PKF118-310对K562细胞周期和增殖的影响及其机制研究

目的:探讨PKF118-310对人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞周期和增殖的影响及其机制研究。方法:用不同浓度PKF118-310处理K562细胞株,MTT法检测药物对细胞增殖的影响;免疫细胞组织化学方法观察细胞中β-catenin和TCF-4的存在;流式细胞术检测细胞周期的改变;Western blot检测caspase-3,β-catenin、TCF-4及BCL9的表达差异。结果:PKF118-310诱导阻滞K562细胞S期而导致对细胞增殖有明显抑制作用;PKF118-310处理的K562细胞中存在β-catenin及TCF-4;不同浓度的PKF118-310处理K562细胞株72 h后,caspase-3蛋白表达升高,而β-catenin、TCF及BCL-9蛋白表达明显降低。结论:PKF118-310通过抑制β-catenin/TCF/BCL9转录复合物诱导K562细胞S期阻滞,进而抑制细胞增殖。

树突状细胞Wnt/β-catenin信号通路对哮喘小鼠气道变态反应性炎症的调控作用

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路对哮喘小鼠气道变态反应性炎症的调控作用。方法通过小鼠骨髓细胞诱导分化建立树突状细胞(DCs)体系,并用氯化锂(LiCl)和PKF118-310干预细胞,光镜下观察细胞形态;同种异体混合淋巴细胞反应检测DCs刺激淋巴细胞的增殖能力;Western blot方法检测DCs中GSK-3β和β-catenin蛋白的表达水平。选用BALB/c雌性小鼠为研究对象,使用OVA联合氢氧化铝构建哮喘模型,并用LiCl和PKF干预小鼠,干预结束后收集标本,观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和嗜酸性粒细胞百分比;HE染色观察小鼠肺部变态反应性炎症情况;ELISA检测BALF、脾细胞培养上清液中干扰素-γ(IFN-γ)和白介素-4(IL-4)的含量及血清总IgE抗体水平;Western blot检测肺脏组织中Wnt/β-catenin信号通路的重要组分GSK-3β和β-catenin蛋白的表达变化。结果(1)LiCl组DCs对同种异体T细胞的刺激和促增殖能力明显弱于PKF组DCs(P<0.05);(2)LiCl组DCs中GSK-3β的蛋白表达水平明显低于PKF组,而其β-catenin的蛋白表达水平显著高于后者(P<0.05);(3)动物实验中,与哮喘组相比,LiCl组BALF中白细胞总数和嗜酸性粒细胞百分比均较低,而PKF组与此相反(P<0.05);(4)肺组织病理表明,LiCl组肺部炎症程度最轻,PKF组最重(P<0.05);(5)LiCl组小鼠BALF及脾脏中IL-4水平最低,IFN-γ水平最高;PKF组与此相反,哮喘组介于两者之间(P<0.05);(6)各组小鼠血清中总IgE含量,与正常对照组比较,实验组IgE显著升高(P<0.05);LiCl组总IgE水平明显低于哮喘组和PKF组(P<0.05);(7)LiCl组肺组织中GSK-3β的蛋白表达水平明显低于各组(P<0.05),而其β-catenin的蛋白表达水平显著高于各组(P<0.05),PKF组β-catenin的蛋白表达水平明显低于各组(P<0.05),哮喘组和PKF组之间GSK-3β的蛋白表达水平未见明显差异(P>0.05)。结论 LiCl和PKF118-310可通过调控哮喘小鼠肺组织中Wnt/β-catenin信号通路重要组分GSK-3β和β-catenin的蛋白表达而改变哮喘严重程度,为哮喘的治疗提供了新方向。

PKF118—310对白血病K562细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨小分子化合物PKF118—310对人慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度PKF118—310处理K562细胞，用四甲基偶氮唑盐（MTY）法检测其对细胞增殖的抑制；免疫荧光法观察细胞核β-catenin／TCF转录复合物的形成；流式细胞术检测细胞凋亡；Westernblot检测caspase-3、caspase-8、XIAP、bcl-2、β—catenin、TCF、C—myc及cyclinDI的表达。结果PKF118-310能够抑制K562细胞生长，其对K562细胞在24、48、72h的半数抑制浓度（IC50）值分别为5．388、3．290、1．566μmol／L。细胞核内形成β—catenin／TCF转录复合物。分别用1．6、3．2μmol／L的PKF118-10作用于K562细胞48h后，经AnnexinV．FITC／碘化丙啶（PI）双标检测细胞凋亡率分别为（48．0±0．9）％、（80．2±1．2）％，均高于对照组的（1．2±0．6）％（均P〈0．05）。不同浓度PKF118—310处理K562细胞72h后，caspase-3及caspase-8蛋白表达均高于对照组（均P〈0．05），而XIAP、bcl-2、β—catenin、TCF、c-Tnyc及cyclinD1蛋白表达均低于对照组（均P〈0．05）。结论PKF118—310可抑制K562细胞增殖，并诱导其凋亡。