急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因检测的临床意义探讨

目的探讨 PML-RARα融合基因检测在临床检查急性早幼粒细胞白血病(APL)治疗前后的意义。研究 PML-RARα融合基因含量与急性早幼粒细胞白血病(APL)病变进程的关系。方法运用 RT-PCR 技术检测急性早幼粒细胞白血病患者治疗前后骨髓内 PML-RARα融合基因含量。结果所有 51 例初诊为 APL 的患者均做 PML-RARα融合基因检测,其中阳性 41 例,阳性率为 80.4%。初诊为 APL 的 51 例患者治疗 18 个月后(进行随访),其中死亡 3 例,阳性 3 例,阳性率为 5.9%。结论 PML-RARα融合基因的检测对 APL 诊断具有重要价值。定期检测 PML-RARα基因可尽早发现分子学复发以及时治疗,并避免血液学复发。

PML-RAR α基因在早幼粒细胞性白血病发病中的作用研究

目的：通过封闭ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因对ＮＢ４细胞生长分化作用的影响，探讨ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因与ＡＰＬ发病的关系。方法：用反义核酸封闭ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的表达。ＮＢ４细胞的生长、分化及功能，通过细胞生长曲线、形态学、细胞表面标志及ＮＢＴ还原试验判定；细胞周期应用流式细胞仪分析。结果：ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的封闭能够抑制ＮＢ４细胞生长，促进其分化成熟，同时可降低Ｓ期细胞的百分比（由５６％降至３７％）。结论：急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）特征性的染色体易位ｔ（１５；１７）形成的ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因，是ＡＰＬ发病的分子基础。

儿童急性早幼粒细胞白血病PML-RAR_α融合基因连续检测的临床意义

目的 :研究儿童急性早幼粒细胞白血病 (APL)的临床治疗和PML RARα 融合基因连续检测的意义。 方法 :以全反式维A酸 (ATRA)单用或联合化疗进行诱导缓解 ,常规联合化疗巩固 ,常规化疗、小剂量化疗和维A酸 (Tretinoin)交替维持治疗的方案 ,治疗 10例儿童APL。应用逆转录聚合酶链扩增 (RT PCR)方法在病程的不同阶段连续检测PML RARα变化 ,作为鉴测微小残留白血病细胞的指标。 结果 :10例APL中完全缓解 (CR) 9例 ,CR率 90 %。 9例CR患儿中 4例在CR后 14～ 4 2个月复发 ;1例仍在继续治疗中 ;生存期达 34个月 ;4例在连续CR 4～ 5年后已停药 ,停止治疗时间为 18～ 96个月 ,生存期达 72～ 15 6个月。 10例患儿中 ,8例在病程中PML RARα 转为阴性 ,首次转阴时间为 6～ 4 2个月 ,1例持续阳性。4例复发患儿中 ,2例复发前持续阳性 ,2例为病程中由阴性转为阳性。 5例仍生存者 ,至少已 2次连续检查为阴性。 1例在病程中由阴性转为阳性、2例分别在持续CR 36和 4 2个月仍阳性的患儿 ,在治疗干预后均转阴 ,且长期生存。结论 :在连续CR期定期检测PML RARα 可早期发现分子复发 ,及时干预治疗可避免血液学复发。持续PML

PML-RAR_α融合基因检测方法学的建立

应用筑巢式逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测２３例急性早幼粒白血病（ＡＰＬ），早幼粒白血病基因ＰＭＬ维甲酸受体α融合基因（ＰＭＬ－ＲＡＲα），肯定了２例与急非淋白血病Ｍ２不易鉴别的不典型ＡＰＬ。１５例缓解在２年以内ＡＰＬ此融合基因均阳性，其中Ｌ型８例，Ｓ型７例，Ｌ型中尚发现一个变异型。８例缓解在３年以上ＡＰＬ，此融合基因４例阳性，其中Ｌ型３例，Ｓ型１例，Ｌ型１例已有复发倾向，而缓解超过４年ＡＰＬ此融合基因均为阴性。

