００ＤＳ）分子由疏水－亲水－疏水部分组成，在稀表面活性剂水溶液中形成三元水合网，将表面活性剂束围在其中，胶束由球状转变成棒状，从而使粘度增加，因而它最重要的用途是用于增稠剂。使用时一般先用５０～２０倍的高...