羊膜衍生膜负载干细胞通过PI3K/MAPK修复及优化软骨损伤的评估

目的探讨人羊膜衍生膜(human acellular amniotic membrane,HAAM)负载干细胞通过PI3K/MAPK修复及优化软骨损伤的作用。方法新西兰白兔分离出骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)并与软骨细胞按4∶1接种于HAAM上,接种后7 d和14 d观察软骨细胞的修复及优化情况。细胞计数CCK-8法检测软骨细胞的存活率;TUNEL法检测软骨细胞凋亡发生;Western Blot法检测软骨细胞中Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原,磷酸化蛋白p-PKC、p-p38、p-JNK和p-ERK蛋白表达水平。结果与对照组相比,实验组细胞存活率显著升高,细胞凋亡显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,实验组中Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原含量显著增加;PI3K/MAPK信号通路磷酸化蛋白含量变化明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论羊膜衍生膜负载骨髓间充质干细胞可以修复和优化软骨的损伤,且PI3K/MAPK信号通路在此过程中有重要作用。

益肺宣肺降浊方通过EGFR调节PI3K/Akt-MAPK/Erk通路改善血管性痴呆大鼠的记忆

目的 探讨益肺宣肺降浊方通过表皮生长因子受体(Objective Epidermal growth factor receptor, EGFR)调节PI3K/Akt-MAPK/Erk通路改善对血管性痴呆(VaD)的作用及机制。方法 建立大脑中动脉栓塞法(Middle Cerebral Artery Occlusion, MCAO)大鼠血管性痴呆模型;给予益肺宣肺降浊方联合PTEN、EGFR和MAPK抑制剂,进行行为学实验,并运用Western Blot、免疫荧光、电镜透射等技术检测益肺宣肺降浊方对VaD可能通过PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路作用机制进行探索。结果 益肺宣肺降浊方呈剂量依赖性改善VaD大鼠的记忆能力及脑海马组织的病理、降低神经元凋亡。上调EGFR激活PI3K/Akt信号通路与MAPK/Erk信号通活性。结论 益肺宣肺降浊方对VaD大鼠的作用可能通过VEGF受体EGFR调节PI3K/Akt信号通路与MAPK/Erk信号通活性,以及PI3K/Akt与raf1-MAPK/Erk的串扰作用,增强Erk1/2磷酸化,进而促进神经细胞存活、神经元形态,最终达到修复记忆能力,治疗血管性痴呆的作用。

射干提取物对AOM/DSS诱导小鼠炎症相关性肠癌模型中MAPK及PI3K的影响

目的探讨射干提取物对AOM/DSS诱导小鼠炎症性相关肠癌模型中MAPK及PI3K的影响。方法选用SPF级6~8周龄雄性C57BL/6小鼠120只,通过氧化偶氮甲烷(AOM,12.5 mg/kg)联合葡聚糖硫酸钠(DSS,2.5%),化学诱导法建立炎症性相关肠癌模型,灌胃给予射干提取物4个月后,眼眶取血法获得血液样本,Elisa方法检测小鼠血清丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷酸肌醇3激酶(PI3K)的含量。结果Elisa结果显示,与空白组比较,模型组MAPK值与PI3K值明显升高(P<0.05),射干提取物各剂量组均可不同程度降低AOM/DSS模型小鼠血清中MAPK值及PI3K值。结论射干提取物可能通过降低AOM/DSS模型小鼠血清中MAPK和PI3K的含量,来抑制炎转癌的发生。

