Pfu-sso7d DNA聚合酶的制备及反应缓冲液的研究

目的:制备有高效扩增长片段以及复杂片段能力的Pfu DNA聚合酶。方法:运用基因工程学方法构建重组质粒pET-28a-Pfu-sso7d,采用优化后的诱导条件对pET-28a-Pfu-sso7d实行诱导表达,将菌液超声破碎并提取上清液,应用镍亲和层析洗脱纯化取得较纯Pfu-sso7d DNA聚合酶。采用qPCR方法对酶进行酶活力单位定量、确定反应缓冲液组分最佳浓度及检测自制Pfu-sso7d DNA聚合酶酶活性。结果:在1 mmol·L^(-1) IPTG、16℃条件下诱导Pfu-sso7d DNA聚合酶菌液16 h,Pfu-sso7d DNA聚合酶高效表达;用20~100 mmol·L^(-1)咪唑可将蛋白洗脱。Pfu-sso7d DNA聚合酶最终活力单位定量为1 U·μL^(-1)。PCR最佳反应缓冲液为pH9.0、20 mmol·L^(-1) Tris-HCl、0.6 mmol·L^(-1) MgSO_(4)、50 mmol·L^(-1) KCl、5 mmol·L^(-1)(NH_(4))_(2)SO_(4)、0.1%Triton X-100,添加剂组分为3%DMSO、1 mol·L^(-1)甜菜碱。Pfu-sso7d DNA聚合酶能高效扩增3000 bp的目的条带,活性达到商用高保真DNA聚合酶水平。结论:基于基因重组制备的Pfu-sso7d DNA聚合酶可进行高效的PCR反应,节省了实验室PCR成本,为进一步提高Pfu DNA聚合酶活性提供一定技术参考。

铅锌尾矿废水处理系统中PFU原生动物群落变化特征及其与水质净化的关系

应用国家标准《水质—微型生物群落监测—ＰＦＵ法》对位于广东省韶关的凡口铅锌尾矿废水处理系统中的原生动物群落进行了研究．分析了在该处理系统中原生动物群落的结构和群集过程的特征，并结合水质的理化参数对该处理系统的效能进行了评价．结果表明：在该处理系统中，以动物性鞭毛虫和腐生性纤毛虫为原生动物群落的主要组成部分；随着采样点距排污口的距离延长，原生动物群落的种类数和密度明显增加；群落多样性指数也随之上升．通过对原生动物群落组成与污染物浓度的统计学处理，显示出群落的种类数与各污染物的浓度间存在着显著的负线性相关．各采样点ＰＦＵ原生动物群落群集过程也可以反映出各样点环境间的差异．各采样点数据间的差异说明由于该处理系统中香蒲植物的作用，使得废水中大量的颗粒性悬浮物得到沉降，重金属浓度也明显降低。

广州市区人工湖泊PFU原生动物群落群集过程及其对水质差异的指示作用

应用PFU法 (GB/T12 990 91)对广州市区主要湖泊———流花湖、荔湾湖和麓湖的原生动物群落与水质进行研究 .结果表明 :用PFU法所测定和计算的原生动物群集的种类数、植鞭虫指数、群集参数 (Seq、G、T90 % )、群落多样性指数d和群落污染值 (CPV )等都能较好地指示 3个人工湖泊水质的差异 ,水质由优到劣的排列顺序为麓湖 >荔湾湖>流花湖 .流花湖、荔湾湖和麓湖目前虽仍处于富营养状态 ,但清污截流等对城市湖泊污染的综合治理措施可以减少湖泊外部营养物负荷及沉积物内负荷 ,降低水体的营养盐含量 ,有助于原生动物群落的恢复 .图 3表 3参

利用PFU原生动物群落监测铅锌尾矿人工湿地废水净化效能

利用 PFU (漂浮块 )原生动物群落监测铅锌尾矿人工湿地废水净化效能 ,并与水质的理化分析结果作比较 ,结果表明 ,PFU法和理化分析都证明宽叶香蒲人工湿地对铅锌矿废水具有明显的净化能力。原生动物群落的种类数、密度、生物多样性指数、集群速度均能反映水质状况。其中生物多样性指数更能有效地评价水体质量。

珠江广州市段PFU原生动物群落特征及其与水质的关系

采用国家标准《水质微型生物群落监测—— PFU法》,对珠江广州市段的原生动物群落进行了群落组成和群集过程的研究。共观察到各类原生动物 2 0 3种。其中植物性鞭毛虫 4 4种 ;动物性鞭毛虫 6 4种 ;肉足虫 1 7种和 78种纤毛虫。分析了原生动物群落在该河段的组成特点 ,以及它们与水质变化的关系。结果显示 :原生动物群落特征的变化与水质变化相吻合 ,珠江在流经广州市区后 ,水质发生了明显地恶化 ,原生动物群落受到破坏 ;经过一个较长的流程 ,水质得到了一定程度的改善 ,原生动物群落也有所恢复。

