哈尔滨地区猪源大肠杆菌PMQR基因流行性检测

为了解哈尔滨地区猪源大肠杆菌中质粒介导的氟喹诺酮耐药(Plasmid mediated fluoroquinolone resistant,PMQR)基因的流行情况,本文通过对哈尔滨地区规模化养猪场进行采样处理,最终分离得到67株猪源大肠杆菌菌株,采用微量肉汤稀释法测定其对8种药物的最小抑菌浓度,针对PMQR基因设计特异性引物进行PCR扩增,结果显示,对8种兽医临床常用抗菌药物耐药率较高,多表现为多重耐药。oqx AB,qnr S,aac(6′)-Ib-cr,qnr B,qep A的检出率分别为70.15%,64.18%,22.39%,13.43%,11.94%,并没有检测到qnr A、qnr C、qnr D基因,这表明,PMQR基因在哈尔滨地区猪群中存在很高的检出率,这势必会加剧临床用药的难度,并且还为基因的水平传播提供可能。

猪源大肠埃希菌中质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因的多样性研究

为研究陕西省关中猪源大肠埃希菌的耐药情况及质粒介导的喹诺酮耐药(PMQR)基因的流行性与多样性,于2017年4月—2018年11月从陕西关中地区数个养猪场分离获得470株大肠埃希菌,采用微量肉汤稀释法测定其对包括3种氟喹诺酮类药物在内的6类抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC),PCR扩增检测其携带的PMQR基因,并分析PMQR基因阳性菌株gyrA和parC基因的质粒介导喹诺酮耐药决定区(QRDR)的突变情况。结果显示,陕西猪源大肠埃希菌对阿莫西林和土霉素的耐药率高达100%和98.51%,对阿米卡星、氟苯尼考、替米考星和头孢噻呋的耐药率分别为60.64%、52.98%、50.85%和44.47%,且89.58%为多重耐药菌株。对3种氟喹诺酮类药物恩诺沙星、普多沙星和环丙沙星的耐药率分别为89.58%、57.66%和56.80%。对美罗培南最为敏感,未发现耐药菌株,但有9株大肠埃希菌对美罗培南的敏感性为中介。对氟喹诺酮类药物耐药的菌株中,PMQR基因qnrS、aac(6′)-Ib-cr、qnrB、qnrA、qnrD和qepA的检出率分别为36.52%、30.14%、17.38%、11.45%和2.49%,且55.30%的菌株携带1种PMQR基因,37.90%携带2种PMQR基因,6.40%携带3种PMQR基因,0.35%携带4种PMQR基因。在282株携带PMQR基因的菌株中,279株发生QRDR突变,其中以gyrA基因的Ser83Leu突变为主。132株PMQR基因阳性菌株parC基因发生Ser80Ile或Ser80Ile+Glu84Val突变。随着菌株所携带PMQR基因的增多,gyrA和parC基因的突变位点也相应增加,细菌的耐药水平也随之增加。

扬州市流浪犬肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌耐药性分析及PMQR基因检测

为了解扬州市流浪犬相关肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的耐药情况及质粒介导的喹诺酮类耐药(plasmid-mediated quinolone resistant, PMQR)基因的流行性与多样性,从扬州市犬只留检所采集156份样品进行肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的分离、纯化与鉴定;采用琼脂稀释法测定分离株对15种抗菌药物的最小抑菌浓度,PCR检测喹诺酮类耐药菌株PMQR基因的携带情况。结果表明:共分离到82株肺炎克雷伯菌和119株大肠埃希菌,其中肺炎克雷伯菌对氨苄西林的耐药率最高(97.56%),其次是磷霉素(75.61%),有7株菌对6种以上的药物耐药;119株大肠埃希菌中有79株菌至少对1种药物耐药,对四环素、氨苄西林、萘啶酸、复方新诺明和环丙沙星的耐药率分别为48.74%、37.82%、26.05%、29.41%和10.08%, 12株菌耐6种以上药物。共分离到40株喹诺酮耐药菌株,PMQR基因qnrS、oqxAB、qnrD和aac(6′)-Ib-cr的检出率分别为22.50%、17.50%、7.50%和7.50%,且有1株肺炎克雷伯菌和1株大肠埃希菌同时携带aac(6′)-Ib-cr、qnrD和qnrS。综上,扬州市流浪犬是多重耐药菌潜在的储存库,且存在PMQR基因的流行,应引起重视。

