自拟益气活血方对早期糖尿病肾病大鼠肾脏PKC AGEs及TGF-β1表达的实验研究

目的:观察"自拟益气活血方"对早期糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏PKC、AGEs及TGF-β1表达的影响。方法:采用链脲佐菌素(Streptozocin STZ)诱导糖尿病肾病大鼠模型。大鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、贝那普利组、自拟益气活血方大、中、小剂量组,并依据要求灌胃,每天给药1次,连续给药11周。结果:肾组织PKC、AGEs及TGF-β1表达,中药组较模型组明显改善,且中药大剂量组较中、小剂量组疗效更好。结论:自拟益气活血方能延缓肾小球纤维化、硬化,有效保护肾脏。

赤芍对早期糖尿病肾病大鼠肾脏AngⅡ、ET-1、PKC及TGF-β_1的影响

目的观察赤芍对早期糖尿病肾病大鼠的作用及赤芍对肾脏血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮素-1(ET-1)、蛋白激酶C(PKC)及转化因子-β1(TGF-β1)的影响。方法腹腔注射STZ制备糖尿病肾病大鼠模型,随机分为正常对照组、糖尿病肾病模型组以及高、中、低赤芍组(腹腔注射5、15、30g/kg),8周后测定大鼠血糖、血脂及肾功能指标(尿素氮、血肌酐、24h尿蛋白),放射免疫法测定肾脏AngⅡ、ET-1含量,免疫组织化学染色法检测肾脏TGF-β1及PKC表达。结果与正常对照组相比,糖尿病肾病组大鼠血糖、血脂、尿素氮、血肌酐及24h尿蛋白明显升高,AngⅡ、ET-1含量和TGF-β1、PKC表达增强(均P<0.01);与糖尿病肾病组相比,赤芍能呈浓度依赖性的降低糖尿病肾病大鼠血脂、尿素氮、血肌酐及24h尿蛋白,明显下调肾脏ET-1、TGF-β1及PKC(均P<0.01),AngⅡ虽有下调趋势,但与糖尿病肾病组相比无明显差异性(P>0.01)。结论赤芍能改善糖尿病早期肾功能,其机制可能主要与抑制肾脏ET-1表达继而下调PKC及TGF-β1水平有关。

蛋白激酶C和TGF-β1在糖尿病大鼠肾脏中的表达

目的研究糖尿病大鼠肾小球中蛋白激酶C(PKC)活性变化和转化生长因子-β1(TGF-β1)的动态变化,探讨二者之间相互关系及其与糖尿病肾病(DN)发生发展的关系。方法用链脲佐菌素制备糖尿病大鼠实验模型,将大鼠随机分为正常对照组(N)、糖尿病2 w组(DM2)和糖尿病4 w组(DM4)。断头处死,分离肾小球,提取纯化胞浆及胞膜蛋白,利用〔γ3-2P〕-ATP底物磷酸化的方法检测胞浆及胞膜PKC活性。用免疫组织化学和400倍光镜检测TGF-β1在各组大鼠肾脏的表达。结果(1)糖尿病大鼠肾小球细胞内总的PKC活性与对照组无显著性差异,胞浆PKC活性略有下降,相差不显著;肾小球细胞膜PKC活性明显高于正常对照组,膜结合PKC百分比显著增加,且细胞膜PKC活性与肾脏肥大指数及Ccr呈正相关。(2)糖尿病组TGF-β1的表达多于正常组。(3)肾小球细胞膜PKC活性与TGF-β1的表达正相关。结论高血糖慢性刺激可引起肾小球PKC活性增高,并诱导TGF-β1的表达,在糖尿病早期肾内血流动力学改变中发挥着重要的调控作用。

绿脓假单胞菌感染中耳上皮细胞可以激活TGF-β1 Smad信号通路

目的探讨绿脓假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa)在感染中耳上皮细胞过程中的作用机制.方法采用Real-time PCR和Western blotting方法检测绿脓假单胞菌感染中耳上皮细胞后,转化生长因子-β1(TGF-β1)和Smad2蛋白的mR和蛋白水平以及Smad7蛋白的磷酸化水平.结果绿脓假单胞菌在感染中耳上皮细胞过程中显著上调TGF-β1和Smad2的m RNA和蛋白水平,同时抑制了Smad7的磷酸化;突变型(Opr F)绿脓假单胞菌和采用蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)抑制剂Bisindolylmaleimide I处理中耳上皮细胞均可以下调TGF-β1和Smad2的m RNA和蛋白水平,同时促进Smad7蛋白的磷酸化.结论绿脓假单胞菌感染中耳上皮细胞可以激活TGF-β1/Smad信号通路.

