卵巢癌中PGRMC1基因表达与微血管密度的关系

目的:检测人卵巢癌组织中PGRMC1(progesterone receptor membrane eonponent-1)基因表达情况,探讨PGRMC1基因在卵巢癌发生发展过程中的作用。方法:利用免疫组织化学方法检测78例不同病变卵巢组织蜡块中PGRMC1基因及蛋白表达情况;以TBP(TATA box binding protein)为内源性对照基因,利用实时定量PCR方法检测了10例正常新鲜卵巢组织和30例新鲜卵巢癌组织中PGRMC1基因的mRNA表达水平。结果:采用免疫染色强度加着色面积的积分标准判断免疫组织化学结果,与正常卵巢(0.20±0.71)及卵巢良性肿瘤组(0.75±1.12)相比,卵巢交界性肿瘤中PGRMC1蛋白表达(3.60±1.14)和卵巢癌(7.30±2.12)显著增高(P<0.01)。实时定量PCR方法证实卵巢癌组PGRMC1 mRNA表达(3.526±1.386)显著高于良性卵巢病变组(0.936±0.725)(P<0.01),是良性卵巢病变组织表达的3.51倍。PGRMC1蛋白阳性表达的卵巢组织中,正常卵巢组MVD为(18.6±6.7)条;良性卵巢病变组MVD为(20.9±7.9)条;交界性卵巢肿瘤组MVD为(22.4±4.7)条;卵巢癌组MVD为(28.4±8.1)条,卵巢癌组与正常卵巢组、良性卵巢肿瘤组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:PGRMC1高表达可能与卵巢癌的发生、发展有关,并可能促进血管生成。

稳定转染PGRMC1基因的小分子干扰RNA对卵巢癌细胞体外增殖的影响

目的观察稳定转染PGRMC1基因的小分子干扰RNA(siRNA)对卵巢癌COC1细胞体外增殖的影响。方法实验分为3组,重组载体组即由pcDNA3.1A-PGRMC1质粒转染COC1细胞;空载体组即仅转染空载体pcDNA3.1A质粒;空白组即未转染质粒组。3组均经抗性筛选获得稳定转染的细胞系。采用RT-PCR技术检测3组细胞中PGRMC1 mRNA的表达;四甲基偶氮唑盐比色法观察细胞增殖情况,绘制细胞生长曲线;裸鼠接种3组细胞后观察其成瘤能力的变化。结果 (1)重组载体组细胞中PGRMC1 mRNA转染前、后的表达水平分别为(79.6±2.3)%和(29.4±1.6)%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05);空载体组和空白组PGRMC1 mRNA转染前、后表达水平分别比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)重组载体组COC1细胞增殖速度明显慢于空载体组和空白对照组(P<0.05);(3)接种转染后的COC1细胞后,重组载体组裸鼠的成瘤时间为(5.8±0.7)d,明显短于空载体组的(11.9±0.5)d和空白对照组的(12.6±0.9)d,差异均有统计学意义(P<0.05);而空载体组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。接种5周后,重组载体组裸鼠的肿瘤重量和体积分别为(0.7±0.4)g和(197±26)mm3,明显低于空载体组[(2.3±0.4)g和(785±38)mm3]和空白对照组为[(2.5±0.8)g和(896±22)mm3],差异均有统计学意义(P<0.05)。结论PGRMC1 siRNA可显著降低卵巢癌细胞中的PGRMC1表达,并对卵巢癌细胞的生长有抑制作用。

山羊PGRMC1基因序列分析及表达特性分析

旨在克隆获得山羊PGRMC1基因序列,并明确该基因的生物学特征,阐明其在山羊各组织及诱导分化不同阶段皮下脂肪细胞中的表达模式.利用RT-PCR技术克隆获得山羊PGRMC1基因序列,通过生物信息学方法分析其生物学特性;通过实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)技术检测其在各个组织及不同分化阶段皮下脂肪细胞中的表达水平.结果显示,克隆得到山羊PGRMC1基因序列1 024 bp,其中CDS区585 bp,共编码194个氨基酸,是主要定位于细胞质、细胞核以及线粒体的酸性亲水性不稳定蛋白;分析显示山羊PGRMC1的核苷酸序列与其他物种如绵羊、牛、猪、羊驼、猩猩、人、马、猫、骆驼、狐狸相似程度为88.79%~99.69%不等,说明该基因在不同物种中具有高度保守性;构建进化树显示,山羊PGRMC1与绵羊亲缘关系最近,与马的亲缘关系最远,符合物种进化规律;组织表达谱显示,PGRMC1在山羊心、肝、脾、肺、肾、背最长肌中广泛表达,其中在肝脏中的表达量极显著高于其他组织(P<0.01),其次是在背最长肌和脾脏中的表达水平较高且显著高于肝脏之外的组织(P<0.05);时序表达谱显示,山羊PGRMC1基因在成脂诱导分化96 h的皮下脂肪细胞中的表达量最高,显著高于其他各个时间点的表达水平(P<0.05).本研究将为揭示山羊PGRMC1调控皮下脂肪细胞分化的具体作用机制提供理论依据.

牦牛和黄牛PGRMC1基因的克隆及在繁殖相关组织中的表达比较研究

【目的】孕激素受体膜组分1 (PGRMC1)在动物繁殖活动中有重要调节作用,本研究旨在探讨牦牛PGRMC1基因的序列及其在生殖轴的组织表达特性。【方法】试验采集5头牦牛和5头黄牛的下丘脑、脑垂体、卵巢、输卵管和子宫,以GenBank上已发布的普通牛PGRMC1基因序列设计引物,采用RT-PCR方法克隆牦牛和黄牛的PGRMC1基因,并使用相关的生物信息学软件对克隆所得序列进行分析;采用qRT-PCR法检测该基因在牦牛和黄牛不同组织中的表达情况。【结果】结果得到牦牛和黄牛PGRMC1基因cDNA序列(GenBank登录号:MF803753和MF803754),编码区(CDS)全长都为585 bp,编码194个氨基酸。其编码蛋白中含有1个Cyt-b5保守结构域。qRT-PCR结果表明:PGRMC1基因在牦牛和黄牛下丘脑、脑垂体、卵巢、输卵管和子宫都有表达,牦牛和黄牛的垂体中的PGRMC1的表达差异显著(P<0.05),但在其他组织品种间差异不显著;牦牛PGRMC1在卵巢和垂体的表达量显著高于其他组织(P<0.05)。【结论】本研究提示PGRMC1基因可能在牦牛卵泡发育、发情、排卵等繁殖机能调控中发挥重要作用。