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建设工程事故文本的知识发现:以PPE类不安全行为为例
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作者 吴迪 贾心雨 +2 位作者 韩博雯 张先锋 郭聖煜 《工程管理学报》 2024年第5期131-136,共6页
为了丰富建设工程领域的安全知识,从事故文本中挖掘和发现施工人员的不安全行为,以个人防护用品PPE类不安全行为为例,采用基于规则的自然语言处理方法,从事故文本中自动抽取此类不安全行为。从政府官网等收集195份建设工程事故调查报告... 为了丰富建设工程领域的安全知识,从事故文本中挖掘和发现施工人员的不安全行为,以个人防护用品PPE类不安全行为为例,采用基于规则的自然语言处理方法,从事故文本中自动抽取此类不安全行为。从政府官网等收集195份建设工程事故调查报告作为文本挖掘语料,通过哈尔滨工业大学的语言技术平台LTP展开词法分析和依存句法分析,构建PPE类不安全行为的11条抽取规则并确定抽取流程。再以网络爬虫收集的427份事故调查报告展开实例应用,按照流程自动抽取PPE类不安全行为。结果表明:平均抽取准确率为94.70%,召回率为67.57%。研究能够为建设工程事故文本的知识发现提供理论启示和实践路径。 展开更多
关键词 知识发现 事故文本 ppe类不安全行为 自然语言处理
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稳定表达牛分枝杆菌PPE13的THP-1细胞株的建立
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作者 刘卓彤 毕斯琪 +3 位作者 孟祥苗 胡燕萍 宋厚辉 杨杨 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第5期179-184,共6页
为了深入研究牛分枝杆菌PPE13在病原-宿主相互作用中的具体机制,本研究利用慢病毒表达系统构建了PPE13稳定表达的THP-1细胞系。首先,采用分子克隆技术,以牛分枝杆菌基因组DNA为模板扩增出ppe13目的片段,构建含有ppe13片段的重组慢病毒... 为了深入研究牛分枝杆菌PPE13在病原-宿主相互作用中的具体机制,本研究利用慢病毒表达系统构建了PPE13稳定表达的THP-1细胞系。首先,采用分子克隆技术,以牛分枝杆菌基因组DNA为模板扩增出ppe13目的片段,构建含有ppe13片段的重组慢病毒表达质粒,将该质粒和慢病毒包装质粒转染至239T细胞中,72 h后收集病毒。然后,将获得的病毒感染THP-1细胞中,经1μg/mL嘌呤霉素筛选获得稳定表达PPE13的细胞株THP-1/PPE13。最后,使用ELISA方法检测稳定表达细胞系中TNF-α、IL-1β和IL-6分泌的情况,以验证细胞系中PPE13的生物学活性。结果显示,相较于对照细胞THP-1/Con,THP-1/PPE13中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平均显著升高。该细胞系的建立为深入研究PPE13调控细胞信号通路的功能提供了实验基础。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 ppe13 慢病毒包装 稳定表达
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无卤阻燃PPE注塑TV后壳的成型缺陷以及解析
3
作者 陆灿亮 关安南 郭峰 《广州化工》 CAS 2024年第4期173-177,共5页
无卤阻燃PPE材料由于其优异的性能以及外观广泛应用于高档显示器外壳,然而相比于传统的PC/ABS材料,其在注塑成型中通常会遇到冷胶、料花、气纹等大量问题限制了其的广泛应用。本文从实际注塑成型出发,对应用于TV后壳的无卤阻燃PPE材料... 无卤阻燃PPE材料由于其优异的性能以及外观广泛应用于高档显示器外壳,然而相比于传统的PC/ABS材料,其在注塑成型中通常会遇到冷胶、料花、气纹等大量问题限制了其的广泛应用。本文从实际注塑成型出发,对应用于TV后壳的无卤阻燃PPE材料在注塑过程中常见的成型缺陷进行分析,探究注塑工艺参数、以及模具结构设计对这些成型缺陷的影响,进而为产品的开发设计以及成型注塑提供指导。 展开更多
关键词 无卤阻燃ppe TV后壳 成型缺陷
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CF/PPEK、CF/PPES复合材料高温力学性能研究 被引量:7
4