利拉鲁肽通过PI3K/Akt和MAPK/ERK通路促进心肌微血管内皮细胞的增殖和迁移

目的研究胰高血糖素样肽-1类似物利拉鲁肽对原代大鼠心肌微血管内皮细胞（CMECs）增殖和迁移的影响及其机制。方法使用双酶消化法体外分离培养SD大鼠心肌微血管内皮细胞,差速贴壁法进行纯化,CD31和Ⅷ因子抗体进行免疫细胞化学染色鉴定。采用不同浓度利拉鲁肽（0~1000 nmol/L）干预1代细胞,MTT绘制细胞生长曲线,Western blot检测利拉鲁肽对PI3K/Akt和MAPK/ERK通路的激活作用,Brd U荧光标记法和划痕实验观察药物作用下细胞增殖和迁移能力,并使用相应的通路阻断剂LY294002和PD98059来进一步证实。结果体外分离原代CMECs,CD31及Ⅷ因子免疫荧光染色示双阳性率大于95%,MTT示细胞于种植48 h后进入对数生长期,利拉鲁肽以浓度依赖方式促进CMECs的体外增殖,100 nmol/L为其最适生长浓度（P〈0.05）。予以100 nmol/L利拉鲁肽预干预细胞24 h后,Western blot显示胞内Akt和ERK磷酸化水平与正常细胞组相比有明显升高（P〈0.05）,加入相应通路阻断剂LY294002和PD98059,其磷酸化水平相较于利拉鲁肽组明显降低（P〈0.05）。Brd U和划痕实验均说明利拉鲁肽能促进CMECs的增殖和迁移能力（P〈0.05）,使用LY294002和PD98059预处理后,增殖迁移能力均显著低于利拉鲁肽组（P〈0.05）。结论利拉鲁肽是通过激活胞内PI3K/Akt和MAPK/ERK通路从而促进原代大鼠心肌微血管内皮细胞的增殖和迁移。

PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路对胰腺癌PANC-1细胞VEGF表达的影响

目的:探讨PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路对人胰腺癌PANC-1血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:抑制剂LY294002和PD98095分别处理人胰腺癌PANC-1细胞,Western blotting检测细胞VEGF蛋白表达。结果:分析表明LY294002和PD98095处理后的PANC-1细胞的磷酸化AKT、磷酸化ERK1/2及VEGF蛋白表达水平均明显低于对照组VEGF(P<0.05)。结论:抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2细胞信号通路能够下调VEGF蛋白表达,进而抑制肿瘤新生血管的生成及浸润转移能力。

SDF-1通过PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路对人微血管内皮细胞功能产生影响

目的 :观察基质细胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)对人微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cell line-1,HMEC-1)功能的影响,并对相关机制进行初步探讨,从而明确SDF-1在糖尿病血管病变中的作用。方法:体外培养HMEC-1,分别在培养基中加入不同浓度的SDF-1(0、25、50、100μg/L),Western blot检测HMEC-1中PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路的活化情况,MTT和流式细胞分析检测HMEC-1增殖和凋亡能力的变化情况,划痕愈合实验检测HMEC-1迁移能力的变化情况。采用PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路抑制剂LY294002和U0126阻断HMEC-1中PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路后,再以SDF-1处理HMEC-1,MTT和流式细胞分析检测HMEC-1增殖和凋亡能力的变化情况;划痕愈合实验检测HMEC-1迁移能力的变化情况。结果:Western blot结果显示,25μg/L的SDF-1处理即可显著活化HMEC-1中的PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路,且随着SDF-1处理浓度的升高,PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路活化水平逐渐升高。同0μg/L的SDF-1处理组相比,25、50、100μg/L的SDF-1均可显著加强HMEC-1的增殖和迁移能力(P<0.01),并抑制HMEC-1的凋亡水平(P<0.01),且这种作用具有剂量依赖性。当采用LY294002和U0126阻断HMEC-1中的PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路后,SDF-1促HMEC-1增殖和迁移能力及抑制HMEC-1凋亡的能力均显著降低(P<0.01)。结论:SDF-1可通过活化PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路,进而促进HMEC-1的增殖和迁移,并抑制HMEC-1的凋亡水平,从而在糖尿病血管病变中发挥一定的作用。