食品动物源沙门氏菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测与分析

为了解食品动物源沙门氏菌质粒介导喹诺酮类耐药性(Plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR),采用微量肉汤稀释法和PCR方法,检测了316株食品动物源沙门氏菌对20种抗菌药物的敏感性,以及菌株中PMQR基因的携带率。结果显示:316株沙门氏菌对20种抗菌药物呈不同程度的耐药性,95.57%菌株为多重耐药菌;316株菌中未检出qnrA、qnrC、qnrD、qnrS和qepA基因,7.91%菌株检出qnrB基因,15.19%菌株检出aac(6′)-Ib-cr基因,7.91%菌株检出oqxA基因,8.86%菌株检出oqxB基因,这是首次在沙门氏菌中发现oqxAB基因;98.11%PMQR阳性菌同时携带2种及以上的耐药基因,呈8～17耐的多重耐药性,其中以qnrB和aac(6′)-Ib-cr基因型为主;53株PMQR阳性菌分属于5种不同的基因型,耐药表型或耐药基因型不同的菌株却有相同的PF-GE谱型。本次检测的316株食品动物源沙门氏菌耐药较为严重;菌株主要携带qnrB、aac(6′)-Ib-cr及oqxAB基因;不同来源菌株存在同一耐药克隆株的流行。

鸡源大肠埃希菌质粒介导的喹诺酮耐药基因的检测与分析

为了解安徽省合肥地区鸡源致病性大肠埃希菌对氟喹诺酮类药物(fluoroquinolones,FQs)的耐药性及质粒介导的喹诺酮耐药基因(plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR)的流行情况,对从合肥地区多个规模化养鸡场病鸡病料中分离保存的37株疑似大肠埃希菌进行细菌分离培养、生化编码鉴定和致病性测定。利用K-B纸片琼脂扩散法检测鸡源致病性大肠埃希菌对4种FQs的耐药性,设计并合成4对特异性引物通过菌液PCR法对所分离细菌进行PMQR基因(qnrA、qnrB、qnrS、qepA)扩增。结果显示,所检测的37份疑似病料均为致病性大肠埃希菌;37株大肠埃希菌中对FQs呈3耐以上(包括3耐)菌株占67.57%(25/37);37株大肠埃希菌中检测到qnrA基因,检出率为56.77%(21/37),而qnrB、qnrS、qepA基因均未检出。提示合肥地区鸡源致病性大肠埃希菌对FQs耐药性严重,PMQR基因以qnrA基因为主,且qnrA基因的流行与FQs耐药性具有相关性。

兔源大肠杆菌对喹诺酮药物耐药性及质粒介导的耐药基因检测

为了解四川省兔源大肠杆菌(E.coli)对喹诺酮药物耐药性及质粒介导的喹诺酮耐药(PMQR)基因的携带情况,本研究从四川地区规模化家兔养殖场共分离鉴定出97株E.coli,采用Kirby-Bauer(K-B)纸片法对分离株进行喹诺酮药物耐药性测定,同时采用PCR方法对qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qnrVC、aac(6')-Ib-cr、qep A、oqx A、oqx B等PMQR基因进行检测。结果显示:分离株对左氧氟沙星耐药率最高为49.48%,对依诺沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星和环丙沙星的耐药率依次为48.45%、46.39%、39.17%、35.05%和34.02%;PMQR检测发现:aac(6')-Ib-cr检出率最高为80.4%,qnrD、qnrS、oqxA和oqxB,检出率分别为59.8%、59.8%、63.9%和51.5%,未检出qnrA、qnrB、qnrC、qnrVC和qepA。本研究通过对97株兔源E.coli对喹诺酮药物的耐药性及相关PMQR基因检测,初步明确四川地区兔源大肠杆菌对喹诺酮药物的耐药情况及PMQR的流行情况,为该地区家兔大肠杆菌病的防治中有效使用喹诺酮类药物提供参考。