作者 刘文博 王荣国 +3 位作者 张洪涛 贾近 矫维成 谢怀勤 《材料科学与工艺》 EI CAS CSCD 2004年第2期183-185,189,共4页
采用预浸热压成型工艺制备碳纤维增强杂萘联苯聚醚酮(CF/PPEK)和碳纤维增强杂萘联苯聚醚砜(CF/PPES)单向复合材料试样,通过对试样在常温和高温条件下的力学性能测试与分析,研究了高性能热塑性复合材料在高温条件下力学性能及其强度和模... 采用预浸热压成型工艺制备碳纤维增强杂萘联苯聚醚酮(CF/PPEK)和碳纤维增强杂萘联苯聚醚砜(CF/PPES)单向复合材料试样,通过对试样在常温和高温条件下的力学性能测试与分析,研究了高性能热塑性复合材料在高温条件下力学性能及其强度和模量保留率的变化规律.实验表明,在250℃下其拉伸和弯曲强度及模量的保留率均在60%以上,仍具有极高的承载能力.利用Tr—n预测模型对这两种复合材料高温力学性能进行的预测结果与试验值基本吻合,从而验证了这个模型的可行性. 展开更多
关键词 CF/ppeK CF/ppeS 高温力学性能 预测模型 保留率 热塑复合材料 碳纤维增强杂萘联苯聚醚酮 碳纤维增强杂萘联苯聚醚砜
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与结核分枝杆菌PE25/PPE41和PE35/PPE68相互作用的宿主蛋白的筛选 被引量:1
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作者 李田田 陈利苹 刘思国 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期504-507,共4页
为筛选与结核分枝杆菌(MTB)的PE25/PPE41和PE35/PPE68两对异源二聚体相互作用的宿主蛋白,本研究以这两对异源二聚体为诱饵蛋白筛选与其相互作用的宿主蛋白。首先将PCR扩增的PE25/PPE41或PE35/PPE68基因串联克隆于改造的pc DNA3.1(+)中(... 为筛选与结核分枝杆菌(MTB)的PE25/PPE41和PE35/PPE68两对异源二聚体相互作用的宿主蛋白,本研究以这两对异源二聚体为诱饵蛋白筛选与其相互作用的宿主蛋白。首先将PCR扩增的PE25/PPE41或PE35/PPE68基因串联克隆于改造的pc DNA3.1(+)中(在5'端引入了以编码烟草蚀纹病毒蛋白酶切位点的序列连接的ZZ和Flag标签序列),构建诱饵重组质粒pcDNA-PE25-PPE41和pc DNA-PE35-PPE68。分别将构建的诱饵重组质粒转染293T细胞后提取细胞总蛋白,经ZZ和Flag标签蛋白两步串联亲和层析钓取宿主蛋白,SDS-PAGE电泳分离后切取差异蛋白胶条进行质谱分析,结果显示,PE25/PPE41鉴定到15个差异蛋白,PE35/PPE68鉴定到29个差异蛋白,并分别挑选了与PE25/PPE41和PE35/PPE68相互作用的3个和7个差异蛋白,为进一步验证与PE25/PPE41和PE35/PPE68直接作用的宿主蛋白及研究其生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 PE25/ppe41 PE35/ppe68 宿主互作蛋白 串联亲和纯化
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基于RAGA的PPE模型在土壤质量等级评价中的应用研究 被引量:26
6
作者 付强 金菊良 +1 位作者 门宝辉 梁川 《水土保持通报》 CSCD 北大核心 2002年第5期51-54,共4页
以往的土壤分类与等级综合评价多是建立在模糊数学 (Fuzzy)基础上的模糊聚类分析与模糊综合评判 ,因此不可避免的涉及权重矩阵人为干扰 ,导致分类与评价结果的人为倾向。本文将高维降维技术——投影寻踪评价模型 (PPE)应用到土壤学科领... 以往的土壤分类与等级综合评价多是建立在模糊数学 (Fuzzy)基础上的模糊聚类分析与模糊综合评判 ,因此不可避免的涉及权重矩阵人为干扰 ,导致分类与评价结果的人为倾向。本文将高维降维技术——投影寻踪评价模型 (PPE)应用到土壤学科领域 ,利用改进的加速遗传算法 (RAGA)优化投影方向 ,将多维数据指标转换到低维子空间 ,通过寻求最优投影方向及投影函数值来实现对土壤的分类与等级评价 ,避免了主观赋权的人为干扰 ,取得了较好效果 。 展开更多
关键词 应用研究 RAGA ppe 土壤分类 土壤质量等级评价 加速遗传算法 投影寻踪评价模型
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基于FIAS与PPE理论的课堂教学评价研究 被引量:27
7