乳腺癌细胞与巨噬细胞融合对PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路的影响

为揭示细胞融合与肿瘤转移之间的分子机制,在前期已经成功构建乳腺癌细胞与巨噬细胞融合模型,发现融合细胞的增殖与转移能力显著增强的基础上,重点分析乳腺癌细胞与巨噬细胞融合对肿瘤细胞增殖转移密切相关的PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路的影响。Western Blot实验结果表明PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路的关键标志蛋白p-PI3K、p-AKT和p-ERK1/2在融合细胞中的表达显著上调,经LY294002和PD98059抑制剂阻断PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路后,融合细胞中p-AKT和p-ERK1/2的表达明显下降,而且融合细胞的增殖、迁移和侵袭能力均受到抑制。结果提示乳腺癌细胞与巨噬细胞融合可能通过激活PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路促进乳腺癌增殖与转移,这也为进一步明确细胞融合在肿瘤发生转移中的作用机制提供新的思路。

增龄和高血压经PI3K/Akt和MAPK信号通路间平衡介导调控血管平滑肌细胞的表型转换

目的探究增龄和高血压对胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)表型转换的影响及磷脂酰肌醇激酶(PI3K/Akt)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对VSMC表型的调控。方法选取1、3、9、16月龄的雄性Wistar Kyoto大鼠(WKY)和自发性高血压大鼠(SHR)各12只,尾动脉无创测定血压,取各组大鼠的胸主动脉进行实验。HE染色测量胸主动脉的管壁厚度;免疫组织化学染色检测VSMC表型标志蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMactin)、调宁蛋白、骨桥蛋白(OPN)的表达和分布;Western blot检测VSMC表型标志蛋白α-SM-actin、调宁蛋白、OPN及信号蛋白p-Akt、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、p-42/44ERK、p-p38MAPK的表达量。结果 HE染色结果显示,增龄导致管壁厚度增加,且在9月龄时WKY和SHR出现显著差异(P<0.01)。免疫组织化学染色和Western blot结果表明,3月龄后,WKY和SHR的α-SM-actin、调宁蛋白表达量随月龄增加出现下调,而OPN出现上调;p-Akt、eNOS的蛋白表达量随月龄增加逐渐下调,p-42/44ERK、p-p38MAPK蛋白表达量随月龄增长逐渐上调,且3月龄时两组已有显著差异(P<0.01)。结论增龄和高血压均导致大鼠胸主动脉VSMC收缩表型标志蛋白α-SM-actin、调宁蛋白的表达下调,合成表型标志蛋白OPN的表达上调,二者的交互作用更显著。VSMC的表型转换可能是通过PI3K/Akt和MAPK信号通路间的平衡作用进行调控的。

落新妇苷通过激活PI3K/AKT信号通路和抑制P38MAPK信号通路减轻H2O2诱导的PC12细胞损伤

目的研究落新妇苷对H 2O 2诱导的氧化应激损伤的PC12细胞影响。方法将PC12细胞分为5组:对照组、H 2O 2组及不同浓度(1μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)落新妇苷组。采用CCK8实验检测各组细胞的活力;Annexin V-FITC/PI细胞凋亡实验检测各组细胞凋亡率;Western blot检测PI3K、AKT、Caspase3和P38蛋白及其磷酸化激活蛋白的表达水平。结果与H 2O 2组相比,落新妇苷组细胞的活力显著提高,细胞凋亡率明显降低,活化的凋亡相关蛋白Cleaved Caspase3表达水平降低,PI3K/AKT途径相关蛋白p-PI3K和p-AKT的表达水平升高,P38 MAPK途径重要蛋白p-P38的表达水平降低。结论落新妇苷对H 2O 2诱导的氧化应激损伤的PC12细胞有明显保护作用;这种保护作用可能是通过激活PI3K/AKT信号通路及抑制P38MAPK信号通路实现的。

