6-姜酚基于PKB/KIF14信号通路对大鼠口腔黏膜愈合的作用

目的探讨生姜提取物6-姜酚对实验性口腔溃疡大鼠黏膜愈合的促进作用,及其对蛋白激酶B(PKB)/驱动蛋白家族成员14(KIF14)信号通路的调节作用。方法将50只大鼠随机分为正常组、模型组、6-姜酚组、信号通路抑制剂(LY294002)组和LY294002联合6-姜酚组,每组10只,除正常组外,其余组大鼠用冰醋酸烧灼法建立口腔溃疡模型,6-姜酚组大鼠尾静脉注射6-姜酚6 mg·kg^(−1),LY294002组大鼠尾静脉注射LY2940020.3 mg·kg^(−1),LY294002联合6-姜酚组大鼠尾静脉注射LY2940020.3 mg·kg^(−1),30 min后,尾静脉注射6-姜酚6 mg·kg^(−1);每日1次,连续7 d。计算溃疡面积,HE染色观察病理学变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)水平,实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)水平,蛋白印迹法(Western blotting)检测磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、PKB和KIF14蛋白的相对表达量。结果模型组大量炎性细胞浸润,黏膜上皮细胞坏死脱落,无新生成纤维细胞;6-姜酚组黏膜上皮覆盖,溃疡趋于愈合;LY294002组大量炎性细胞浸润,上皮结构被破坏,黏膜上皮细胞脱落坏死;LY294002联合6-姜酚组炎性细胞浸润减少,病变较6-姜酚组减轻。与模型组比较,6-姜酚组大鼠溃疡面积减小,IL-6、TNF-α、IL-1β水平及MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达量降低,p-PI3K、p-PKB以及KIF14的相对表达量升高;LY294002组溃疡面积增加,IL-6、TNF-α、IL-1β水平以及MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达量升高,p-PI3K、p-PKB及KIF14的相对表达量降低(P<0.05);与LY294002联合6-姜酚组比较,6-姜酚组大鼠溃疡面积减小,IL-6、TNF-α、IL-1β水平及MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达量降低,p-PI3K、p-PKB及KIF14的相对表达量升高;LY294002组溃疡面积增加,IL-6、TNF-α、IL-1β水平及MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达量升高,p-PI3K、p-PKB及KIF14的相对表达量降低(P<0.05)。结论生姜提取物6-姜酚可促进口腔溃疡大鼠创面愈合,其可能是通过激活蛋白激酶B/驱动蛋白家族成员14信号通路发挥作用的。

Akt/PKB信号通路与胃癌的相关研究进展

最初自AKR小鼠胸腺瘤细胞株中分离出一株具有转化能力的逆转录病毒AKT8,并将病毒基因组中非病毒序列定义为病毒癌基因v-akt.而后病毒癌基因akt及人类同源物AKT1、AKT2被分子克隆,同时检测到一例原发性胃癌AKT1扩增20倍[1].v-akt及其人类同源物编码的蛋白激酶与蛋白激酶C、蛋白激酶A相似,又被称为蛋白激酶B(PKB).Akt/PKB作为磷酸肌醇3激酶(P13K)的下游效应器参与调节细胞生理活动,如细胞生存与凋亡、增殖和代谢等.信号通路中的成员出现异常时.如P13K或Akt基因扩增、磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)突变或杂合子丢失等,可促进肿瘤的发生发展.近年Akt/PKB信号通路正逐渐成为肿瘤发生机制及治疗的研究热点,其中也包括胃癌.……

NGF对哮喘小鼠气道阻力和肺组织Akt/PKB表达的影响

目的探讨NGF介导的Akt/PKB信号转导通路在哮喘小鼠发病中的作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法随机分为正常对照组、哮喘组、NGF阻断组。利用An iRes2005肺功能仪测小鼠气道阻力,运用免疫组织化学方法测定Akt/PKB的组织表达,M etamoph图像分析系统对结果进行分析。结果哮喘小鼠吸气阻力和呼气阻力明显高于正常组小鼠(P<0.01),NGF阻断组小鼠吸气阻力和呼气阻力明显低于哮喘组。免疫组织化学染色结果显示哮喘组Akt/PKB在肺组织炎性细胞的表达及AK t/PKB阳性炎症细胞数明显多于正常对照组(P<0.05),而NGF阻断组则明显低于哮喘组(P<0.05)。结论NGF介导哮喘气道高反应和炎症反应,Akt/PKB参与了哮喘发病中NGF介导的信号传导。

