脓毒症大鼠小肠上皮PepT1的表达变化及其与Ghrelin的相关性研究

目的探讨脓毒症对大鼠小肠上皮短肽载体1(PepT1)表达的影响以及PepT1表达与Ghrelin水平的关系。方法雄性SD大鼠48只,随机分为对照组(n=8)和脓毒症组(n=40)。脓毒症组大鼠采用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立脓毒症模型,模型建立后4、8、12、16、20h分别处死8只小鼠,留取小肠黏膜和全血标本。光镜下观察空肠黏膜的病理学变化,ELISA方法检测血清及肠黏膜Ghrelin水平,Real-time PCR及Western Blotting分别检测肠上皮PepT1 mRNA及蛋白的表达。结果 CLP所致脓毒症导致大鼠小肠黏膜明显损伤,主要表现为黏膜短缩、脱落,毛细血管扩张出血和溃疡形成。脓毒症8、12、16、20h各亚组小肠上皮PepT1 mRNA表达水平均较对照组明显下降(P<0.05),但各亚组间表达水平无明显差异(P>0.05);脓毒症12、16、20h亚组小肠上皮PepT1蛋白表达较对照组及脓毒症4h和8h亚组减少(P<0.05);血清和肠黏膜Ghrelin水平均在建模4h时达高峰,之后逐渐下降,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);血清和肠黏膜Ghrelin水平与PepT1蛋白表达均呈正相关(r=0.792、r=0.756,P<0.001)。结论脓毒症时Ghrelin表达水平在短暂上升后显著下降,与小肠上皮PepT1蛋白表达密切相关,可能是导致脓毒症时小肠上皮PepT1表达下降的原因之一。

饥饿再投喂对鳜肌FSRP-1、FSRP-3和肠道PepT1基因表达的影响

为探讨饥饿再投喂对鳜肌FSRP-1、FSRP-3和肠道中PepT1基因表达的影响,本研究采用qRT-PCR技术,测定饥饿7d再饱食一餐后0、1、3、6、12、24、48、96h条件下鳜肌中FSRP-1、FSRP-3和肠道中PepT1基因表达水平的变化,研究结果表明:FSRP-1基因表达在投喂后12h内显著升高(P<0.05),12-48h维持在较高表达水平,48h后显著降低(P<0.05);FSRP-3基因表达在投喂后1h内显著降低(P<0.05),12h达到峰值且表达量是1h的5倍,48h后显著降低(P<0.05);PepT1基因表达在投喂后6h内显著降低(P<0.05),48h时表达量最高。FSRP-1、FSRP-3和PepT1是与鱼类生长相关的重要基因,受饥饿再投喂的影响较大。

崇仁麻鸡小肠PepT1 mRNA基因差异表达

本研究旨在揭示崇仁麻鸡肠道PepT1mRNA的表达规律,为进一步研究小肽在肠道的吸收机理及其肽转运载体的表达分布情况提供基础。以120日龄崇仁麻鸡小肠肠道样品为模板,使用荧光定量PCR法研究肉鸡肠道寡肽转运载体1(Peptide transporter 1,PepT1)mRNA表达的肠段差异性以及十二指肠中高低饲料转化率组PepT1mRNA的表达差异性。结果表明,崇仁麻鸡小肠PepT1mRNA的表达丰度从十二指肠到空肠再到回肠依次降低,其中在十二指肠的表达极显著的高于回肠(P<0.01),而十二指肠与空肠以及空肠与回肠之间差异不显著(P>0.05);在十二指肠中,高饲料转化率组PepT1mRNA表达丰度要高于低饲料转化率组,但是差异不显著(P>0.05)。结果提示,PepT1mRNA主要是在崇仁麻鸡小肠的前段表达,十二指肠是PepT1mRNA表达的主要部位;饲料转化率高,其PepT1mRNA的表达丰度也高。

崇仁麻鸡PepT1基因多态性与饲料转化率的关联分析

试验以60～120日龄崇仁麻鸡为试验材料,根据鸡PepT1基因序列设计引物,采用PCR产物直接测序方法检测PepT1基因单核苷酸多态性,并通过对序列碱基的通读以及峰图的鉴定进行基因型分析,探讨PepT1基因多态性与崇仁麻鸡饲料转化率之间的关系。结果共检测到3个SNP位点,且均为沉默突变。其中在PepT1基因外显子4第95处发生了单碱基的改变(G→A),这个突变产生3种基因型(AA,AB和BB),在PepT1基因外显子6第64处和第70处上发现两处突变(分别是由C→G和A→G),且这两处突变具有同一性,这两个突变产生2种基因型(AA,AB)。用POPGENE 32软件分析PepT1基因的多态信息,PV1位点在崇仁麻鸡上表现为中度多态,PV2位点为低度多态位点,且它们均处于Hardy-Weinberg平衡中。通过SPSS 17.0对崇仁麻鸡PepT1基因各SNPs基因型与饲料转化效率进行相关性分析,发现PepT1基因PV1位点的三种基因型和PV2位点的两种基因型与崇仁麻鸡饲料转化效率均没有显著相关性(P>0.05)。

鸡PEPT1抗原表位基因的原核表达及序列鉴定

根据GenBank的原鸡PEPT1基因保守区序列设计引物,PCR扩增得到PEPT1基因抗原表位区序列,将该序列定向克隆至pET22b(+)载体上,成功构建了pET-22b-PEPT1重组质粒。重组质粒在原核表达宿主Rosetta(DE3)中诱导表达出PEPT1抗原表位区蛋白,纯化的表达产物经过质谱分析鉴定,为进一步生产鸡肽转运载体PEPT1的特异性抗体奠定了基础。

病理状态对肠寡肽转运体PEPT1活性的调节

PEPT1是位于小肠刷状缘膜的寡肽转运体,介导蛋白消化产物(如二肽和三肽)及类肽药物(如β-内酰胺类抗生素)的摄取和转运。营养不良及代谢失调(如高蛋白饮食、禁食和糖尿病)均可引起PEPT1基因和蛋白表达发生变化,一些临床常见病(如溃疡性结肠炎、克罗恩病、短肠综合征)也可诱导肠道PEPT1的表达和功能发生改变。检索PubMed数据库及参考互联网文献,并进行分析综述,探讨不同病理状态对PEPT1活性调节的机制,为患者的营养支持及药物治疗方案提供理论依据。