奶牛乳源大肠杆菌耐药性、毒素基因鉴定及PFGE分型研究

通过采集中国北方地区某荷斯坦牛场生产群牛及乳房炎牛197份样品(195份奶样及2份洗布水样),分离出28株大肠杆菌菌株,并进行细菌药敏试验、毒力基因检测及PFGE分型,为牛场防治大肠杆菌型乳房炎提供数据支持。检测28株大肠杆菌对35种抗生素的敏感性发现,兽用临床抗生素庆大霉素和大观霉素应作为该奶牛场大肠杆菌型乳房炎的主要治疗药物。但该牛场出现了对非兽用广谱抗生素麦迪霉素的耐受性菌株,提示牛场在治疗奶牛大肠杆菌型乳房炎时应该注意用药问题。同时,洗布水样分离出的大肠杆菌的多重耐药性较强,也应引起重视,以便及时切断病菌传播途径。基于本研究在28株大肠杆菌中Ecs3703毒力基因的检出率为100%,证实所分离的大肠杆菌为肠出血性大肠杆菌(EHEC)而非肠毒素大肠杆菌(ETEC)。细菌毒力基因Irp2和CNF2的检出则暗示携带这两类毒力基因的大肠杆菌极可能为奶牛乳房炎致病菌。

北京市宋内氏志贺菌脉冲场凝胶电泳图谱研究

目的研究北京市2005～2006年分离的30株宋内氏志贺氏菌进行脉冲常凝胶电泳图谱特征。方法参照美国疾病预防控制中心PulseNet USA的统一方法进行脉冲常凝胶电泳,并对带型进行命名。采用BioNumerics图像分析软件做聚类分析。结果30株宋内氏志贺氏菌被分成17个带型,主要带型J16N11BJ0001到J16N11BJ0009的聚类相似性为92%,含概菌株占实验菌株总数的67%。结论建立北京市宋内氏志贺氏菌脉冲常凝胶电泳分析方法和初步带型数据库,获得了宋内氏志贺氏菌的主要克隆系。

来自海南等地的17个Bt分离株质粒多样性分析

本研究采用琼脂糖凝胶电泳对分离自海南岛的12个Bt菌株与分离自广西、黑龙江的5株Bt菌株及2株Bt模式菌株进行质粒数量、大小等特征分析。19个供试菌株可区分为16种独特的质粒电泳图谱,充分显示出不同来源Bt菌株的质粒多样性。进一步选择了其中的10个菌株,利用包埋法制备琼脂块进行脉冲场凝胶电泳(PFGE),结果表明苏云金芽孢杆菌大质粒组成特征也具有丰富多样性。但是供试菌株的质粒电泳图谱并未体现与地理和生态特征相关联的特征差异。研究结果初步证实海南分离株S3078-1是一株无内生质粒的Bt菌株,而S3031-1和S3073-1两个分离株仅有一个大质粒存在,这三个分离株将为进一步研究质粒功能提供初始菌株。本研究进一步暗示将琼脂糖凝胶电泳和脉冲场凝胶电泳结合起来研究质粒特征提高了结果的可靠性。

2007年上海市部分嗜肺军团菌血清1型菌株PFGE分型研究

[目的]研究2007年上海市公共场所部分空调冷却塔水中分离出来的嗜肺军团菌1型(Lp1)的基因特征。[方法]从空调冷却塔水中检测到26株Lp1嗜肺军团菌后,使用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)技术对酶切后的Lp1军团菌全染色体DNA进行电泳获得指纹图谱,并用BioNumerics软件对其进行聚类分析。[结果]26株Lp1军团菌可分为15个PFGE型。菌株间相似性系数在30.00%～100.00%之间不等,大部分菌株的PFGE型别差异明显,无优势型别。大部分PFGE型别的菌株来源场所单一;而大部分同一场所来源的军团菌菌株为相同的PFGE型。[结论]2007年上海市公共场所部分空调冷却塔水中分离出来的Lp1军团菌呈现基因多样性。

桂林市腹泻病源沙门菌表型特征及分子分型研究

目的了解2021年桂林市腹泻病源沙门菌菌株表型特征及分子分型特征,建立相关数据库,为桂林市控制沙门菌引起的腹泻病传播和疫情溯源提供实验室有效数据。方法通过对菌株进行血清学鉴定、脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)试验和药物敏感试验3类项目检测,采用国家致病菌识别网信息化平台系统对其结果进行关联研究,确定菌株间的亲缘性。结果2021年来自桂林市3家医院患者的42株沙门菌经生化鉴定及血清凝集试验,得到了11种血清型,其中优势菌有鼠伤寒沙门菌(17株)、伦敦沙门菌(7株)和肠炎沙门菌(5株);药物敏感试验结果显示(16种抗生素):氨苄西林(ampicillin,AMP)(61.90%)耐药率最高,其次是复方新诺明(sulfamethoxazole,SXT)(59.52%)。多粘菌素E(colistin E,ECT)、美罗培南(meropenem,MEM)、厄他培南(ertapenem,ETP)、替加环素(tigecycline,TIG)、阿米卡星(amikacin,AMI)5种为敏感药物,敏感率均为100.00%。多重耐药菌株有28株(66.67%),最多见是4耐药物,耐药谱为氯霉素(chloramphenicol,CHL)-复方新诺明(SXT)-四环素(TET)-氨苄西林(AMP)(7株);耐药种类最高的是8耐,耐药谱为氯霉素(CHL)-复方新诺明(SXT)-头孢噻肟(cefotaxime,CTX)-四环素(TET)-环丙沙星(ciprofloxacin,CIP)-萘啶酸(nalidixic acid,NAL)-氨苄西林(AMP)-氨苄西林/舒巴坦(ampi⁃cillin/sulbactam,AMS);42株沙门菌经过聚类分析可分为38种带型图谱,显示出较大的遗传多样性。结论2021年桂林市腹泻病源沙门菌的血清型主要以鼠伤寒沙门菌、伦敦沙门菌和肠炎沙门菌为主,耐药状况和多重耐药率不容乐观,PFGE带型图谱呈遗传多样性,血清型、耐药谱与PFGE分型无明显关联。