PML/RARα融合基因检测临床应用及变异易位的研究

目的 :优化PML RARα融合基因检测方法 ,观察变异易位及其临床意义。方法 :RT PCR查骨髓及部分外周血PML RARα融合基因 ,变异易位产物作测序分析。结果 :发病期的 8例APL患者 (初发 4例、复发 4例 )PML RARα融合基因均阳性 ;缓解期APL患者的 2 0人次检查中 6人次阳性 ,而其骨髓涂片早幼粒细胞比率均小于 5 % ;发现一种新的S型变异易位 ,并见L、S型同时存在于同一个体。外周血中的阳性率低于骨髓中。结论 :证实S型 2 0 6bp的变异产物是一种新的变异易位产物 ;同一个体L、S型可同时存在 ;提取骨髓单个核细胞用于RT PCR查PML

Survivin基因在NB4细胞株细胞和急性早幼粒细胞白血病细胞表达及其抗凋亡作用与临床意义

为了检测survivin基因在APL细胞中的表达率并探讨其表达与临床的相关性,本研究采用RT-PCR方法检测PML/RARα和survivinmRNA表达。结果显示:NB4细胞经过ATRA处理后,survivinmRNA表达随着时间的延长而逐渐下降,在72小时几乎检测不到survivinmRNA表达。36例初发、复发APL患者骨髓单个核细胞均有PML/RARα融合基因表达,其中survivinmRNA阳性表达24例(占67%),阴性表达12例(占33%);22例缓解期APL患者骨髓单个核细胞PML/RARα融合基因表达均为阴性,其中survivinmRNA阳性表达8例(占36%),阴性表达14例(占64%);初发、复发组、PML/RARα基因长型阳性组与缓解组相比,survivinmRNA表达阳性率均明显增高(两者P值均<0.05),而与急性白血病组相比survivinmRNA表达阳性率均明显减低(两者P值分别<0.05,<0.001)。36例初发、复发APL患者,无论survivinmRNA表达阳性或阴性,用ATRA治疗都能达到完全缓解;临床上并发DIC和严重感染的4例APL患者的survivinmRNA表达皆为阳性(其中1例死亡),而survivinmRNA表达阴性患者临床症状均较轻,只有轻微的皮肤粘膜出血、发热和乏力等症状。2例APL患者经用ATRA治疗后外周血象以及骨髓象诱导分化症象不明显者,其survivinmRNA表达均为阳性。结论:APL患者骨髓单个核细胞sur-vivin基因阳性表达率较其它类型急性白血病明显减低,survivin基因表达与临床有一定的相关性。

三氧化二砷和全反式维甲酸联合使用诱导NB4细胞C/EBPεmRNA的表达

背景与目的:研究三氧化二砷+全反式维甲酸(As2O3+tRA)和As2O3对NB4细胞凋亡和分化的影响,NB4细胞CD11b、Annexin Ⅴ和C/EBP ε、PML-RAR α基因mRNA表达和相互调变关系。材料与方法:取106个NB4细胞,每孔中加入As2O3并同时在另外孔加入As2O3+tRA,分别在0、4、8、12、16、20、24、48、72 h时取出细胞,用流式细胞术检测细胞分化指标CD11b和凋亡指标Annexin Ⅴ,半定量RT-PCR检测C/EBPε和PML-RAR α基因的表达。结果:72 h内As2O3和As2O3+tRA均能诱导NB4细胞C/EBPε表达增强4倍,从而进一步诱导CD11b的表达。As2O3+tRA CD11b的表达增高更加明显,As2O3和As2O3+tRA两组药物均有显著的降解PML-RARα基因的作用,As2O3+tRA组PML-RAR α融合基因降解更为明显,凋亡发生在早期,在4-20 h之内Annexin Ⅴ表达较高,24 h后随时间的延长阳性率下降。结论:As2O3+tRA、As2O3均能诱导CD11b、C/EBPε表达增强,可使PML-RAR α融合基因降解,诱导NB4细胞凋亡。在一定剂量下As2O3+tRA具有协同作用,诱导NB4细胞分化和凋亡的能力比As2O3单独用药组更强。

治疗相关性急性早幼粒细胞白血病的临床及实验室特征(附1例报告)