抑制PI3K/PKB通路逆转胃癌耐药的作用及其机制

目的观察抑制PI3K/PKB信号通路对胃癌耐药性的逆转作用,并探讨其可能机制。方法通过体内外实验方法检测长春新碱(vincristine,VCR)及联合LY294002(PI3K/PKB通路抑制剂)对SGC7901/VCR细胞的生长抑制作用;采用Western blot及RT-PCR分别检测细胞中PKB、磷酸化PKB的蛋白表达水平及MDR1、Bax、Bcl-2基因表达水平;流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果LY294002能明显增加SGC7901/VCR细胞对VCR的敏感性,促进VCR诱导细胞凋亡,使其耐药指数从40.45降至8.50;LY294002可明显降低耐药细胞中磷酸化PKB的蛋白表达和MDR1、Bcl-2的基因表达水平(P<0.01),促进Bax的基因表达(P<0.01);体内实验显示联合用药组的裸鼠移植瘤大小明显小于VCR组(P<0.01)。结论抑制PI3K/PKB通路可逆转胃癌耐药,其机制可能与降低耐药基因MDR1的表达以及调控相关凋亡基因Bax和Bcl-2的表达有关。

蛋白激酶B(PKB/Akt)的结构、调控与功能

原癌基因编码的蛋白质丝/苏氨酸激酶PKB/Akt在细胞代谢、细胞存活、细胞周期调控、转录调控等多种生物学过程中发挥着重要作用。该文综述了PKB/Akt的结构、调控机制及功能。

过度训练和补糖对大鼠骨骼GLUT4和PKb活性的影响

通过过度训练和补糖观察在过量运动后的不同血糖和肌糖原条件下大鼠骨骼肌的糖转运和PKb活性的变化,旨在从分子水平探寻过度训练的发生机制,为研发预防过度训练的手段和方法提供理论依据。

活血降脂保肝汤对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织Nrf2、PKB表达的影响

目的探讨活血降脂保肝汤对非酒精性脂肪肝大鼠的保肝降脂作用及该药方在治疗过程中可能的作用机制。方法将健康雄性SD大鼠60只随机分为6组,即正常组,模型组,活血降脂保肝汤低、中、高剂量组,强肝片组。除正常组外,其余各组给予高脂饮食。于第12周末采集血清标本检测各组大鼠天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平,以及观察大鼠肝组织病理变化、核因子相关因子-2(Nrf2)、蛋白激酶B(PKB)的表达情况。结果与正常组比较,模型组TC、TG、ALT、AST均显著增高,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,中药各剂量组及强肝片组TC、TG、ALT、AST水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);免疫组化检测结果显示:与正常组比较,模型组Nrf2表达水平升高,PKB表达水平降低,差异无统计学意义;与模型组比较,中药各剂量组及强肝片组Nrf2、PKB表达显著增强,差异有统计学意义(P<0.01),并以中药高剂量组尤为明显。大鼠肝脏病理切片显示活血降脂保肝汤可明显减轻肝细胞肿胀、脂肪变性及炎症细胞浸润。结论活血降脂保肝汤具有调节脂质代谢紊乱,有效逆转非酒精性脂肪肝模型大鼠肝组织脂肪变性的程度,改善大鼠血脂、肝功能,并上调组织中Nrf2、PKB表达的作用.这可能是其防治非酒精性脂肪肝病的作用机制之一。

PI3K/PKB信号通路在TGF-β_1诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白中的作用

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白(OPN)的调控作用。方法:体外培养LX-2人肝星状细胞株,予TGF-β1(终浓度2.5、5、10、20μg/L)刺激24 h或予TGF-β1(终浓度10μg/L)刺激12 h、24 h、48 h;先经PI3K/PKB信号通路特异性抑制剂wortmannin(0.1μmol/L)预处理1 h,再予10μg/L TGF-β1刺激24 h,收集细胞,采用real-time PCR及Western blotting法检测OPN表达情况。结果:TGF-β1能够促进LX-2细胞表达OPN,在一定浓度和时间范围内,其表达量随着TGF-β1浓度和时间的增加而增加,呈剂量和时间依赖性关系;经wortmannin预处理再予TGF-β1刺激的LX-2细胞,与对照组相比,OPN表达受到明显抑制(P<0.01)。结论:TGF-β1对LX-2人肝星状细胞OPN表达具有诱导作用,此作用可能受PI3K/PKB信号通路的调控。

