安徽地区PMQR基因阳性大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLs流行特征的研究

目的了解安徽地区临床分离含质粒介导的喹诺酮类耐药基因(PMQR)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中编码超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型别,及与PMQR基因在本地区共同传播的流行现状和耐药特征。方法采用琼脂稀释法测定40株临床分离含PMQR基因的大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌对临床14种抗菌药物的药物敏感性,CLSI表型确证试验进行表型鉴定,PCR检测blaESBLs基因型;接合实验验证PMQR与blaESBLs基因的转移性;ERIC-PCR进行同源性分析。结果 40株PMQR阳性菌株对喹诺酮类药物显示耐药同时对多种β-内酰胺类药物耐药;PCR法检测PMQR阳性菌株中blaESBLs基因携带率达到60%(24/40),最常见的为CTX-M型ESBLs,检出率达到92%(22/24)。结论安徽地区临床存在PMQR与blaESBLs基因的共同传播及流行,包含PMQR基因的菌株多为产ESBLs菌株,同时携带PMQR与blaESBLs基因的菌株常为多药耐药菌。

广东地区鱼源大肠埃希菌ESBLs和PMQR流行分布调查

从广东地区食用鱼肠道分离鉴定了218株大肠埃希菌,用琼脂稀释法测定218株大肠埃希菌对17种抗菌药物的敏感性,并用PCR方法调查ESBLs和PMQR基因的流行分布情况.对10株β-内酰胺酶(包括ESBLs)和/或PMQR阳性菌株进行了接合转移试验,探讨ESBLs和PMQR基因的传播机制.敏感性测定结果显示:218株大肠埃希菌对17种抗菌药物的耐药率为0.5%～72.5%.在112株氨苄西林耐药菌株中,检测出2种ESBLs基因,分别为blaCTX-M-79和blaCTX-M-14,2株菌中还检测到β-内酰胺酶基因blaLEN-4和blaLEN-17.在80株环丙沙星耐药菌株中,检测到59株为PMQR阳性,分别为qnrB(33株),qnrD(5株),qnrS(21株),aac(6')-Ib-cr(6株).接合转移试验结果表明,ESBLs和/或PMQR基因可同时存在于一个质粒上进行转移.

哈尔滨地区猪源大肠杆菌PMQR基因流行性检测

为了解哈尔滨地区猪源大肠杆菌中质粒介导的氟喹诺酮耐药(Plasmid mediated fluoroquinolone resistant,PMQR)基因的流行情况,本文通过对哈尔滨地区规模化养猪场进行采样处理,最终分离得到67株猪源大肠杆菌菌株,采用微量肉汤稀释法测定其对8种药物的最小抑菌浓度,针对PMQR基因设计特异性引物进行PCR扩增,结果显示,对8种兽医临床常用抗菌药物耐药率较高,多表现为多重耐药。oqx AB,qnr S,aac(6′)-Ib-cr,qnr B,qep A的检出率分别为70.15%,64.18%,22.39%,13.43%,11.94%,并没有检测到qnr A、qnr C、qnr D基因,这表明,PMQR基因在哈尔滨地区猪群中存在很高的检出率,这势必会加剧临床用药的难度,并且还为基因的水平传播提供可能。

