人OCTN2原核表达载体PGEX-2T-OCTN2的构建及意义

目的选取并克隆人特异性OCTN2基因片段,构建原核表达载体PGEX-2T-OCTN2。方法应用RT-PCR方法从人附睾组织中克隆特异性人OCTN2基因片段,通过双酶切方法把OCTN2基因片段克隆到PGEX-2T载体,再经双酶切和测序鉴定。结果获取并克隆特异性人OCTN2的基因片段,构建原核表达载体PGEX-2T-OCTN2。结论成功构建原核表达载体PGEX-2T-OCTN2,为进一步研究附睾肉碱转运机制奠定前期基础。

人睾丸前列腺素D合成酶的原核表达

目的：将获得纯化的重组人睾丸前列腺素D合成酶(L-PGDS)用于基础和临床研究. 方法：在原核表达系统中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒pGEX-2T/htL-PGDS的表达,用谷胱甘肽琼脂糖珠亲和并纯化重组融合蛋白GST/htL-PGDS,再用凝血酶裂解融合蛋白,从而获得纯化的重组L-PGDS.对表达纯化重组蛋白的质粒进行DNA测序,并对重组蛋白进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,鉴定其是否为所需目的蛋白. 结果：用IPTG诱导重组质粒pGEX-2T/htL-PGDS表达的最佳浓度为1 mmol/L,最佳时间为4 h.在此基础上获得的融合蛋白用凝血酶裂解后获得单一纯化的重组蛋白L-PGDS,最佳裂解时间为2 h.SDS-PAGE和DNA测序证实,所获的重组蛋白确系所需目的蛋白. 结论：用上述方法可获得纯化的人睾丸L-PGDS.

几种miniprep提取质粒DNA方法的比较与改良

目的比较并建立一种简单的、稳定的质粒DNA提取改良方法,探讨其在分子生物学实验研究中的应用价值。方法采用琼脂糖凝胶电泳对质粒DNA提取的试剂盒法、煮沸法、碱裂解法、碱裂解结合酚氯仿法四种方法进行比较。结果试剂盒法的电泳谱带亮度最高且无RNA条带,煮沸法、碱裂解法、碱裂解结合酚氯仿法的电泳谱带亮度依次增高。结论试剂盒法制备DNA纯度最高,且操作简便省时。