小鼠PGRP-L分子PGRP结构域基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的克隆小鼠长型肽聚糖识别蛋白(PGRP-L)的PGRP结构域基因并在大肠杆菌中表达。方法采用RT-PCR技术,从Balb／C小鼠肝组织总RNA中扩增PGRP-L的PGRP结构域基因片段,将其克隆入pUCm-T载体,以PCR、酶切和测序进行鉴定。以PCR从含PGRP结构域基因的重组质粒中扩增目的基因片段,插入表达质粒pQE-30构建重组表达质粒,转化大肠杆菌M15,诱导表达并纯化目的蛋白。结果 RT-PCR扩增得到约500bp的基因片段,将其与pUCm-T 载体连接构建成重组质粒pmPGRPd,其酶切图谱与计算机分析结果一致,该基因片段长518 bp,序列与Genbank中相应基因序列相同。构建成重组表达载体pQE-PGRPd,在大肠杆菌M15中表达,表达产物主要存在于菌体裂解液上清中,为一相对分子质量约29 000的可溶性蛋白。结论成功克隆并原核表达了小鼠PGRP-L分子PGRP结构域基因,为 PGRP-L分子的研究奠定了一定基础。