作者 武小鹏 张怡 彭乃霞 《电化教育研究》 CSSCI 北大核心 2016年第11期93-99,107,共8页
语言是课堂教学的重要载体,抓住了课堂语言信息就等于掌握了课堂教学的本质。本研究以弗兰德斯互动分析系统为基础,构建了课堂教学语言量化综合分析框架。该框架包括矩阵分析和动态曲线分析两个维度。其中,矩阵分析分为课堂结构、风格... 语言是课堂教学的重要载体,抓住了课堂语言信息就等于掌握了课堂教学的本质。本研究以弗兰德斯互动分析系统为基础,构建了课堂教学语言量化综合分析框架。该框架包括矩阵分析和动态曲线分析两个维度。其中,矩阵分析分为课堂结构、风格倾向、情感气氛三个子维度;动态曲线分为教师语言、学生语言和沉默或混乱语言三个子维度。依据该框架,我们对课堂教学语言信息进行编码,结合PPE课堂语言等级评价模型,得到专家型和新手型两类教师的评价等级。本研究通过基于数据的评价方式,采用量化"切片"的技术,抛开传统的主观评价方式,通过充分挖掘数据背后隐藏的规律,发现课堂教学语言的隐性问题,为教师的课堂语言提出合理可操作的改进措施;同时也为学生学习数学在语言方面提出建议,达到进一步改进课堂教学的目的。 展开更多
关键词 大数据 FIAS ppe 课堂语言评价 课堂互动
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PPE树脂的应用研究 被引量:15
8
作者 毕松林 吴佩琛 +4 位作者 戴红旗 李忠正 钱兵 蔡志勇 李丹 《中国造纸》 CAS 北大核心 1993年第1期32-37,共6页
本文在实验室条件下研究了湿强剂PPE树脂在麦草浆中的应用。主要探讨了这类树脂对纸张某些性能的改善、助滤/助留功能以及它与某些其它湿部添加剂的增效效应。并就如何发挥树脂的最佳效能作了较为系统的讨论。
关键词 湿强剂 ppe树脂 麦草浆 应用
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PPE树脂与阴离子型聚合物共用技术的研究 被引量:13
9
作者 詹怀宇 吴姣平 岳保珍 《中国造纸》 CAS 北大核心 1997年第1期34-38,共5页
进行了聚酰胺聚胺环氧氯丙烷树脂与阴离子型聚合物共用于漂白硫酸盐苇浆的研究,探讨了双元聚合物系统对纸张干、湿强度的增效效应。
关键词 硫酸盐 苇浆 ppe树脂 阴离子型聚合物 纸浆
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大鼠三叉神经中脑核内PPD、PPE样阳性终末与PAG和PV共存神经元的联系 被引量:6
10
作者 陈鹏 李金莲 李继硕 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期109-113,T002,共6页
目的 观察大鼠三叉神经中脑核 (Vme)神经元内磷酸激活的谷氨酰胺酶 (PAG)和小白蛋白 (PV)的共存关系 ,以及前强啡肽原 (PPD)样和前脑啡肽原 (PPE)样阳性终末与 PAG和 PV共存神经元之间的联系。 方法 免疫荧光组织化学双重和三重染色... 目的 观察大鼠三叉神经中脑核 (Vme)神经元内磷酸激活的谷氨酰胺酶 (PAG)和小白蛋白 (PV)的共存关系 ,以及前强啡肽原 (PPD)样和前脑啡肽原 (PPE)样阳性终末与 PAG和 PV共存神经元之间的联系。 方法 免疫荧光组织化学双重和三重染色技术 ,在激光共聚焦显微镜下观察。 结果 在 Vm e内可见大量 PAG样和 PV样免疫反应神经元 ,吻尾方向上几乎在其全长出现 ,多为大的假单极神经元。许多 PAG样阳性神经元同时呈 PV样免疫反应 ,双标细胞占全部标记细胞的 95 %以上。在激光共聚焦显微镜下观察到 ,少量 PPD样或 PPE样阳性终末围绕在 PAG样和 PV样双重标记的 Vme神经元胞体周围 ,并与之形成密切接触。 结论 在面口部本体感觉信息由 Vme向更高一级神经元传递的过程中 ,PV可能和谷氨酸一起发挥着重要的作用 ,与此同时 Vm e神经元还可能接受中枢内强啡肽样和脑啡肽样神经终末对它的调控。 展开更多
关键词 三叉神经中脑核 强啡肽 脑啡肽 谷氨酸 小白蛋白 大鼠 PPD ppe PAG PV
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PPE/EP体系的形态、固化行为和耐热性研究 被引量:3
11
作者 田勇 皮丕辉 +2 位作者 文秀芳 程江 杨卓如 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第5期759-762,共4页