猪源大肠埃希菌中质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因的多样性研究

为研究陕西省关中猪源大肠埃希菌的耐药情况及质粒介导的喹诺酮耐药(PMQR)基因的流行性与多样性,于2017年4月—2018年11月从陕西关中地区数个养猪场分离获得470株大肠埃希菌,采用微量肉汤稀释法测定其对包括3种氟喹诺酮类药物在内的6类抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC),PCR扩增检测其携带的PMQR基因,并分析PMQR基因阳性菌株gyrA和parC基因的质粒介导喹诺酮耐药决定区(QRDR)的突变情况。结果显示,陕西猪源大肠埃希菌对阿莫西林和土霉素的耐药率高达100%和98.51%,对阿米卡星、氟苯尼考、替米考星和头孢噻呋的耐药率分别为60.64%、52.98%、50.85%和44.47%,且89.58%为多重耐药菌株。对3种氟喹诺酮类药物恩诺沙星、普多沙星和环丙沙星的耐药率分别为89.58%、57.66%和56.80%。对美罗培南最为敏感,未发现耐药菌株,但有9株大肠埃希菌对美罗培南的敏感性为中介。对氟喹诺酮类药物耐药的菌株中,PMQR基因qnrS、aac(6′)-Ib-cr、qnrB、qnrA、qnrD和qepA的检出率分别为36.52%、30.14%、17.38%、11.45%和2.49%,且55.30%的菌株携带1种PMQR基因,37.90%携带2种PMQR基因,6.40%携带3种PMQR基因,0.35%携带4种PMQR基因。在282株携带PMQR基因的菌株中,279株发生QRDR突变,其中以gyrA基因的Ser83Leu突变为主。132株PMQR基因阳性菌株parC基因发生Ser80Ile或Ser80Ile+Glu84Val突变。随着菌株所携带PMQR基因的增多,gyrA和parC基因的突变位点也相应增加,细菌的耐药水平也随之增加。

扬州市流浪犬肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌耐药性分析及PMQR基因检测

为了解扬州市流浪犬相关肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的耐药情况及质粒介导的喹诺酮类耐药(plasmid-mediated quinolone resistant, PMQR)基因的流行性与多样性,从扬州市犬只留检所采集156份样品进行肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的分离、纯化与鉴定;采用琼脂稀释法测定分离株对15种抗菌药物的最小抑菌浓度,PCR检测喹诺酮类耐药菌株PMQR基因的携带情况。结果表明:共分离到82株肺炎克雷伯菌和119株大肠埃希菌,其中肺炎克雷伯菌对氨苄西林的耐药率最高(97.56%),其次是磷霉素(75.61%),有7株菌对6种以上的药物耐药;119株大肠埃希菌中有79株菌至少对1种药物耐药,对四环素、氨苄西林、萘啶酸、复方新诺明和环丙沙星的耐药率分别为48.74%、37.82%、26.05%、29.41%和10.08%, 12株菌耐6种以上药物。共分离到40株喹诺酮耐药菌株,PMQR基因qnrS、oqxAB、qnrD和aac(6′)-Ib-cr的检出率分别为22.50%、17.50%、7.50%和7.50%,且有1株肺炎克雷伯菌和1株大肠埃希菌同时携带aac(6′)-Ib-cr、qnrD和qnrS。综上,扬州市流浪犬是多重耐药菌潜在的储存库,且存在PMQR基因的流行,应引起重视。

食品动物源沙门菌ESBLs和PMQR耐药基因流行特征分析

本研究对从猪、鸭和鹅分离的31株沙门菌进行耐药性分析，调查ESBLs基因和PMQR基因在沙门菌的流行分布特征。结果显示，31株沙门菌中只检测到CTx—M型ESBLs，3株携带blaCTX-M-14，3株携blaCTX-H-27基因；有13株携带blaOXA型均为窄谱blaOXA-1,6株携带blaTEM型也为窄谱blaTEM-1b。blaSHV、blaPER、blaVEB、blaGEs等各型β-内酰胺酶基因均未检出。PMQR基因oqxAB和aac（6’）-Ib-cr检出率最高分别为39％和26％。4株鸭源和1株猪源沙门菌中都检测到qnrA基因，而qnrD基因仅在一种猪源沙门菌中检出。qnrB、qnrC、qnrS、qepA等基因均未检出。研究发现有19株沙门菌同时携带β-内酰胺酶和PMQR，其中一株鸭源沙门菌同时携带CTX-M-14ESBLs和CMY-2AmpC酶；有7株同时携带4—5种β-内酰胺酶和PMQR基因。