牛源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药性分析

【目的】了解牛源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药特征,为临床合理用药提供理论依据。【方法】从不同牛场采集腹泻犊牛粪样分离鉴定大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法测定大肠杆菌对环丙沙星、恩诺沙星和诺氟沙星3种氟喹诺酮类药物的最小抑菌浓度(MIC),PCR检测质粒介导的喹诺酮类耐药(PMQR)基因(qnrA、qnrB、qnrD、qnrS、aac(6′)-Ib和qepA基因)及喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变(gyrA和parC基因),并选择2株携带PMQR基因的大肠杆菌经恩诺沙星诱导后检测QRDR的gyrA和parC基因突变。【结果】分离鉴定得到75株大肠杆菌,其中60.00%的菌株对至少2种FQs耐药,40.00%的菌株对环丙沙星、恩诺沙星和诺氟沙星均耐药,且对恩诺沙星的耐药程度较为严重。75株大肠杆菌均未检测到qnrA、qnrD和qepA基因,但检测出qnrS、aac(6′)-Ib亚型aac(6′)-Ib-cr和qnrB基因,61.33%的菌株至少携带1个PMQR基因,其中以qnrS和aac(6′)-Ib-cr最为常见。58.67%的大肠杆菌发生了QRDR突变,主要突变方式为GyrA:(Ser 83 Leu+Asp 87 Asn)+ParC:Ser 80 Ile,发生突变且携带PMQR基因的大肠杆菌对环丙沙星、恩诺沙星和诺氟沙星均耐药。恩诺沙星诱导后,PMQR阳性菌的gyrA基因发生5处碱基突变,PMQR阴性菌无碱基突变。【结论】大肠杆菌耐氟喹诺酮类药物主要与QRDR突变密切相关,因此兽医临床上应合理使用氟喹诺酮类药物来减缓大肠杆菌的耐药性。

2012-2013年山东省禽源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的检测

为研究近年来山东省禽源致病性大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药（plasmid-mediated quinolone resistance， PMQR）基因的基因型分布，及其对喹诺酮类抗生素的耐药性的影响，分别采用针对qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、oqxA、oqxB与qepA 8个耐药基因的通用引物，对93株2012-2013年分离自山东省的禽源大肠杆菌进行PCR检测，并对其进行了5种喹诺酮类药物的药敏试验。结果表明山东省禽源大肠杆菌对5种喹诺酮类抗生素均产生了较高耐药性（50.54%-86.30%）；PMQR基因携带率达到60.21%（56/93），其中26.88%（25/93）的菌株携带2种PMQR基因，1.07%（1/93）的菌株携带3种PMQR基因；qnrA、qnrB、qnrC、qnrD与qepA基因未被检测到，qnrS、oqxA和oqxB基因在山东省禽源致病性大肠杆菌中分布较为广泛，其检出率依次为22.58%（21/93）、40.86%（38/93）和24.73%（23/93）。

牛源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测分析

为研究近年来新疆地区牛源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的分布及其对喹诺酮类抗生素的耐药情况,本研究于2016-2018年从新疆石河子、沙湾、奎屯、玛纳斯和伊犁5个地区12个规模化奶牛场分离出116株牛源大肠杆菌,药敏试验检测其耐药性,同时利用PCR扩增PMQR耐药基因。药敏试验结果显示,62.93%的菌株对氨苄西林耐药,耐药率最高。对链霉素、四环素、卡那霉素和恩诺沙星的耐药率依次为56.90%、54.31%、43.10%和42.24%。对头孢他啶和头孢噻肟的耐药率较低,分别为7.76%和11.21%。分离菌主要携带qnrA、qnrS和aac(6′)-Ⅰb-cr 3种耐药基因;116株大肠杆菌中有31株携带PMQR的耐药基因,检出阳性率为26.72%,其中26株仅携带1种PMQR耐药基因,占所有菌株的22.41%,4株携带2种PMQR耐药基因,占所有菌株的3.45%,1株携带3种PMQR耐药基因,占所有菌株的0.86%。综上所述,新疆地区牛源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类药物基因主要为qnrA、qnrS和aac(6′)-Ⅰb-cr 3种,且对恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星均产生不同程度的耐药性。