用等温差示扫描量热法和红外光谱(FT-IR)研究了聚苯醚(PPE)/环氧树脂(EP)体系的固化反应,得出了固化反应程度与反应时间的关系曲线,结果表明在所研究的温度范围内,等温固化温度越高,PPE/EP体系的反应速率越快,最终的反应程度越高。红外... 用等温差示扫描量热法和红外光谱(FT-IR)研究了聚苯醚(PPE)/环氧树脂(EP)体系的固化反应,得出了固化反应程度与反应时间的关系曲线,结果表明在所研究的温度范围内,等温固化温度越高,PPE/EP体系的反应速率越快,最终的反应程度越高。红外的研究结果表明,在180℃固化2h后,EP不能固化完全,这是由于在固化过程中,伴随着体系的凝胶及EP分子量的逐步增加,引起体系的粘度增大所致。采用扫瞄电子显微镜和综合热分析仪,分别研究了PPE/EP混合物固化材料的形态和耐热性。研究结果表明在PPE/EP体系中加入TAIC(triallylisocyanurate)可有效地提高体系的耐化学药品性,但体系的耐热性也将随着TAIC的加入降低;PPE/EP混合物的耐热性随着PPE含量的增加而提高。 展开更多
关键词 聚苯醚(ppe) 环氧树脂(EP) 形态 耐热性 固化行为
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医护人员对新型冠状病毒肺炎病房设置PPE室专职人员的认知与态度调查 被引量:2
12
作者 邓桂元 王青霞 +4 位作者 陈冲 吴秀颖 李丽 周建辉 李芳 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1199-1202,共4页
目的调查新型冠状病毒肺炎病房设立个人防护用品(PPE)室专职人员医疗队员态度,探讨其对医务人员个人防护的作用和意义。方法设置问卷表对所在医院不同的医疗队进行调查,同时根据个人防护标准流程,设计《援鄂医疗队穿脱PPE督查表》,由中... 目的调查新型冠状病毒肺炎病房设立个人防护用品(PPE)室专职人员医疗队员态度,探讨其对医务人员个人防护的作用和意义。方法设置问卷表对所在医院不同的医疗队进行调查,同时根据个人防护标准流程,设计《援鄂医疗队穿脱PPE督查表》,由中南大学湘雅医院医疗队PPE室专职人员对进出新冠病房每位医务人员进行全程防护流程执行情况的督导提示和心理积极暗示,记录、归纳、总结亟待杜绝的问题和疏导调节的心理状况,并对督导效果进行评价。结果问卷表结果显示,93%医疗队成员认为PPE专职人员设立非常重要,97%医疗队成员希望在穿戴防护用具时能有专人指导,99%医疗队成员则希望穿脱PPE时能有专人协助并检查是否穿戴合格。2020年2月9日至26日期间,共对进出新冠病房医务人员约5600人次进行督导,PPE室专职人员杜绝发生潜在问题共计106项。结论新型冠状病毒肺炎病房工作的医务人员认为,设置PPE室专职人员能有效确保医务人员自身防护安全,进一步确保实现医务人员"零感染"的目标。医疗队成员同时也支持在新冠病房及时建立PPE室并设立专职人员,明确其职责,并不断优化改进。 展开更多
关键词 新冠状病毒肺炎 专职人员 ppe 医疗队成员
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结核分枝杆菌PPE68基因真核表达质粒的构建及鉴定 被引量:3
13
作者 靳志栋 何永林 +4 位作者 徐蕾 佘茜 张丹 张壮苗 杨春 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期907-910,共4页
目的:构建结核分枝杆菌(Mycobacteria tuberculosis,Mtb)PPE68基因的真核表达质粒,观察PPE68基因在小鼠巨噬细胞株RAW264.7中的表达。方法:将MtbPPE68基因克隆亚至真核表达质粒pBudCE4.1中,构建真核表达质粒pBudCE4.1-PPE68。以真核表... 目的:构建结核分枝杆菌(Mycobacteria tuberculosis,Mtb)PPE68基因的真核表达质粒,观察PPE68基因在小鼠巨噬细胞株RAW264.7中的表达。方法:将MtbPPE68基因克隆亚至真核表达质粒pBudCE4.1中,构建真核表达质粒pBudCE4.1-PPE68。以真核表达质粒pBudCE4.1-PPE68体外转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞,通过RT-PCR及Western blot法分别在转录水平及翻译水平检测PPE68基因的表达。结果:重组表达质粒经双酶切所切下的片段大小与理论值相符,测序结果与Gen-bank注录的PPE68基因序列一致。重组质粒瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7,用RT-PCR及Western blot法分别在转录水平及翻译水平检测PPE68基因的表达。结论:成功构建了PPE68基因的重组真核表达质粒pBudCE4.1-PPE68,并在小鼠巨噬细胞株RAW264.7中得到了成功表达。为对其免疫原性、免疫反应性及免疫保护作用的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 MTB ppe68 巨噬细胞