社区泌尿系感染大肠埃希菌ESBL和PMQR基因分析

目的 探索社区泌尿系感染大肠埃希菌耐药性与超广谱β-内酰胺酶(ESBL)和质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因的关系。方法 回顾性研究2015年11月至2018年12月非重复分离自本院门诊就诊患者尿液样本的大肠埃希菌152株,采用Phoenix 100全自动微生物分析仪进行细菌鉴定及药敏分析。PCR筛查ESBL基因(blaTEM,blaSHV,blaCTX-M-1,blaCTX-M-2,blaCTX-M-8,blaCTX-M-9,blaCTX-M-25和blaOXA-1)和PMQR基因(qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、oqxA、oqxB、qepA和aac(6′)-1b),分析大肠埃希菌耐药性与ESBL和PMQR基因的关系。结果 152株大肠埃希菌中102株携带ESBL基因,以blaTEM-1和blaCTX-M-14为主,ESBL基因阳性组对常用头孢菌素类耐药率高于阴性组,差异有统计学意义(P<0.05);23株携带PMQR基因,PMQR基因阳性组对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率高于阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 社区泌尿系感染大肠埃希菌ESBL基因和PMQR基因与细菌耐药性密切相关。blaTEM-1和blaCTX-M-14是本院大肠埃希菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要原因。

合肥地区动物源致病性大肠杆菌ESBLs和PMQR基因流行分布

从安徽省合肥地区多个养殖厂分离鉴定了65株致病性大肠杆菌,用PCR方法检测ESBLs和PMQR基因的流行分布情况,用微量肉汤稀释法测定30株ESBLs和/或PMQR阳性菌对16种抗菌药物的最小抑菌浓度。PCR结果显示:ESBLs阳性率为24.6%(16/65),分别为blaOXA(16株)、blaTEM(15株)和blaCTX-M(14株),未检出blaSHV;PMQR的阳性率为46.2%(30/65),分别为qnrA(9株)、qnrS(18株)、aac(6′)-Ib-cr(28株),未检出qnrB、qnrC、qnrD和qepA;且携带ESBLs基因的阳性菌株均携带PMQR基因。首次检测出有7株大肠杆菌同时携带ES-BLs基因型(blaOXA、blaTEM、blaCTX-M)和PMQR基因型(qnrA、qnrS、aac(6′)-Ib-cr)。药物敏感性测定结果显示:30株携带ESBLs和/或PMQR基因的阳性大肠杆菌对16种抗菌药物的耐药率为16.7%～100%,耐药谱较广,耐药性较严重。16株同时携带ESBLs和PMQR基因的阳性菌株对11种及11种以上药物耐药的菌株占87.5%,14株仅携带PMQR基因的阳性菌株对11种及11种以上药物耐药的菌株占28.5%,表明携带PMQR基因的同时携带ESBLs基因大大增强了菌株的耐药性,携带耐药基因的数量和种类与菌株的多重耐药性相关。

肺炎克雷伯菌喹诺酮类药物耐药表型与PMQR基因携带相关性研究

目的探讨肺炎克雷伯菌喹诺酮类药物耐药表型与质粒介导喹诺酮类耐药基因(PMQR)携带之间的关系,为控制多药耐药肺炎克雷伯菌流行提供理论依据。方法收集医院临床2014年1月-2015年12月分离的90株肺炎克雷伯菌,其中30株对环丙沙星敏感,20株中介,40株耐药;PCR检测PMQR基因及插入序列ISCR1,对ISCR1阳性菌株采用PCR-mapping检测插入序列下游PMQR基因携带情况,通过DNA测序确定。结果 30株敏感的肺炎克雷伯菌株中qnrA基因阳性8株(26.67%),未检出可移动元件;20株中介的肺炎克雷伯菌中qnrA17株(85.00%),qnrB7株(35.00%),qnrS5株(25.00%),acc(6′)-Ib-cr基因11株(55.00%);ISCR1基因阳性15株(75.00%),PCR-mapping结果显示,ISCR1-qnrA阳性14株(70.00%);ISCR1-qnrB和ISCR1-qnrS分别检出6株(30.0%)和5株(25.00%);ISCR1-acc(6′)-Ib-cr检出4株(20.00%);40株耐药的多药耐药肺炎克雷伯菌中,qnrA共33株(82.50%),qnrB共12株(30.00%),qnrS共16株(40.00%),acc(6′)-Ib-cr28株(70.00%);ISCR1基因阳性菌株30株(75.00%),ISCR1-qnrA1阳性菌株30株,阳性率为75.00%;ISCR1-qnrB4和ISCR1-qnrS1阳性率分别为37.50%和30.00%。结论喹诺酮类中介的肺炎克雷伯菌PMQR基因携带率不低于耐药肺炎克雷伯菌,且其具备通过可移动元件进行传播的能力,因此在对这部分菌株进行多药耐药预防控制时不宜忽视。