高良姜素通过PI3K/Akt及p38-MAPK信号通路增强胃癌SGC-7901细胞对阿帕替尼的敏感性

目的探讨高良姜素对阿帕替尼抗胃癌作用的影响及可能机制。方法体外培养胃癌SGC-7901细胞,3-( 4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(M TT)法筛选出高良姜素和阿帕替尼抑制胃癌细胞增殖的合适浓度。将胃癌细胞分为4组:空白对照组、高良姜素组、阿帕替尼组和高良姜素+阿帕替尼组。MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;细胞划痕实验和Transwell小室实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;Westernblot检测细胞凋亡及PI3K/Akt及p38-MAPK信号通路相关蛋白表达。结果阿帕替尼和高良姜素均显著抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,并呈浓度依赖性(P<0 .05), 20mg/L阿帕替尼和300mg/L高良姜素是最佳的干预浓度。与20mg/L阿帕替尼组相比,高良姜素+阿帕替尼组可以明显抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。流式细胞术结果显示,高良姜素+阿帕替尼组对胃癌SGC-7901细胞促凋亡作用明显优于20mg/L阿帕替尼组(P<0.05)。Westernblot结果显示,高良姜素+阿帕替尼组Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化蛋白激酶B( p-Akt)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)蛋白表达明显高于20mg/L阿帕替尼组,B淋巴细胞瘤-2( Bcl-2)蛋白明显低于20mg/L阿帕替尼组(P<0 .05)。结论高良姜素可能通过抑制PI3K/Akt和激活p38-MAPK信号通路增强阿帕替尼抗胃癌SGC-7901细胞的作用。

MAPK与PI3K-AKT-mTOR通路双重抑制对去势抵抗性前列腺癌的作用机制研究

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)与磷脂酰肌醇3-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K-AKT-m TOR)通路双重抑制对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)的作用机制。方法采用Western blot检测细胞中前列腺癌细胞(DU145和LNCa P)的细胞外信号调节激酶5(ERK5)、m TOR含量。应用RNA干扰(RNAi)技术建立基因降表达细胞模型,分别建立ERK5降表达、m TOR降表达、ERK5和m TOR同时降表达细胞模型。MTT法检测不同基因降表达对前列腺癌细胞的增殖的影响。比较CYP17A1在m TOR降表达DU145细胞和正常细胞中的表达。MTT法检测分别加入m TOR抑制剂(替西罗莫司)和CYP17A1抑制剂(阿比特龙)的DU145细胞的抑制率。采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定ERK5和m TOR在前列腺癌、前列腺增生和CRPC组织中的表达。结果m TOR蛋白在DU145细胞中的表达显著高于LNCa P细胞(P<0.05)。ERK5降表达组、m TOR降表达组、ERK5+m TOR降表达组的LNCa P细胞的增殖未受显著抑制(P>0.05)。m TOR降表达组、ERK5+m TOR降表达组的DU145细胞抑制率显著高于ERK5降表达组(P<0.05)。CYP17A1在m TOR降表达DU145细胞中的表达显著低于正常DU145细胞,且呈剂量依赖(P<0.05)。替西罗莫司1μmol/L+阿比特龙0.5μmol/L组的DU145细胞抑制率显著高于单用替西罗莫司组和单用阿比特龙组(P<0.05)。ERK5和m TOR在前列腺癌和CRPC组织中均高表达,m TOR在CRPC组中的表达水平显著高于前列腺增生组和前列腺癌组(P<0.05)。结论m TOR蛋白在DU145细胞中、CRPC组织中表达显著高于ERK5,m TOR降表达能显著抑制DU145细胞增殖。提示CRPC以PI3K-Akt-m TOR通路高表达为主,m TOR对DU145细胞的抑制作用与其对CYP17A1的抑制作用有关,m TOR联合CYP17A1的抑制作用优于m TOR或CYP17A1的单独抑制。