黄芩苷调节DN大鼠肾脏局部生物活性物质的实验研究

目的研究黄芩苷对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏局部生物活性物质的调节作用。方法采用链尿佐菌素单次腹腔注射法制作DN模型大鼠,随机分为模型组、黄芩苷低剂量组及高剂量组,另设正常对照组。黄芩苷低、高剂量组大鼠分别腹腔注射黄芩苷水溶液40 mg.kg-1.d-1、60mg.kg-1.d-1。治疗6 w后,取各组大鼠血液及肾脏,检测血AngⅡ、肾脏TGF-β1及PKC活性。结果黄芩苷低、高剂量组血AngⅡ降低,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。黄芩苷低、高剂量组肾小管TGF-β1表达与模型组比较明显减少,肾小管上皮细胞膜PKC表达与模型组比较减少,其中以黄芩苷低剂量组更接近正常对照组的表现。结论黄芩苷可降低血AngⅡ,对改善肾脏血流动力学有一定帮助。黄芩苷可降低肾组织内增高的TGF-β1、PKC,从而调节细胞外基质(ECM)的沉积和降解。

核因子κB在糖尿病大鼠肺组织活性的变化

目的观测糖尿病大鼠肺组织的病理改变及蛋白激酶C、核转录因子κB(NFκB)活性的变化,探讨NFκB在糖尿病大鼠肺病变中作用。方法制作糖尿病大鼠模型、4w后观察其肺部组织病理改变,采用改良的Takay法测定PKC活性,蛋白质免疫印迹分析及免疫组化方法检测NFκB在糖尿病大鼠肺组织表达变化。结果DM大鼠4w后毛细血管壁及肺泡间隔增厚,肺间质胶原成份增多,肺组织NFκBWestern带平均灰度值为(72.17±3.12)。肺组织PKC含量与对照组相比,细胞浆升高41%,细胞膜升高75.9%,表现出膜移位现象。结论糖尿病大鼠肺组织高糖环境下信号传导系统PKCNFκB被激活,可能与糖尿病肺部并发症的发生和发展相关。

二酯酰甘油-蛋白激酶C信号传导系统和细胞因子与糖尿病肾病的关系

目的研究糖尿病大鼠肾小球中蛋白激酶C(PKC)的活性变化及转化生长因子-β1(TGF-β1)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达情况,探讨3者之间的相互关系及其与糖尿病肾病(DN)发生、发展的相关性。方法选用雄性SD大鼠,用链脲佐菌素制备大鼠糖尿病实验模型,随机分为正常对照组、糖尿病2周(DM2)组和糖尿病4周(DM4)组。大鼠断头处死,分离肾小球,提取纯化胞浆及胞膜蛋白。利用[r-32P]-ATP底物磷酸化的方法检测胞浆及胞膜PKC活性;用免疫组织化学法检测VEGF和TGF-β1在各组大鼠肾小球及肾小管中的表达。结果①DM2、DM4组肾小球细胞内总的PKC活性与对照组无显著性差异,胞浆PKC活性略有下降,但相差不显著(P>0.05);DM2、DM4组肾小球细胞膜PKC活性均明显高于正常对照组(P<0.05),且细胞膜PKC活性与肾脏肥大指数(肾重/体质量)和内生肌酐清除率(Ccr)呈正相关。②DM2、DM4组VEGF和TGF-β1的表达均高于正常对照组(P<0.01)。③肾小球细胞膜PKC活性与VEGF和TGF-β1的表达呈正相关。结论高血糖慢性刺激可引起肾小球PKC活性增高,并上调TGF-β1和VEGF的表达,进一步导致肾小球滤过膜通透性和滤过率增加,这在糖尿病早期肾内血流动力学改变中发挥着重要的调控作用。

不同频率电针百会、水沟穴对大鼠血脑屏障开放效应及调控机制

目的:观察不同频率电针对脑缺血再灌注恢复期大鼠血脑屏障(BBB)开放效应,探讨电针促血脑屏障开放调控机制。方法:频率研究:150只健康雄性SD大鼠建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,饲养3周后,按随机原则分为模型组、假手术组及2、15、30、50、100Hz组。检测大鼠脑含水量以及伊文思蓝(EB)透过量。机制研究:180只SD大鼠建立MCAO模型,饲养3周后,随机分为模型组、假手术组、电针组、假电针组、电针+PKC抑制剂组;检测大鼠大脑皮层蛋白激酶C亚型β1(PKCβ1)的磷酸化水平、P-糖蛋白(P-gp)以及mdr1a、mdr1b m RNA的表达。结果:2Hz组、100Hz组大鼠脑组织EB含量明显升高(P<0.05);模型组与其余4组比较,大鼠脑组织含水量差异无统计学意义。与模型组比较,2Hz组大鼠大脑皮层的PKCβ1、p-PKCβ1/PKCβ1均显著提高(P<0.05),电针组P-gp的IHS评分显著降低(P<0.05),电针组mdr1、mdr1b m RNA的表达均明显降低(P<0.05);电针+PKC抑制剂组mdr1a m RNA表达高于电针组(P<0.05)。结论:2Hz、100Hz电针刺激对脑缺血再灌注恢复期大鼠BBB均具有一定开放效应,且无明显脑水肿出现;电针诱导大鼠BBB开放可能是通过促使PKCβ1磷酸化,下调药物外排系统P-gp、mdr1a m RNA,抑制P-gp在大脑皮层毛细血管内皮细胞的表达实现。