猪源携带质粒介导喹诺酮类耐药基因大肠杆菌气源性传播的研究

为了调查养猪场携带质粒介导喹诺酮类耐药基因大肠杆菌的气源性传播情况,本试验分别在5个猪场舍内及舍外上风向和下风向不同距离收集空气样品,并在舍内随机采集粪便样品,分离大肠杆菌。药敏试验检测其对14种抗生素的耐药性。以质粒介导喹诺酮类耐药基因(qnr、aac(6′)-Ib-cr、qepA)为指示基因,利用肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链式反应(ERIC-PCR)鉴定技术,分别对5个猪场不同样品中大肠杆菌的遗传相似性进行分析,评估其向舍外空气的传播情况。结果显示,5个猪场中的大肠杆菌对庆大霉素、卡那霉素、四环素、链霉素、萘啶酸、复方新诺明等12种常用抗生素耐药率较高,且呈现多重耐药。ERIC-PCR结果显示,46.34%(19/41)的舍内空气分离株与粪便分离株来源相同,其中73.68%(14/19)的分离株携带的耐药基因也相同;68.42%(26/38)的舍外空气分离株与舍内空气或粪便分离株来源相同,其中65.38%(17/26)的菌株携带相同的耐药基因。结果表明,起源于舍内粪便的携带质粒介导喹诺酮类耐药基因的大肠杆菌能形成气溶胶污染舍内空气,并借助舍内外气体交换,传播到舍外不同距离空气中(≥400m),对养殖场周围的环境卫生及社区居民的健康形成威胁。

犬源大肠杆菌质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因的检测及药物敏感性分析

采用PCR方法检测了102株犬源大肠杆菌中质粒介导的喹诺酮类药物耐药(plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR)基因的分布,并采用微量肉汤稀释法测定了6种抗菌药物对犬源大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)。在被检测的8种PMQR基因中,仅有oqx A、oqx B、qnr S这3种耐药基因被检测出,检出率分别为9.80%、11.76%和14.70%,其中同时含有2种耐药基因的菌株检出率为8.82%,同时含有3种耐药基因的菌株检出率为4.90%;犬源大肠杆菌对喹诺酮类药物已经具有较高的耐药性,其对恩诺沙星、环丙沙星和氧氟沙星的耐药率分别达到了71.57%、64.71%、48.04%。

合肥地区动物源致病性大肠杆菌ESBLs和PMQR基因流行分布

从安徽省合肥地区多个养殖厂分离鉴定了65株致病性大肠杆菌,用PCR方法检测ESBLs和PMQR基因的流行分布情况,用微量肉汤稀释法测定30株ESBLs和/或PMQR阳性菌对16种抗菌药物的最小抑菌浓度。PCR结果显示:ESBLs阳性率为24.6%(16/65),分别为blaOXA(16株)、blaTEM(15株)和blaCTX-M(14株),未检出blaSHV;PMQR的阳性率为46.2%(30/65),分别为qnrA(9株)、qnrS(18株)、aac(6′)-Ib-cr(28株),未检出qnrB、qnrC、qnrD和qepA;且携带ESBLs基因的阳性菌株均携带PMQR基因。首次检测出有7株大肠杆菌同时携带ES-BLs基因型(blaOXA、blaTEM、blaCTX-M)和PMQR基因型(qnrA、qnrS、aac(6′)-Ib-cr)。药物敏感性测定结果显示:30株携带ESBLs和/或PMQR基因的阳性大肠杆菌对16种抗菌药物的耐药率为16.7%～100%,耐药谱较广,耐药性较严重。16株同时携带ESBLs和PMQR基因的阳性菌株对11种及11种以上药物耐药的菌株占87.5%,14株仅携带PMQR基因的阳性菌株对11种及11种以上药物耐药的菌株占28.5%,表明携带PMQR基因的同时携带ESBLs基因大大增强了菌株的耐药性,携带耐药基因的数量和种类与菌株的多重耐药性相关。