水产动物源气单胞菌喹诺酮类耐药与PMQR基因、QRDR突变相关性分析

为了解PMQR基因、QRDR突变与气单胞菌喹诺酮类耐药相关性,以116株水产源气单胞菌为研究对象,采用PCR法检测PMQR基因(qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac(6′)-Ib-cr)并分析QRDR靶基因gyrA、parC突变情况,用微量二倍稀释法测定萘啶酸(NAL)、环丙沙星(CIP)、恩诺沙星(ENR)的最小抑菌浓度(MIC)值。结果表明:116株气单胞菌中,有18株(15.52%)菌株携带PMQR基因,其中8株(6.90%)携带qnrS2基因,9株(7.76%)携带aac(6′)-Ib-cr基因,1株同时携带qnrS2、aac(6′)-Ib-cr基因,未检测到qnrA,qnrB和qepA基因;56株(48.28%)菌株发生QRDR靶位点突变,主要突变方式为GyrA:Ser^(83)Ile和GyrA:Ser^(83)Ile+ParC:Ser^(87)Ile;对NAL、CIP及ENR耐药率分别为47.41%、12.07%及11.21%;7株仅携带qnrS2基因菌株未发生QRDR突变,对喹诺酮类药物敏感性略下降,NAL、CIP及ENR的MIC值分别小于4.00、0.50和1.00mg/L;10株携带aac(6′)-Ib-cr基因的菌株均发生QRDR突变并对NAL表现耐药,MIC值均>128.00mg/L,其中8株对CIP和ENR表现耐药,MIC值均≥4.00mg/L;发生gyrA单突变或gyrA和parC双突变菌株均对NAL表现耐药,MIC值均≥64.00mg/L,CIP和ENR的MIC值有的<4.00mg/L,有的≥4.00mg/L。综上,QRDR靶基因突变可影响水产动物源气单胞菌对萘啶酸的药物敏感性,而气单胞菌对氟喹诺酮类药物耐药可能与PMQR和QRDR协同作用有关。

新疆昌吉地区猪源喹诺酮耐药大肠杆菌PMQR因子检测及分析

为了解2013年新疆昌吉地区猪源喹诺酮类耐药大肠杆菌携带质粒介导喹诺酮耐药基因的流行情况,采用PCR方法对355株喹诺酮耐药猪源大肠杆菌进行PMQR因子(qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA、oqxA、oqxB和aac(6′)-Ib-cr)检测,对目的条带进行DNA测序确定基因型。结果显示:该地区猪源喹诺酮耐药大肠杆菌PMQR因子的携带率高达86.8%(308/355),其中42.9%(152/355)的菌株携带2种PMQR因子,11.3%(40/355)的菌株携带3种PMQR因子,6.5%(23/355)的菌株携带4种PMQR因子;检出率较高的PMQR因子有qnrS(62.5%,222/355)、aac(6′)-Ib-cr(55.8%,198/355)、oqxA(26.2%,93/355)和oqxB(29.0%,103/355),未检出qnrA,qnrB,qnrC,qnrD,qepA等基因。与本实验室2010年的调查结果比较,该地区猪源喹诺酮耐药大肠杆菌携带的PMQR因子已从oqxA,oqxB为主发展成以qnrS,aac(6′)-Ib-cr,oqxA,oqxB为主,提示应加强PMQR因子监控。