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PPES/MC尼龙6原位复合材料的制备与表征 被引量:6
14
作者 姚辉梅 林志勇 +2 位作者 肖凤英 李宝熺 童长青 《塑料工业》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期13-16,共4页
利用己内酰胺(CL)单体,采用阴离子原位聚合方法制得了聚芳醚砜(PPES)/MC尼龙6复合材料。FTIR分析结果表明,PPES与己内酰胺之间存在一定的氢键相互作用,使得PPES在己内酰胺熔体中能够很好地溶解。SEM结果表明PPES在MC尼龙6基体中能够较... 利用己内酰胺(CL)单体,采用阴离子原位聚合方法制得了聚芳醚砜(PPES)/MC尼龙6复合材料。FTIR分析结果表明,PPES与己内酰胺之间存在一定的氢键相互作用,使得PPES在己内酰胺熔体中能够很好地溶解。SEM结果表明PPES在MC尼龙6基体中能够较好地分散。差示扫描量热法和X射线衍射法分析结果表明复合材料中PPES对MC尼龙6的结晶起异相成核作用,提高了MC尼龙6的结晶温度,但不改变MC尼龙6的α晶型结构。TG结果表明PPES的加入提高了复合材料的热稳定性能。 展开更多
关键词 聚芳醚砜(ppeS) 铸型尼龙6(MC尼龙6) 复合材料 阴离子原位聚合
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结核分枝杆菌PE/PPE蛋白研究进展 被引量:2
15
作者 孙林 闵晨雨 +1 位作者 钱源 焦新安 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期499-503,共5页
PE/PPE蛋白是分枝杆菌所独有的蛋白家族,因其氨基端分别含有Pro-Glu(PE)和Pro-Pro-Glu(PPE)的基序而得名,其编码基因约占结核分枝杆菌整个基因组的10%。PE/PPE蛋白从被发现开始就引起了人们的广泛兴趣,本文就近年来的研究进展作一综述。
关键词 结核分枝杆菌 PE ppe蛋白
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结核分枝杆菌RD1区PPE68/GST融合蛋白表达质粒的构建及表达 被引量:3
16
作者 曾林子 陈建平 +3 位作者 刘成君 李红霞 姚卫 杨志荣 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2007年第1期59-61,共3页
目的:构建结核分枝杆菌PPE68/GST融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌JM109中诱导表达.方法:利用PCR技术从结核杆菌H37Rv中扩增Rv3873基因,并将其定向克隆pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rv3873并转化E.coliJM109,异丙基-β-D-硫代... 目的:构建结核分枝杆菌PPE68/GST融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌JM109中诱导表达.方法:利用PCR技术从结核杆菌H37Rv中扩增Rv3873基因,并将其定向克隆pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rv3873并转化E.coliJM109,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.采用GST蛋白纯化试剂盒进行重组融合蛋白纯化,SDS-PAGE和WesternBlot鉴定重组表达产物.结果:成功构建原核表达质粒pGEX-4T-1-Rv3873并表达出约Mr63000大小的PPE68/GST融合蛋白,占总菌体的40%.WesternBlot检测该融合蛋白能和结核患者多价抗血清发生反应.结论:成功地构建了原核表达质粒pGEX-4T-1-Rv3873,并在大肠杆菌得到表达. 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 RD1区 ppe68/GST融合蛋白 表达
