microRNA-30c沉默对P19细胞增殖及分化的影响

目的通过沉默microRNA（miRNA）-30c研究miRNA-30c对P19细胞增殖及分化功能的影响。方法将成功构建的miRNA-30c沉默质粒（miRNA-30c沉默组）与空载质粒（阴性对照组）通过lip02000法分别转染P19细胞，荧光表达观察质粒转染效率；通过杀稻瘟菌素Blasticidin筛选出miRNA．30c沉默稳定表达的P19细胞株；使用双荧光素酶报告基因间接验证成功沉默稳定表达的P19细胞株；细胞增殖（CCK-8）法检测细胞增殖活性；使用二甲基亚砜（DMSO）诱导P19细胞分化；倒置显微镜观察细胞分化形态变化；使用聚合酶链反应检测心肌分化标志基因（cTnT、NKX2．5、GATA4）的核酸表达水平。结果通过荧光表达观察到质粒成功转染入P19细胞；双荧光素酶报告基因提示miRNA-30c沉默显著解除了miRNA-30c对靶基因Gf口的抑制作用，细胞株成功建立（P〈0．001）；P19细胞分化过程中，倒置显微镜观察到miRNA-30c沉默组跳动心肌细胞的数量及频率均低于阴性对照组；检测心肌标志物发现miRNA-30c沉默组心肌细胞分化数量、标志基因表达均显著低于阴性对照组（P均〈0．05）。结论miRNA-30c沉默可以显著抑制P19细胞增殖功能，并抑制其向心肌细胞的分化，为其用于心脏发育的进一步研究奠定基础。