重庆市北碚区宠物源沙门氏菌耐药性监测及ESBL和PMQR基因检测

【背景】沙门氏菌是一种常见的人兽共患病病原菌。随着饲养宠物的人越来越多,宠物肠道内沙门氏菌对公共卫生的威胁逐渐显现,但鲜见宠物携带沙门氏菌的流行病学及宠物源沙门氏菌耐药性的报道。【目的】了解重庆市北碚区宠物源沙门氏菌的流行情况,以及其对常用抗菌药物的敏感性及超广谱β-内酰胺酶(Extended-Spectrumβ-Lactamases,ESBL)基因和质粒介导的喹诺酮耐药(Plasmid-Mediated Quinolone Resistance,PMQR)基因的携带情况。【方法】共采集北碚区宠物粪便样品1038份,通过样品前增菌、选择性增菌、选择性平板筛选和PCR鉴定沙门氏菌特异性invA基因分离鉴定沙门氏菌;接着测定了分离菌株对28种抗菌药物的敏感性,检测了10种ESBL基因和10种PMQR基因。【结果】共分离到沙门氏菌41株,分离率为3.95%。这些菌株对磺胺异噁唑、氨苄西林、四环素、多西环素的耐药率都超过50%,而且82.92%为多重耐药菌株,对阿米卡星、氧氟沙星、依诺沙星、加替沙星完全敏感;85.37%的分离菌携带ESBL基因,以blaTEM基因最为流行;46.34%携带PMQR基因,以qnrS最为流行;48.57%的ESBL阳性菌株携带至少一种PMQR基因。【结论】北碚区宠物体内的沙门氏菌对一些抗菌药物存在不同程度的耐药性,而且耐药性可能是通过耐药质粒介导的。

食品动物源沙门氏菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测与分析

为了解食品动物源沙门氏菌质粒介导喹诺酮类耐药性(Plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR),采用微量肉汤稀释法和PCR方法,检测了316株食品动物源沙门氏菌对20种抗菌药物的敏感性,以及菌株中PMQR基因的携带率。结果显示:316株沙门氏菌对20种抗菌药物呈不同程度的耐药性,95.57%菌株为多重耐药菌;316株菌中未检出qnrA、qnrC、qnrD、qnrS和qepA基因,7.91%菌株检出qnrB基因,15.19%菌株检出aac(6′)-Ib-cr基因,7.91%菌株检出oqxA基因,8.86%菌株检出oqxB基因,这是首次在沙门氏菌中发现oqxAB基因;98.11%PMQR阳性菌同时携带2种及以上的耐药基因,呈8～17耐的多重耐药性,其中以qnrB和aac(6′)-Ib-cr基因型为主;53株PMQR阳性菌分属于5种不同的基因型,耐药表型或耐药基因型不同的菌株却有相同的PF-GE谱型。本次检测的316株食品动物源沙门氏菌耐药较为严重;菌株主要携带qnrB、aac(6′)-Ib-cr及oqxAB基因;不同来源菌株存在同一耐药克隆株的流行。