上海市16个冷却塔水中军团菌脉冲场凝胶电泳分型及基因型监测

目的 研究上海市公共场所16个空调冷却塔水中军团菌的脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型,并连续监测该菌基因型变化.方法 2007年5-10月连续6个月以每月1次的频率采样,从16个公共场所空调冷却塔水中分离军团菌,经血清学凝集试验、胶乳凝集试验分型后,使用PFGE技术对酶切后的军团菌全染色体DNA进行电泳获得指纹图谱,利用BioNumerics软件进行聚类分析.结果 16个冷却塔水中共分离出131株军团菌,包括嗜肺军团菌、博杰曼军团菌、米克戴德军团菌和茴香军团菌,分为52个PFGE型别,其中37个PFGE型别（71.15%）仅分布于1个冷却塔中,即为该冷却塔所特有;15个PFGE型别（28.85%）分布于2个或以上冷却塔中.16个冷却塔具有2个或以上的PFGE型,13个冷却塔（81.25%）中多次出现相同的PFGE型别.2007年6-10月连续5个月从6个冷却塔中分离出18株PFGE型为LPAs.SH0078型的军团菌.结论 冷却塔水中的军团菌基因型具有多样性和复杂性,81.25%的冷却塔水中PFGE型具有持续性,且LPAs.SH0078型广泛分布,可能为优势PFGE型.

2010-2017年四川省食品中疑似鼠伤寒沙门菌鉴定和特征分析

目的鉴定鼠伤寒沙门菌和单相变异株,比较其脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型与耐药特征,为鼠伤寒沙门菌和单相变异株病原研究及食源性疾病防控提供依据。方法通过优化鉴定鼠伤寒沙门菌和单相变异株的双重PCR反应条件,对2010-2017年四川省食品中分离的27株疑似鼠伤寒沙门菌进行鉴定,并运用PFGE分析其同源性,采用最小抑菌浓度法(MIC)测定14种药物敏感性。结果运用优化的双重PCR方法,27株疑似鼠伤寒沙门菌经鉴定有14株鼠伤寒沙门菌和13株单相变异株。其中,有71.4%(10/13)单相变异株均来源于生猪肉。鼠伤寒沙门菌PFGE型别呈现出遗传的多样性,而单相变异株主要聚集于SC10型。单相变异株对AMP和TET的耐药率均远高于鼠伤寒沙门菌(P<0.05)。耐3种以上抗菌药物的单相株有6株(46.2%),鼠伤寒沙门菌有5株(35.7%),并且单相株表现出对AMP-TET-NAL有高的耐药率(23.1%)。结论双重PCR方法能准确地鉴定和区分鼠伤寒沙门菌和单相变异株。四川省食品中的鼠伤寒沙门菌和单相变异株在PFGE型别以及耐药上存在差异。单相变异株呈现多重耐药趋势,应加强监测。

东亚飞蝗病原褪色沙雷氏菌的分型分析

对东亚飞蝗的致病性菌褪色沙雷氏菌进行分型研究,为东亚飞蝗的生物学防治研究或可构建基因工程菌的候选菌株。利用血清型分型与脉冲场凝胶电泳分型方法对不同地区及个体的病死蝗虫中分离的10株细菌与模式菌株(ATCC 13880)进行了分析。结果显示,由不同地区及个体中分离得到的褪色沙雷氏菌同源性存在差异性,基因分型相似性在64%~100%之间,存在不同程度的亲缘关系。本试验丰富了褪色沙雷氏菌的生物学性状内容,也为对褪色沙雷氏菌的检验与进一步深入研究提供了具有参考价值的资料。

东亚飞蝗病原褪色沙雷氏菌的分型分析

本研究对东亚飞蝗的致病性菌褪色沙雷氏菌进行分型研究,可为东亚飞蝗的生物学防治研究提供思路。利用血清型分型与脉冲场凝胶电泳分型方法对不同地区及个体的病死蝗虫中分离的10株细菌与模式菌株(ATCC 13880)进行了分析。结果显示,不同地区及个体中分离得到的褪色沙雷氏菌同源性存在差异性,基因分型相似性在64%~100%之间,存在不同程度的亲缘关系。本研究丰富了褪色沙雷氏菌的生物学性状内容,也为对褪色沙雷氏菌的检验与进一步深入研究提供了具有参考价值的资料。