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pBudCE4.1/PPE68DNA疫苗诱导Balb/c小鼠产生Th1免疫应答 被引量:2
17
作者 王静娴 徐蕾 +4 位作者 何永林 张壮苗 董志玲 冯鑫 杨春 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期208-211,216,共5页
目的构建结核分枝杆菌PPE68 DNA疫苗,并探讨其在小鼠体内诱导的Th1免疫应答。方法将结核分枝杆菌PPE68基因和复制子OriM基因亚克隆入真核表达质粒pBudCE4.1中构建穿梭质粒,并用其免疫Balb/c小鼠,于第3次免疫后2周处死小鼠,分别检测免疫... 目的构建结核分枝杆菌PPE68 DNA疫苗,并探讨其在小鼠体内诱导的Th1免疫应答。方法将结核分枝杆菌PPE68基因和复制子OriM基因亚克隆入真核表达质粒pBudCE4.1中构建穿梭质粒,并用其免疫Balb/c小鼠,于第3次免疫后2周处死小鼠,分别检测免疫小鼠血清IgG2a水平、IFN-γ和IL-12水平;特异性蛋白刺激后淋巴细胞增殖状态;小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果 PPE68 DNA疫苗免疫小鼠后血清中的IgG2a水平、IFN-γ和IL-12均有意义的提高,脾淋巴细胞增殖显著。脾肺未见明显病理改变。结论 PPE68DNA疫苗可有效诱导小鼠Th1免疫应答,为进一步研究其抗MTB的免疫保护作用奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 ppe68 DNA 免疫应答
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结核分枝杆菌PPE68蛋白的表达、鉴定及抗血清的制备 被引量:2
18
作者 佘茜 徐蕾 +3 位作者 何永林 靳志栋 张丹 杨春 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期803-806,共4页
目的在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌PPE68蛋白,鉴定并纯化重组rPPE68蛋白后免疫新西兰大白兔,制备兔抗PPE68多克隆抗体。方法将已经过鉴定的重组原核表达质粒pET32a(+)-PPE68转化至大肠杆菌BL21中,IPTG诱导大量表达PPE68蛋白。对表达蛋... 目的在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌PPE68蛋白,鉴定并纯化重组rPPE68蛋白后免疫新西兰大白兔,制备兔抗PPE68多克隆抗体。方法将已经过鉴定的重组原核表达质粒pET32a(+)-PPE68转化至大肠杆菌BL21中,IPTG诱导大量表达PPE68蛋白。对表达蛋白进行鉴定后利用亲和层析法进行纯化。以纯化后重组rPPE68为免疫抗原,与弗氏不完全佐剂等体积混合,采用皮下多点注射法免疫新西兰大白兔,于第3次免疫后的第7天采血。用凝集实验与Western-blot检测抗血清的特异性,并用双向免疫扩散法测定抗血清效价。结果在大肠杆菌中表达的目的产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量57 000处可见特异性条带,免疫印迹分析证实表达的目的蛋白可与结核分枝杆菌H37Rv株感染小鼠的血清发生反应。纯化的rPPE68蛋白免疫新西兰大白兔后,凝集反应与Western-blot证实了抗血清的特异性,双向免疫扩散法测得血清效价为1∶16。结论已成功表达结核分枝杆菌PPE68蛋白,制备了特异性兔抗PPE68多克隆抗体,对结核病的早期诊断提供了一种新的思路。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 ppe68 原核表达 抗血清
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儿童结核病结核分枝杆菌临床分离株抗原基因pepA和PPE18的变异研究 被引量:1
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作者 苏薇 黄延风 +2 位作者 杨震华 郑改焕 朱朝敏 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第24期2556-2562,共7页