PKB/Akt:一个具有多种功能的蛋白激酶

蛋白激酶B(protein kinase B, PKB)是细胞信号传导过程中的一个重要的中间体。在过去10多年的研究中,发现它不仅参与调节细胞糖代谢、细胞增殖、细胞凋亡,而且与糖尿病和癌症的发生也有关。目前PKB的相关调控机制还未得到完全阐明。在此,作者谨就PKB的一些研究进展作一介绍。

神经酰胺阻断剂对高糖培养的人脐静脉血管内皮细胞PKB/eNOS信号通路的影响

目的观察神经酰胺阻断剂对高浓度葡萄糖培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)胰岛素信号通路PKB/eNOS mRNA表达的影响。方法高浓度葡萄糖培养HUVECs的基础上加用神经酰胺合成阻断剂Myriocin、DES或神经酰胺降解阻断剂NOE或PDMP干预,RT-PCR分析血管内皮细胞中IRS-1/PI3K/PKB/eNOS mRNA表达的变化。结果高浓度葡萄糖培养血管内皮细胞,对IRS-1、PI3K mRNA表达无明显影响,但能抑制PKB、eNOS mRNA表达(P<0.05);神经酰胺合成阻断剂Myriocin或DES均能改善高糖对内皮细胞PKB、eNOS mRNA表达的影响(P<0.05);神经酰胺降解阻断剂NOE或PDMP均加强高糖对PKB、eNOS mRNA表达的抑制(P<0.05)。结论神经酰胺与高糖引起的胰岛素信号通路下调有关,机体内神经酰胺水平的改变直接影响内皮细胞胰岛素信号转导通路PKB/eNOS mRNA的表达。

PKC、PKB通过p21^(CIP1/WAF1)蛋白对小鼠受精卵G2期向M期转换的影响

目的:探讨在小鼠受精卵中,PKC及PKB是如何通过p21CIP1/WAF1蛋白影响小鼠受精卵G2/M的转换。方法:以小鼠受精卵为材料,通过Westernblot及免疫荧光的方法,检测经PKC及PKB抑制剂处理后的p21蛋白表达及定位。结果:经PKC抑制剂(PMA)处理后的小鼠G2期受精卵中p21蛋白表达增加,而经PKB抑制剂(LY294002)处理后的p21蛋白表达没有变化,但是其在亚细胞的定位发生了改变。结论:PKC通过改变p21蛋白表达,影响小鼠受精卵G2/M转换。而PKB通过改变p21蛋白在小鼠受精卵中的亚细胞定位,影响受精卵G2/M转换。

银屑病皮损中PKB、NF-κBp65、Bcl-xL的表达及相关性研究

目的探讨PKB、NF-κBp65、Bcl-xL与寻常型银屑病发病的相关性。方法采用S-P免疫组织化学法检测30例寻常性银屑病患者皮损及10例正常人皮肤石蜡包埋组织标本中PKB、NF-κBp65、Bcl-xL的表达与定位。结果与正常对照组相比,银屑病皮损角质形成细胞中PKB、NF-κBp65、Bcl-xL的表达均明显上调,其差异有统计学意义(P<0.05)。在银屑病皮损组织角质形成细胞中,随着PASI评分的增加,PKB、NF-κBp65、Bcl-xL的表达逐渐增强,其表达水平与患者PASI评分之间均存在正相关,有统计学意义(P<0.01)。PKB与NF-κBp65、PKB与Bcl-xL、NF-κBp65与Bcl-xL之间的表达水平均存在正相关,有统计学意义(P<0.01)。结论 PKB、NF-κBp65、Bcl-xL可能与银屑病发病及银屑病疾病严重程度有关。

AKT/PKB在肿瘤发生、发展过程的作用及其机制

P13KAKT／PKB细胞信号传导通路参与调节肿瘤细胞的增殖、存活、迁移、黏附、肿瘤血管生成等过程，与肿瘤的发生发展密切相关。AKT又称蛋白激酶B（PKB），是一种丝氨酸／苏氨酸激酶，是体内重要的凋亡抑制蛋白，在生长因子刺激细胞生长过程中可见到AKT／PKB的活化和高表达。