猪源大肠埃希菌喹诺酮类耐药基因的检测及分析

【目的】探究江苏泰州地区猪源致病性大肠埃希菌对喹诺酮类药物的耐药情况以及喹诺酮相关耐药因子的流行情况.【方法】采用纸片法对81株临床分离的猪源致病性大肠埃希菌进行喹诺酮类药物耐药性的检测,通过PCR方法检测质粒介导的喹诺酮类耐药基因(PMQR)和喹诺酮类耐药决定区基因(QRDR)并进行分析.【结果】菌株对萘啶酸和环丙沙星的耐药最为严重,耐药率分别为69.1%和51.9%,且多呈现多药耐药现象.PMQR检测结果表明aac(6′)-Ib-cr基因检出率最高,为76.5%,其次为qnrS,qnrA,qnrD,qnrB,检出率依次为45.7%,34.6%,23.6%,2.5%,未检出qepA基因.QRDR突变分析中,常见的gyrA中Ser83突变为Ile, Asp87突变为Asn或Gly和parC中Ser80突变为Ile均被检测到,突变率分别为84.0%,61.7%和60.5%.而gyrB中Asp426突变为Gly还是首次报道,突变率为35.8%.此外,parC还检测到1株Phe64突变为Pro,2株Gln91突变为His.【结论】江苏泰州地区猪源大肠埃希菌中PMQR基因普遍存在,且QRDR基因突变严重,提示应加强抗生素的合理使用以及对喹诺酮相关耐药基因的监控.

动物源肠杆菌分离株质粒介导的喹诺酮类耐药基因的检测

为了解近年广东地区肠杆菌科质粒介导喹诺酮类耐药基因(PMQR)的流行情况,对广东地区猪、禽养殖场2007～2009年分离的407株肠杆菌进行PMQR基因的检测,采用琼脂平皿二倍稀释法对所有菌株进行15种抗菌药物的敏感性试验。结果显示,qnrA、qnrB、qnrS、qnrD、qepA及aac(6′)-Ib-cr的检出率分别为0.98%、4.91%、16.22%、1.72%、0.25%、5.41%,qnrC没有检测出,有27(6.63%)株同时携带两种或两种以上PMQR基因。近年广东地区动物源肠杆菌的PMQR基因流行存在上升趋势,耐药性存在严重,且存在多重耐药现象。

质粒介导喹诺酮类耐药机制研究进展

质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因的出现,迅速提高了细菌对喹诺酮类药物的耐药性,给临床细菌性疾病的治疗带来了严重的威胁。目前虽然认为喹诺酮类耐药基因(qnr)只引起低水平耐药,但低水平耐药性可使细菌数量达到出现突变所需的浓度,从而出现高水平耐药。因此,对质粒介导该类药物耐药机制的研究,及耐药基因的分子传播机制的研究不仅能指导临床合理用药,而且有助于控制耐药菌株的产生和传播。

鸡源大肠埃希菌质粒介导的喹诺酮耐药基因的检测与分析

为了解安徽省合肥地区鸡源致病性大肠埃希菌对氟喹诺酮类药物(fluoroquinolones,FQs)的耐药性及质粒介导的喹诺酮耐药基因(plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR)的流行情况,对从合肥地区多个规模化养鸡场病鸡病料中分离保存的37株疑似大肠埃希菌进行细菌分离培养、生化编码鉴定和致病性测定。利用K-B纸片琼脂扩散法检测鸡源致病性大肠埃希菌对4种FQs的耐药性,设计并合成4对特异性引物通过菌液PCR法对所分离细菌进行PMQR基因(qnrA、qnrB、qnrS、qepA)扩增。结果显示,所检测的37份疑似病料均为致病性大肠埃希菌;37株大肠埃希菌中对FQs呈3耐以上(包括3耐)菌株占67.57%(25/37);37株大肠埃希菌中检测到qnrA基因,检出率为56.77%(21/37),而qnrB、qnrS、qepA基因均未检出。提示合肥地区鸡源致病性大肠埃希菌对FQs耐药性严重,PMQR基因以qnrA基因为主,且qnrA基因的流行与FQs耐药性具有相关性。