迷迭香酸衍生物RAD-9通过PI3K/Akt和p38 MAPK信号通路诱导胃癌MGC-803细胞凋亡

目的研究迷迭香酸衍生物RAD-9诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的作用及其机制。方法 MTT法观察RAD-9对胃癌MGC-803细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞的凋亡;Hoechst 33258染色法观察RAD-9对MGC-803细胞核凋亡形态学的影响;Western blot检测RAD-9干预MGC-803细胞36 h后,对Akt、p-Akt、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3的影响。结果MTT结果显示,RAD-9呈时间、浓度依赖性抑制胃癌MGC-803细胞增殖;流式细胞术结果显示,RAD-9对胃癌MGC-803细胞有明显的促凋亡作用(P<0.01);Hoechst 33258染色实验结果显示,RAD-9干预胃癌MGC-803细胞36 h后,细胞核呈现典型凋亡形态学改变;Western blot结果显示,RAD-9干预胃癌MGC-803细胞36 h后,Bcl-2蛋白表达水平明显降低,Bax、caspase-3蛋白表达水平明显提高,Akt、p-Akt蛋白表达水平明显下调,p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达水平明显上调(P<0.01)。结论 RAD-9能抑制胃癌MGC-803细胞生长,且能诱导其凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt和激活p38 MAPK信号通路相关。

芦荟大黄素衍生物AE-YJ通过PI3K-Akt/NF-κB和MAPK/NF-κB途径抑制LPS诱导RAW264.7细胞炎症介质的释放

目的以RAW264.7细胞为研究对象,采用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞建立体外炎症模型,探究芦荟大黄素衍生物AE-YJ的抗炎活性及作用机制。方法MTT法测定RAW264.7细胞活力;Griess法检测RAW264.7细胞的NO释放量;ELISA法检测RAW264.7细胞培养上清液中PGE2、TNF-α、IL-6和IL-1β含量;RT-PCR检查IL-6、IL-1β和COX-2的mRNA表达;Western blot法检测RAW264.7细胞中iNOS、COX-2、IκBα、p65、Akt、ERK、JNK和p38的蛋白表达;免疫荧光法检查p65蛋白的核易位情况。结果相同等剂量下,AE-YJ显示出比AE更强的抗炎活性;AE-YJ减少炎症介质(NO、PGE2、TNF-α、IL-6 IL-1β)的产生,降低iNOS和COX-2的蛋白表达,发挥抗炎活性。AE-YJ减少Akt的磷酸化,降低IκBα降解和p65核易位,阻碍NF-κB的活化;此外,AE-YJ还降低MAPK途径中ERK、JNK、p38的磷酸化。结论AE-YJ的抗炎活性优于AE,其作用机制可能是通过抑制PI3K-Akt/NF-κB和MAPK/NF-κB途径减少LPS诱导的RAW264.7细胞中炎症介质的产生。

PI3K和MAPK抑制剂对胃肠道间质瘤细胞系GIST-T1细胞增殖和凋亡的影响

目的研究胃间质瘤中(磷脂酰肌醇-3-激酶)PI3K和(丝裂原活化蛋白激酶)MAPK信号通路对FOXO1的活性调节及胃间质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法采用PI3K信号通路抑制剂LY294002和MAPK信号通路特异性抑制剂UO126单独或联合处理细胞,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;Western blot检测FOXO1、p-FOXO1蛋白及信号下游蛋白Bcl2、Bax表达的变化;免疫荧光法检测FOXO1蛋白在GIST-T1细胞中的细胞定位的变化。结果与DMSO组相比,LY294002和UO126单独、联合处理组GIST-T1细胞增殖明显受到抑制(P<0.05),且呈时间依赖性。Western blot结果显示,总FOXO1蛋白表达水平未见显著变化,而p-FOXO1及Bcl2蛋白表达下降(P<0.05),Bax蛋白的表达增加(P<0.05)。免疫荧光显示FOXO1在GIST-T1细胞中的细胞核移位明显增多。LY294002和UO126联合处理GIST-T1细胞较药物单独应用时作用效果显著增强(P<0.05)。结论 LY294002和UO126能够抑制GIST-T1细胞增殖;PI3K和MAPK信号通路能通过调节FOXO1蛋白磷酸化水平,使其转录活性受到抑制,进而抑制Bcl2的表达,增加Bax的表达,且2种抑制剂作用效果具有协同效应。

从PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路探讨复方当归注射液对拟缺血神经元的作用

[目的]探讨复方当归注射液(CAI)干预拟缺血损伤脑微血管内皮细胞(BMECs)后的条件培养液对拟缺血损伤神经元的影响及作用机制。[方法]原代培养SD大鼠BMECs及皮层神经元,免疫荧光鉴定两种细胞,收集正常BMECs条件培养液(N-CM)、拟缺血损伤BMECs条件培养液(I-CM)及CAI低、中、高剂量干预后的拟缺血损伤BMECs条件培养液(IC-CM,1.25、2.5、5μL/mL),分别作用于正常神经元和拟缺血损伤神经元,用CCK8法检测各组神经元活性、蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)信号通路Akt的磷酸化水平[磷酸化Akt(p-Akt)/Akt]、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(Erk)信号通路Erk的磷酸化水平[磷酸化Erk(p-Erk)/Erk]。[结果]与N-CM处理组相比,I-CM处理组神经元活性显著降低(P<0.01)、Akt磷酸化水平下降(P<0.05)、Erk磷酸化水平显著上升(P<0.01);CAI干预后IC-CM低剂量处理组神经元活性、Akt磷酸化水平高于I-CM处理组(P<0.05),IC-CM中、高剂量处理组神经元活性、Akt磷酸化水平显著高于I-CM处理组(P<0.01),各IC-CM处理组较I-CM处理组的Erk磷酸化水平变化不明显(P>0.05)。[结论]CAI可通过干预拟缺血损伤内皮细胞进而对拟缺血损伤神经元达到保护作用,该保护作用可能与活化PI3K/Akt信号通路存在相关性,与MAPK/Erk信号通路关联不大。

基于神经元细胞内MAPK、PI3K和Nrf2信号通路的砷与胆红素配伍减毒机制研究

目的以雄黄和牛黄中的主要成分为研究对象,探讨砷和胆红素对神经元细胞内Nrf2/HO-1、MAPK、PI3K/Akt信号通路的影响,为雄黄的神经毒性机制研究及雄黄与牛黄配伍解毒机制的研究提供实验基础。方法以小鼠海马神经元细胞系HT-22为受试对象,MTT法建立砷暴露模型和胆红素保护剂模型;利用蛋白免疫印迹法分别检测iAs^(3+)(5、10、15μmol/L)、胆红素(0.125、0.25、0.5μmol/L)及二者联处理后Nrf2/HO-1、MAPK、PI3K/Akt、BAX/Bcl 2的蛋白表达水平。结果选择15μmol/L作为砷染毒的最高剂量,胆红素对砷毒性有较强的拮抗作用。与对照组比较,iAs^(3+)组p-Nrf2、Nrf2、HO-1、p-JNK、JNK、p-p38、p-PI3K、p-Akt表达水平显著升高(P<0.05);胆红素对Nrf2、HO-1、JNK、p38、PI3K、Akt蛋白表达无显著影响(P>0.05);与iAs^(3+)组相比,砷与胆红素联合作用组p-Nrf2、HO-1、p-JNK、p-p38、p-PI3K水平显著降低(P<0.05)。iAs^(3+)组及胆红素组ERK磷酸化水平显著低于对照组(P<0.05);砷与胆红素联合作用组ERK蛋白表达水平与iAs^(3+)组相比差异无统计学意义(P>0.05)。随着iAs^(3+)剂量的增加,Bcl 2蛋白表达水平降低,BAX表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与iAs^(3+)组相比,砷与胆红素联合作用组Bcl 2表达水平显著上调(P<0.05),BAX表达水平显著下调(P<0.05)。结论砷可以影响ERK、JNK、p38、PI3K/Akt、Nrf2/HO-1蛋白的表达,促进神经元凋亡。牛黄中胆红素抗氧化活性较强,对砷诱导的神经毒性具有拮抗作用,其机制为胆红素对砷引起的JNK、p38、PI3K、Nrf2/HO-1水平的升高有拮抗作用,进而抑制神经元细胞的凋亡,对砷具有配伍解毒作用。