肺炎克雷伯菌喹诺酮类药物耐药表型与PMQR基因携带相关性研究

目的探讨肺炎克雷伯菌喹诺酮类药物耐药表型与质粒介导喹诺酮类耐药基因(PMQR)携带之间的关系,为控制多药耐药肺炎克雷伯菌流行提供理论依据。方法收集医院临床2014年1月-2015年12月分离的90株肺炎克雷伯菌,其中30株对环丙沙星敏感,20株中介,40株耐药;PCR检测PMQR基因及插入序列ISCR1,对ISCR1阳性菌株采用PCR-mapping检测插入序列下游PMQR基因携带情况,通过DNA测序确定。结果 30株敏感的肺炎克雷伯菌株中qnrA基因阳性8株(26.67%),未检出可移动元件;20株中介的肺炎克雷伯菌中qnrA17株(85.00%),qnrB7株(35.00%),qnrS5株(25.00%),acc(6′)-Ib-cr基因11株(55.00%);ISCR1基因阳性15株(75.00%),PCR-mapping结果显示,ISCR1-qnrA阳性14株(70.00%);ISCR1-qnrB和ISCR1-qnrS分别检出6株(30.0%)和5株(25.00%);ISCR1-acc(6′)-Ib-cr检出4株(20.00%);40株耐药的多药耐药肺炎克雷伯菌中,qnrA共33株(82.50%),qnrB共12株(30.00%),qnrS共16株(40.00%),acc(6′)-Ib-cr28株(70.00%);ISCR1基因阳性菌株30株(75.00%),ISCR1-qnrA1阳性菌株30株,阳性率为75.00%;ISCR1-qnrB4和ISCR1-qnrS1阳性率分别为37.50%和30.00%。结论喹诺酮类中介的肺炎克雷伯菌PMQR基因携带率不低于耐药肺炎克雷伯菌,且其具备通过可移动元件进行传播的能力,因此在对这部分菌株进行多药耐药预防控制时不宜忽视。

福建地区鼠伤寒沙门菌喹诺酮耐药基因特征及MLVA分子分型

目的了解福建地区鼠伤寒沙门菌喹诺酮耐药状况及其分子分型机制。方法采用微量肉汤稀释法测定萘啶酸、环丙沙星和左氧氟沙星对83株鼠伤寒沙门菌的最小抑菌浓度(MIC);PCR扩增沙门菌的喹诺酮耐药区(QRDR)基因(gyrA,parC)和质粒介导的喹诺酮耐药基因(PMQR)(aac(6’)-Ib-cr,oqxA,oqxB);采用多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)比较菌株间的遗传相似性。结果 83株鼠伤寒沙门菌对萘啶酸、环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为27.7%(23/83),13.2%(11/83)和4.8%(4/83),QRDR基因突变率为25.3%(21/83)。21株基因突变株存在gyrA和parC两个突变类型,突变氨基酸类型分别为Ser83Tyr、Ser83Phe、Asp87Tyr和Asp87Asn,其中以第87位氨基酸突变为主,占总突变数的52.4%(11/21)。parC基因突变菌1株,为第80位氨基酸突变Ser80Arg,该菌株同时为gyrA:Ser83Phe突变。PMQR基因(aac(6’)-Ib-cr,oqxA,oqxB)在83株鼠伤寒沙门菌中的检出率分别为20.5%(17/83)、15.7%(13/83)和16.9%(14/83)。72株鼠伤寒沙门菌经MLVA分型后遗传关联度介于42.3%~100%之间,按照100%的相似度可分为18个型别,其中次优势型MT5菌株耐药基因与MLVA分型表现出一定的关联性。结论福建地区鼠伤寒沙门菌对喹诺酮类药物的耐药率不高,但环丙沙星和左氧氟沙星中度敏感菌中存在耐药基因突变,并具有一定的聚集性,需继续加强检测。