目的:探讨治疗相关性早幼粒白血病(t-APL)的发病机制、临床及实验室特征。方法:对1例前列腺癌伴发的t-APL行病历分析及血象、骨髓象、FISH等相关检查分析。结果:放疗为本例t-APL的发病原因。血象示三系轻度减少。骨髓象示异常早幼粒细胞克隆性增生。FISH检测证实存在PML/RAR融合基因并伴发多倍体。结论:t-APL与APL临床及实验室特征相似,而对于骨髓象异常早幼粒细胞比例增高不明显的t-APL,FISH检测为确诊的重要方法。

初治APL患者PML/RARα融合基因表达

目的检测初治急性早幼粒细胞白血病(APL)患者PML/RARα融合基因异构体类型及表达水平,建立检测微小残留病的标准拷贝数基线。方法应用实时定量RT-PCR方法,采用Taqman探针技术测定32例APL初治患者骨髓标本的PML/RARα融合基因mRNA3种异构体表达水平,并比较异构体之间临床特征有无差异。结果32例PML/RARα融合基因阳性的APL初治患者中21例为PML/RARα融合基因长型异构体,11例为融合基因短型异构体,初治患者融合基因表达量中位数为1.44%(1.29%±1.46%)。长型及短型异构体标准拷贝数(normalized copy number,NCN)中位数分别为1.40%(1.46%±1.18%)和1.28%(1.39%±1.51%),无明显统计学差异,P<0.05,融合基因长型异构体患者在发病时外周血白细胞总数为6.08±13.21(×109/l)明显低短型患者15.11±20.26(×109/l),P<0.01。结论建立了检测APL微小残留病的高敏感性、高特异性的实时定量RT-PCR方法,对分析治疗过程的病情变化和指导治疗方案具有重要意见。

抗早幼粒白血病短型融合蛋白单克隆抗体的研制

以急性早幼粒白血病人短型融合蛋白的PML与RARα结合部位的13个氨基酸序列制备合成肽,交联甲状腺球蛋白免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术获得两株单抗,经鉴定与相关蛋白无交叉反应,说明此融合部位外露,可以制备出针对性抗体。

复杂核型急性早幼粒细胞白血病治疗过程中并发维甲酸综合征一例

目的探讨急性早幼粒细胞白血病(APL)治疗过程中并发维甲酸综合征(RAS)的治疗方法。方法选择2018年12月28日,兰州军区兰州总医院全军血液病中心收治的1例治疗过程中并发RAS的复杂核型APL患者为研究对象。采用回顾性分析方法,收集本例患者的临床病例资料,并对其临床表现和诊治过程进行分析。本例患者的APL治疗方案为全反式维甲酸(ATRA)+三氧化二砷(ATO)诱导化疗:ATRA 20 mg/次,2次/d,口服,d1~28;ATO 10mL/d,静脉注射,d1~14;RAS治疗方案为减量或停用ATRA或ATO,尽早静脉注射地塞米松10 mg/次,2次/d,直至RAS相关临床症状明显改善。当患者白细胞计数(WBC)>10×109/L且持续升高时,酌情加用蒽环类药物或阿糖胞苷。本研究遵循的程序符合2013年修订版《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求,并且与受试者签署临床研究知情同意书。结果本例患者入院完善相关实验室及辅助检查后,于2019年1月1日确诊为APL,PML-RARα(Bcr1型)阳性、复杂核型、中危组。患者接受ATRA+ATO方案诱导化疗后,疗效良好。患者接受ATRA治疗后,出现发热、呼吸衰竭、胸腔积液、WBC升高等临床表现,考虑其发生RAS。患者经地塞米松、吡柔比星及对症治疗后,其RAS相关临床症状明显改善。截至2019年2月,患者一般状况良好,目前仍在定期随访中。结论ATRA+ATO方案对APL患者疗效良好。APL患者治疗过程中发生RAS时,应积极采用激素及对症治疗。由于本文仅对1例患者进行回顾性研究,本研究对该病采用的治疗方案的确切疗效,尚需扩大样本量进一步验证。