目的对结核抗原编码基因pepA和PPE18进行测序,了解pepA和PPE18的基因多态性。方法选取重庆医科大学附属儿童医院感染科2006年12月至2013年12月收集的结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)临床分离株168株,对应168例结核病患儿... 目的对结核抗原编码基因pepA和PPE18进行测序,了解pepA和PPE18的基因多态性。方法选取重庆医科大学附属儿童医院感染科2006年12月至2013年12月收集的结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)临床分离株168株,对应168例结核病患儿,年龄(7.8±5.7)岁,其中男孩87名,女孩81名。运用PCR方法扩增目的基因pepA和PPE18并进行测序,与结核标准株H37Rv基因序列以及从免疫表位数据库(immune epitope database,IEDB)中查询到的表位序列进行对比,分析pepA和PPE18基因序列中的变异特征。结果在168株菌株中,117(69.64%)株菌株出现了PPE18基因突变,且PPE18基因的17个T细胞抗原表位有10个发生了改变。168株临床结核分离株中,共6例(9.84%)结核菌株发生了pepA基因多态性,且未造成其T细胞抗原表位改变。结论抗原pepA基因序列较保守,PPE18存在基因高度多态性,预测会对由pepA和PPE18蛋白组成的M72疫苗的免疫功能造成影响,从而影响M72疫苗的免疫有效性。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 PEPA ppe18 M72 基因多态性
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结核分枝杆菌优势蛋白ppe37的表达纯化以及对巨噬细胞NF-κB、TNF-α、IL-6 mRNA表达的影响 被引量:1
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作者 张瑞芹 汤建中 +5 位作者 赵志军 贾伟 魏军 张一琳 张兆波 徐广贤 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期803-807,共5页
目的研究在结核分枝杆菌感染过程中,ppe37蛋白引起的巨噬细胞免疫应答反应。方法利用本实验室已构建好的ppe37原核表达载体,将其转化到大肠杆菌E.coli BL21中,用IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE与Western blot鉴定后,利用Ni-Agarose His标签... 目的研究在结核分枝杆菌感染过程中,ppe37蛋白引起的巨噬细胞免疫应答反应。方法利用本实验室已构建好的ppe37原核表达载体,将其转化到大肠杆菌E.coli BL21中,用IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE与Western blot鉴定后,利用Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒对重组蛋白进行纯化并复性。利用SDS-PAGE和AlpHaImager 2200软件对纯化蛋白进行鉴定与分析。分别用浓度为100ng/mL、500ng/mL、5 000ng/mL的重组ppe37蛋白刺激RAW264.7巨噬细胞,24h、48h、72h后,用Real-time PCR检测RAW264.7巨噬细胞NF-κB、TNF-α、IL-6mRNA的表达量的变化。结果 SDSPAGE鉴定显示,重组ppe37蛋白获得了大量表达,其相对分子质量约为50kDa。经Western Blot验证,重组ppe37蛋白可与抗His单抗发生特异性反应,经AlpHaImager 2200软件薄层扫描分析,重组蛋白的纯度为96.2%,并成功的进行了蛋白复性。浓度分别为100ng/mL,500ng/mL,5 000ng/mL的重组ppe37蛋白刺激巨噬细胞,24h后Real-Time PCR检测结果显示与空白对照组相比NF-κB、TNF-αmRNA的表达没有影响(P>0.05),而IL-6mRNA的表达上调(P<0.05);48h、72h后NF-κB、TNF-α、IL-6mRNA的表达显著上调(P<0.05)。结论成功地制备并纯化了重组ppe37蛋白,重组ppe37蛋白能够活化巨噬细胞,激活细胞免疫反应,并促使巨噬细胞发生炎性反应。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 ppe37蛋白 RAW264 7巨噬细胞
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