利用PFU原生动物群落多样性快速监测北京通惠河水质

本文报道了北京通惠河原生动物群落多样性特征与永质的相互关系。其中ＰＦＵ原生动物１天的群集速度（功能参数）较好地反映了５个采样站（１个设在较干净水体温榆河作为对照站）水质的变化趋势。各站原生动物群落的结构参数（种类组成、个体丰度、生物量和多样性指数）的差异同样与水质关系密切。通过与８０年代中期作者利用ＰＦＵ原生动物监测通惠河污染现状和自净效能的研究资料进行比较，表明该河流水质目前得到明显的改善。

PFU原生动物群落生物监测的生态学原理与应用

原生动物是水生生态系统食物链中重要环节 ,发挥着十分重要的生态功能作用。在水环境质量变化评价与发展趋势预测中 ,与其它较高等生物类群比较 ,PFU原生动物群落在水质监测应用方面显示了诸多优点。系统地阐述了原生动物在水生生态系统中的地位与作用 ,重点介绍了原生动物评价水体污染的生态学基础及其优点和 PFU原生动物群落特征及其在水质监测应用中的优势。通过对国内外不同水质类型 PFU原生动物群落生物监测的典型案例研究 ,进一步论证了

利用PFU法研究拉萨河城区段春季藻类群落特征及其与水质的关系

为研究拉萨河城区段春季藻类群落特征及其与水环境之间的关系,2015年春季在拉萨河城区段设置了5个样点,采用PFU法采集水样,用活体观察法鉴定藻类的物种,并使用直接计数法对藻类的数量进行统计,同时结合藻类群落特征与水体理化因子对拉萨河城区段的水质进行综合评价。共鉴定出藻类120种,隶属于6门9纲15目30科57属,其中硅藻门(52.50%)>绿藻门(27.50%)>蓝藻(10.83%)>裸藻门(5.00%)>黄藻门(3.33%)>隐藻门(0.83%),水体显示为贫营养型。群落平均多样性指数较高(3.12),优势度不明显,物种分布均匀,表明水生态环境稳定。各样点相似度较低,具有局部地域性差异,通过群落参数指标与水体理化因子间的二元变量相关性结果表明,水流速度是影响春季藻类的主要理化因子。根据藻类群落参数与水体理化指标得出水环境质量为Os-βms(寡污-β中污),表明拉萨河城区段水环境整体状况良好。

PFU微型生物群落水质鉴别及群落参数变化模式的研究

基于PFU微型生物群落参数调查数据,对湖北省汉江两条污染带11个站点和湖南常德市水系15个站点所属水质组别进行了综合分析研究.所得典型鉴别函数能够对水质组别作出有效的鉴别,分类函数对站点的水质组别分类正确率达到96%;群落参数对化学综合污染指数(P)的响应不呈简单的线性关系,群落参数的变化存在一定模式.提出了“转折区”(turninginterval)概念.水质由洁净到严重污染的变化过程中,在转折区内,微型生物群落的5个参数与P的相关性将发生根本性改变:D和Seq与P由正相关转变为负相关,T90%由负相关转变为正相关,HI和G相关性的显著程度发生改变.本研究显示,这个转折区存在于水质污染区段.

用PFU微型生物群落监测技术评价化工废水的静态毒性

化工废水的排放是导致水环境毒物污染的重要来源,以原生动物为靶生物的微型生物群落监测——PFU法因能快速而真实地评价水体受污染程度而被广泛应用。盐城沿海化工园区是至今江苏省环保部门批准建设的苏北地区规模最大的以发展精细化工和医药化工为主导的专业园区,以该园区附近清洁水源中的原生动物为种源,用PFU法评价该园区化工废水的静态毒性。结果表明,原生动物群落对化工废水效应浓度(EC)变化非常敏感。在低的化工废水EC下,原生动物群落群集的物种多样性指数和群集种类均随毒性时间的延长而快速增加,群集速度也较快;随着化工废水EC的增加,原生动物群落群集的物种多样性指数随毒性时间的延长而增加缓慢甚至下降,群集种类则明显减少,群集速度也减缓,说明化工废水EC有较强的生物胁迫效应。在反映原生动物群集过程的3个参数Seq、G和T90%中,Seq与化工废水EC均呈负相关,而G随化工废水EC增加先呈负相关后呈正相关。根据其回归方程Seq=-0.141 EC+19.05(R2=0.941,P<0.01)推算出该化工废水的效应浓度EC5、EC20和EC50分别为7.1%、27.3%和67.7%。最终确定盐城沿海化工园区化工废水对其附近清洁水源原生动物群落的安全浓度为7.1%,最大允许浓度为27.3%。盐城沿海化工园区化工废水必须处理至其毒性削减72.7%以上才能排放。