嗜酸乳杆菌胞外蛋白调控MAPK和PI3K-AKT信号途径关键蛋白活化水平

探讨并揭示嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CICC6005分泌的相关蛋白质促进肠道健康及分子机制具有重要研究价值。本实验在确定了L.acidophilus CICC6005分泌的胞外蛋白抑制HT-29结肠癌细胞增殖的基础上,进一步探讨67 ku和37 ku的胞外蛋白通过何种途径发挥抑制结肠癌细胞增殖。研究以HT-29细胞作为靶细胞,用丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)和磷脂酰肌醇-3激酶-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-kinase-protein kinase B,PI3K-AKT)信号通路为考察对象,以Western Blotting为手段,分析两个通路中关键的靶点蛋白p38、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、磷酸化p38(phosphorylated p38,p-p38)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)、磷酸化的细胞外信号调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated AKT,p-AKT)、PI3K的表达水平,以探讨并阐述源于L.acidophilus CICC6005胞外蛋白调控结肠癌细胞增殖状况的分子机制。结果表明,不同质量浓度的67 ku和37 ku胞外蛋白分别作用HT-29细胞一定时间后,两种胞外蛋白均具有下调两个信号通路途径中p-ERK1/2、p-p38、p-AKT、PI3K蛋白的表达,且存在浓度依赖关系;但对p-JNK、ERK1/2、p38、JNK蛋白的表达没有影响。因此,源于L.acidophilus CICC6005分泌的37 ku和67 ku胞外蛋白表现出显著的抑制HT-29细胞增殖的功能,其机制可能与调控MAPK和PI3K-AKT两个信号通路中几个关键的靶点蛋白的活化水平相关。该研究结果提示,食用嗜酸乳杆菌其分泌的胞外蛋白质将达到维护肠道健康的目标。

探讨MAPKs和PI3K信号通路在胃癌中的作用及意义

目的通过检测胃癌及癌旁组织中Akt,ERK1/2,Bcl-2及NF-κB的表达,探讨MAPKs和PI3K信号通路之间的关系及其在胃癌发展过程的作用。方法应用免疫组织化学技术检测62对胃癌及癌旁组织中Akt,ERK1/2,Bcl-2和NF-κB蛋白的表达情况。结果胃癌中Akt,ERK1/2,Bcl-2及NF-κB蛋白的阳性表达率均高于其癌旁组织,差异具有统计学意义(P均<0.05)。胃癌组织Akt蛋白表达与ERK1/2蛋白表达呈正相关(rs=0.272,P=0.026),结论 MAPKs信号通路、PI3K信号通路激活与胃癌的发生发展密切相关。

