目的构建人腺病毒3型(human adenovirus type 3,HAdV3)检测细胞系。方法将HAdV3中的hexon基因克隆至绿色荧光蛋白EGFP3型基因上,连接慢病毒表达载体(PLV-Puro)上,获得PLV-EGFP-hexon。将其与包装质粒P-Pax、PMD用脂质体Lip2000共转染293...目的构建人腺病毒3型(human adenovirus type 3,HAdV3)检测细胞系。方法将HAdV3中的hexon基因克隆至绿色荧光蛋白EGFP3型基因上,连接慢病毒表达载体(PLV-Puro)上,获得PLV-EGFP-hexon。将其与包装质粒P-Pax、PMD用脂质体Lip2000共转染293T细胞,获得慢病毒颗粒感染HEp-2细胞,经嘌呤霉素压力筛选和系列的释法,获得人腺病毒3型感染的检测细胞系HEp-2/GFP。结果细胞系HEp-2/GFP感染HAdV3后24h,可观察到GFP表达的绿色荧光,而作为对照组的HEp-2/GFP细胞感染双链DNA病毒[如EB病毒(EBV)、乙型肝炎病毒(HBV)等],并未观察到绿色荧光。此检测细胞系用不同滴度的HAdV3感染,至少可以检测到10PFU/ml滴度的HAdV3。结论成功地构建了能检测HAdV3的细胞系HEp-2/GFP,且其检测的特异性和敏感性良好,可以作为检测HAdV3感染的诊断方法之一。展开更多
文摘目的构建人腺病毒3型(human adenovirus type 3,HAdV3)检测细胞系。方法将HAdV3中的hexon基因克隆至绿色荧光蛋白EGFP3型基因上,连接慢病毒表达载体(PLV-Puro)上,获得PLV-EGFP-hexon。将其与包装质粒P-Pax、PMD用脂质体Lip2000共转染293T细胞,获得慢病毒颗粒感染HEp-2细胞,经嘌呤霉素压力筛选和系列的释法,获得人腺病毒3型感染的检测细胞系HEp-2/GFP。结果细胞系HEp-2/GFP感染HAdV3后24h,可观察到GFP表达的绿色荧光,而作为对照组的HEp-2/GFP细胞感染双链DNA病毒[如EB病毒(EBV)、乙型肝炎病毒(HBV)等],并未观察到绿色荧光。此检测细胞系用不同滴度的HAdV3感染,至少可以检测到10PFU/ml滴度的HAdV3。结论成功地构建了能检测HAdV3的细胞系HEp-2/GFP,且其检测的特异性和敏感性良好,可以作为检测HAdV3感染的诊断方法之一。