高住低练对大鼠骨骼肌PI3K/PKB/mTOR信号通路基因表达的影响

目的:探讨高住低练对大鼠骨骼肌PI3K/PKB/mTOR信号通路基因表达的影响。方法:40只8周龄SD大鼠适应训练后,随机分为低住安静组(LC)、低住低练组(LoLo)、高住安静组(HC)和高住低练组(HiLo)。高住组每天低氧暴露12 h(氧浓度13.6%,相当于海拔3500 m),低练组进行35 m/min、1 h/d、5 d/周、共4周的跑台训练。采用实时荧光定量PCR检测大鼠腓肠肌PI3K、PKB、mTOR mRNA表达,以双因素方差分析进行统计。结果:低氧和运动均显著提高大鼠骨骼肌PI3K和PKB mRNA表达(P<0.01),但低氧和运动无显著交互作用(P>0.05);运动显著提高大鼠骨骼肌mTOR mRNA表达(P<0.01),低氧却显著降低mTOR mRNA表达(P<0.01),且低氧和运动有交互作用,显著降低mTOR mRNA表达(P<0.01)。结论:低氧和运动促进PI3K和PKB基因表达,低氧抑制而运动促进mTOR基因表达;HiLo训练促进PI3K和PKB基因表达,却抑制mTOR基因表达。不同条件下PI3K/PKB/mTOR信号通路基因表达水平不一致。

NGF-TrkA-SH2-Bβ-Akt/PKB信号通路与哮喘

NGF-TrkA-SH2-Bβ-Akt/PKB这一信号通路参与神经细胞分化和增殖,也参与哮喘炎症反应和气道高反应。AKT/PKB是一种分子量约60kD的丝/苏氨酸激酶,有3种亚型,在许多组织中表达的量不同。AKT/PKB通过直接或间接影响3个转录因子家族(Forkhead、CREB、NF-κB),促使Bad,caspase-3和caspase-9磷酸化,抑制糖原合成酶激酶-3(GSK3)活性等作用。NGF与TrkA结合,通过调节SH2-Bβ及其下游蛋白Akt/PKB参与哮喘发病。

石斛合剂基于PKB/FoxO1通路抑制糖尿病大鼠肝糖异生的机制研究

目的观察复方石斛合剂对糖尿病大鼠肝PKB/FoxO1信号通路分子蛋白表达的影响,探讨其抑制肝糖异生的分子机制。方法随机选取11只雌性Wistar大鼠为正常组,其余36只大鼠高脂高糖饲料喂养,6周后腹腔注射STZ 2次。按糖尿病诊断标准,筛选出糖尿病成模大鼠33只,再随机分为模型组、二甲双胍组、石斛合剂组,每组11只。给药12周后,检测空腹血糖(FBG)、血清空腹胰岛素(FINS)、游离脂肪酸(FFA);免疫组化检测各组的肝脏的胰岛素受体(InsR)、叉头框蛋白O1(FoxO1)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)表达情况。Western blot检测各组大鼠肝组织PKB、p-PKB、FoxO1、p-FoxO1的蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组FBG、FINS、FFA明显升高(P<0.01);与模型组比较,石斛合剂组FBG、INS、FFA显著下降(P<0.05或P<0.01);石斛合剂组与二甲双胍组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化结果显示石斛合剂能促进InsR表达,抑制PEPCK和FoxO1的表达(P<0.05)。Western blot结果显示石斛合剂组p-PKB/PKB、p-FoxO1蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01);FoxO1表达减少(P<0.01)。结论石斛合剂能抑制肝糖异生,调节糖脂代谢,增强胰岛素敏感性,可能与其调节PKB/FoxO1通路相关蛋白的表达有关。

PTEN-PKB途径在子宫内膜癌中的作用

目的探讨PTEN、PKB在子宫内膜癌发病过程中的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)技术检测55例子宫内膜癌组织,13例子宫内膜非典型增生,11例增殖期内膜中PTEN及PKB mRNA的表达。结果 PTEN mRNA在正常内膜、非典型增生内膜及子宫内膜癌组织间表达阳性率分别为 81．8％、38．5％及36．4％,三者比较有显著性差异(P<0．05),而PKB mRNA在正常内膜、非典型增生及子宫内膜癌中表达阳性率为27．3％、46．2％及61．8％,但无统计学差异(P>0．05);在子宫内膜癌不同临床分期、病理分级之间,PTEN mRNA和PKB mRNA表达量均没有显著差异(P>0．05)。结论 PTEN可能通过PI3K- PKB途径导致子宫内膜癌的发生。