PI3K/Akt和MAPK信号通路平衡在运动调控高血压血管平滑肌表型转换中的作用

目的:探究PI3K/Akt(磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B)和MAPK(丝裂原活化蛋白激酶)信号通路间平衡在有氧运动调控高血压平滑肌表型转换中的作用。方法:选取3月龄雄性Wistar-Kyoto大鼠(WKY)和自发性高血压大鼠(SHR),随机分为安静组[WKY-SED(正常血压)、SHR-SED(高血压)]、有氧运动组[WKY-EX(正常血压)、SHR-EX(高血压)]。运动组进行8周55%~65%V.O2max强度的跑台运动,观察有氧运动对高血压大鼠胸主动脉管壁厚度、平滑肌标志蛋白和信号蛋白表达的影响。结果:1)与WKY-SED组相比,SHRSED组SBP显著升高(P<0.01),WKY-EX组SBP显著下降(P<0.05)。与SHR-SED组相比,SHR-EX组SBP显著下调(P<0.01)。2)与WKY-SED组相比,SHR-SED组胸主动脉管壁厚度明显增加(P<0.01),WKY-EX组无显著性差异;与SHR-SED组相比,SHR-EX组胸主动脉管壁厚度显著降低(P<0.05)。3)与WKY-SED组相比,SHR-SED组平滑肌收缩表型标志蛋白(α-SM-actin、calponin)蛋白表达显著下调,而合成表型标志蛋白(OPN)显著上调(P<0.01),WKY-EX组无显著性差异。与SHR-SED组相比,SHR-EX组α-SM-actin、calponin的蛋白表达显著上调,而OPN的蛋白表达显著下调(P<0.05)。与WKY-SED组相比,SHR-SED组p-Akt、eNOS的蛋白表达显著下调(P<0.01),p-ERK、p-p38的蛋白表达显著上调(P<0.01),WKY-EX组p-Akt(P<0.05)、eNOS(P<0.01)的蛋白表达呈上调趋势。与SHR-SED组相比,SHR-EX组p-Akt(P<0.05)、eNOS(P<0.01)的蛋白表达显著上调,p-ERK和p-p38(P<0.05)的蛋白表达显著下调。结论:有氧运动可抑制高血压大鼠VSMC由收缩表型向合成表型转换,且VSMC的表型可能是通过PI3K/Akt和MAPK通路之间的平衡作用进行调控的。

水溶性番茄浓缩物Fruitflow通过调控血小板PI3K/Akt和MAPKs信号通路抑制其活化、聚集及血栓形成

[目的]血小板过度活化可促进血栓以及心血管疾病的发生发展,水溶性番茄浓缩物Fruitflow作为膳食补充剂在预防心血管疾病中发挥重要作用,但机制未明,且尚无Fruitflow对血栓形成影响的研究.本研究拟探讨Fruitflow对健康人血小板聚集、活化及血栓形成的影响,并探索其可能的作用机制.[方法]用不同浓度(0、20、40、80 mg/L)的Fruitflow与健康成人血小板在体外共孵育,使用血小板聚集仪测定血小板聚集率;用流式细胞仪测定血小板表面αIIbβ3活化及纤维蛋白原结合率;用体视荧光显微镜观察FeCl3诱导的小鼠肠系膜动脉血栓模型中血栓的形成;通过小鼠剪尾实验测定出血时间;用Westernblot检测血小板Akt、Erk1/2、JNK总蛋白表达及其磷酸化水平.[结果]在ADP诱导下,20、40、80 mg/L的Fruitflow均可有效降低血小板聚集率,且效应呈剂量依赖性,其中80 mg/L的Fruitflow干预组血小板聚集率从对照组的(43.75±5.91)%降到了(8.25±4.57)%(P<0.001);与对照组(79.36±6.26)相比,Fruitflow明显抑制血小板αIIbβ3的活化,其中80 mg/L剂量组降至(65.79±5.73,P<0.01);与对照组(69.34±6.63)相比,仅80 mg/L Fruitflow可明显降低血小板Fibrinogen binding百分比(56.70±8.68,P<0.05);Fruitflow可抑制FeCl3诱导的肠系膜动脉血栓形成,80 mg/L Fruitflow干预后血管堵塞时间由对照组的(22.50±4.86)延长至(39.20±4.61,P<0.01),同时与对照组(5.95±0.69)相比,80 mg/L Fruitflow干预组的出血时间(5.74±0.76)无明显变化(P>0.05);Fruitflow下调血小板Akt、Erk1/2和JNK蛋白的磷酸化水平,与对照组相比,80 mg/L Fruitflow干预后P-Akt/Akt由0.97±0.07降至0.33±0.13(P<0.001),P-Erk1/2/Erk1/2由0.89±0.09降至0.24±0.02(P<0.01),P-JNK/JNK由0.97±0.12降至0.45±0.04(P<0.01).[结论]抑制血小板PI3K/Akt和MAPKs信号可能是Fruitflow抑制血小板聚集活化和血栓形成的机制之一.