重组pfuDNA聚合酶的表达及扩增条件优化

从Pyrococcus furiosus总DNA扩增出pfu DNA聚合酶基因,克隆到表达载体pPRoEX HTb,转化大肠杆菌DH5α。经IPTG诱导表达后,用热变性和(NH4)2SO4沉淀去除部分杂蛋白,粗酶液依次经Ni柱、肝素柱和DNA柱进一步纯化,获得了高纯度的重组pfu酶,并对重组酶的扩增条件进行了优化。结果显示,重组酶的最佳扩增条件为:pH 8.75、Mg2+浓度为2.0 mmol/L、温度为72℃,利用该酶成功扩增出4.5 kb的DNA片段。

利用PFU原生动物群落监测北京排污河净化效能的研究

应用PFU方法采集微型生物群落,监测北京排污河不同河段污染压迫和净化效能。五次野外生态群集试验,共采集到60种原生动物。6个采样站微型生物种类组成和数量分布存在明显的时空差异。原生动物对不同河段水质变化的反映,可用群集速度来表示。无论野外生态群集试验和室内原污水的毒性试验,还是群集过程中S_(e q)、G、t90％三个功能参数的分析,及其与水质化验数据比较,其结果均基本一致。PFU方法较准确地反映了北京排污河水体的生态效应和净化过程。

用PFU法快速监测汉沽污水库净化效能的研究

用PFU法对汉沽污水库污水净化效能进行了监测。结果表明,微型生物的群集速度较好地反映了污水库的净化过程。室内毒性试验与野外生态试验所显示的结果较为相符。PFU法与其它常规监测方法比较,结果基本一致,且具有快速、准确和简易的优点。

PFU采样法在环境微生物教学实验中的应用

针对环境微生物学实验教学中环境微型生物种类观察实验存在的问题,参考国家标准（GB/T12990-91）,《水质——微型生物群落监测——PFU法》采用PFU法进行实地微型生物取样用于环境微型生物形态观察,在实验教学中取得了理想的效果.

PFU微型生物群落监测中异养性指数的应用研究及其分形分析

对常德和汉江的异养性指数(HI)进行了分形分析,表明异养性指数在二维空间分布具有自相似性.异养性指数数据点与化学综合污染指数(P)数据点在双对数坐标中分段拟合时,当常德和汉江的LogP分别小于0 602和0 493时,常德和汉江的分形维数分别为0 39332和0 74110;当常德和汉江的LogP大于0 602和0 493时,常德和汉江的分形维数分别为0 30678和0 27239.拐点的出现表明异养性指数的变化在两个尺度域内遵从着不同的规律.拐点尺度以前,分维数较高,表明群落组成复杂,群落所受污染压迫较小.拐点以后,分维数较低,表明群落组成逐渐简单,群落所受的污染压迫较大.因此对异养性指数的分形研究,可以较好的反映微型生物群落在受到不同的污染压迫时,群落组成从复杂到简单演替过程中的动力学过程.另外,在水质微型生物群落监测方法(PFU)的4个生物参数中,除异养性指数外,其它3个参数都要求有原生动物分类基础,在显微镜下用活体鉴定种类,要求仔细观察,不能遗漏种类,对分析人员的技能要求高.但异养性指数(HI)靠仪器测定,易于掌握.

用PFU原生动物群落进行生物监测的研究

应用PFU法收集微型生物群落,监测鸭儿湖的农药污染。原生动物对五个氧化塘内农药废水的毒性反应,可用群集过程来表示,无论室内或是野外试验,结果基本一致。其中微型生物群落的结构参数有原生动物种类组成和种数、叶绿素a含量、水细菌数量;功能参数有反映原生动物群集过程中的S_(eq)、G、t_(90％)和微型生物的呼吸速度。功能和结构的参数均能较准确地反映出氧化塘系统的净化过程。PFU法可应用于预报污染物的生物效应浓度,初认为是一种经济、快速、正确的生物学监测方法。

DNA聚合酶基因pfu的克隆及初步表达

通过分子克隆技术从嗜热极端微生物Pyrococcusfuriosus中克隆出高热稳定性的 pfuDNA聚合酶基因 ,琼脂糖凝胶电泳显示基因片段的长度为 2 .3kb ,将其转化入大肠杆菌中并获得初步表达 .重组酶成功地扩增了 80 0bp的DNA片段 .

新型DNA聚合酶-Pfu酶的研究

介绍了PCR技术的发展历程,阐述了DNA聚合酶对于PCR技术发展的重要性。比较了各种DNA聚合酶如Taq、Vent、Pwo和Pfu酶的性能,从而显示新型DNA聚合酶-Pfu酶的性能优势,并指出完善Pfu酶仍需努力的方向。

基于PFU原生动物群落多样性的开封市不同水域水质评价结果

基于PFU原生动物群落多样性指数分析法对开封市5个水域的水质状况进行评价.结果显示,开封市郊水系中共有原生动物33种(属),其中纤毛虫类占绝对优势有21种,鞭毛类11种、肉足类1种.5个采样点的化学和生物分析法结果一致,生物多样性指数依次为柳池(清园湖(龙亭湖(包公湖(黄汴河,说明柳池水质最好,黄汴河最差.