鸡源大肠杆菌喹诺酮类药物耐药基因的检测与分析

为了解湖北地区鸡源大肠杆菌喹诺酮类耐药基因（PMQR）的流行现状与耐药表型的相关性，采用纸片扩散法对2014～2015年分离的54株鸡源大肠杆菌临床分离株进行7种喹诺酮类药物体外敏感性测定，通过PCR检测qnrA、qnrB、qnrS基因，对基因检测阳性株进行I类整合子检测。结果：54株鸡源大肠杆菌对萘啶酸、依诺沙星、洛美沙星、培氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、左旋氧氟沙星耐药率分别为72．2％、53．7％、53．7％、51．8％、50．0％、44．4％和22．2％；54株鸡源大肠杆菌中，10株（18．5％）检出qnrA基因，未检出qnrB、qnrS基因，且qnrA基因阳性株I类整合子为阳性。结果表明，湖北地区鸡源大肠杆菌对兽医临床常用的喹诺酮类药物耐药严重，且存在质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA的流行，而qnrA基因与I类整合子具有相关性，应加强监测。

食源性沙门氏菌携带质粒介导的喹诺酮类耐药基因的液相芯片检测技术研究

目的:建立应用新型液相芯片技术检测食源性沙门氏菌携带的质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因中4种基因:qnrS、aac(6')-Ib-cr、oqxA、oqxB的方法。方法:针对食源性沙门氏菌携带的qnrS、aac(6')-Ib-cr、oqxA、oqxB四种PMQR基因,设计对应引物和微球,采用液相芯片技术对7株标准菌株进行特异性实验;对4株各含1种PMQR基因的食源性沙门氏菌进行重复性和灵敏度实验;然后检测来自食源性风险监测的71株耐喹诺酮类沙门氏菌,和普通PCR进行对比实验。结果:成功建立了液相芯片技术检测食源性沙门氏菌携带的qnrS、aac(6')-Ib-cr、oqxA、oqxB四种PMQR基因的方法,携带qnrS基因的耐药株检出限为5 CFU/mL、携带aac(6')-Ib-cr基因的耐药株检出限为25 CFU/mL、携带oqxA和oqxB基因的耐药株检出限为10 CFU/mL。所有阳性判定结果荧光中位值(MFI)均≥5倍阴性对照组。重复性实验变异系数(CV)均小于5%,特异性实验结果特异性100%,阴性菌株无阳性信号反应。qnrS检出率29.6%(21/71)、aac(6')-Ib-cr 35.2%(25/71)、oqxA 28.2%(20/71)、oqxB 23.9%(17/71),方法比对的结果符合率为100%。结论:实验建立的液相芯片技术检测食源性沙门氏菌质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrS、aac(6')-Ib-cr、oqxA、oqxB的方法具有灵敏度高、特异性好、稳定性强、结果准确的特点,可以为食源性沙门氏菌PMQR基因的检测以及耐药性的监控提供技术支撑。

兔源大肠杆菌对喹诺酮药物耐药性及质粒介导的耐药基因检测

为了解四川省兔源大肠杆菌(E.coli)对喹诺酮药物耐药性及质粒介导的喹诺酮耐药(PMQR)基因的携带情况,本研究从四川地区规模化家兔养殖场共分离鉴定出97株E.coli,采用Kirby-Bauer(K-B)纸片法对分离株进行喹诺酮药物耐药性测定,同时采用PCR方法对qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qnrVC、aac(6')-Ib-cr、qep A、oqx A、oqx B等PMQR基因进行检测。结果显示:分离株对左氧氟沙星耐药率最高为49.48%,对依诺沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星和环丙沙星的耐药率依次为48.45%、46.39%、39.17%、35.05%和34.02%;PMQR检测发现:aac(6')-Ib-cr检出率最高为80.4%,qnrD、qnrS、oqxA和oqxB,检出率分别为59.8%、59.8%、63.9%和51.5%,未检出qnrA、qnrB、qnrC、qnrVC和qepA。本研究通过对97株兔源E.coli对喹诺酮药物的耐药性及相关PMQR基因检测,初步明确四川地区兔源大肠杆菌对喹诺酮药物的耐药情况及PMQR的流行情况,为该地区家兔大肠杆菌病的防治中有效使用喹诺酮类药物提供参考。