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延缓衰老基因PPF1转化水稻的初步研究 被引量:7
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作者 李双成 张玉 +3 位作者 王世全 尹福强 邹良平 李平 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1014-1020,共7页
利用农杆菌介导法,把短日豌豆花后特异表达、具有延缓衰老作用的基因PPF1(post-floral-specificgeneexpressedinshort-day-grownG2pea)转入水稻,以期获得延缓衰老的转基因植株。约970块未成熟胚性愈伤组织与农杆菌共培养后,得到了约280... 利用农杆菌介导法,把短日豌豆花后特异表达、具有延缓衰老作用的基因PPF1(post-floral-specificgeneexpressedinshort-day-grownG2pea)转入水稻,以期获得延缓衰老的转基因植株。约970块未成熟胚性愈伤组织与农杆菌共培养后,得到了约280块抗性愈伤组织,从中分化出抗性绿苗54株。PCR和Southernblotting检测结果表明,外源基因已经插入受体基因组,其中42株含有目的基因,阳性率为77.7%。部分阳性植株分析表明,多数转基因植株的叶绿素含量和光合指标显著高于对照。衰老进程研究证实,转基因植株的叶片衰老表现一定程度的延迟。说明PPF1基因在植株内得到了表达,并具一定延缓衰老的作用。 展开更多
关键词 农杆菌介导 短日豌豆花后特异表达基因ppf1 延缓衰老 叶绿素含量 光合指标 叶片衰老进程
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PPF1基因C端片段在大肠杆菌中的融合表达和纯化以及抗体制备 被引量:6
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作者 徐云剑 苏力坦.阿巴白克力 +1 位作者 吉栩 朱玉贤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期594-599,共6页
PPF1是与G2豌豆短日不衰老现象紧密相关的基因之一 .以pSK PPF1为模板 ,用PCR方法得到了编码该蛋白C端的基因片段 ,称为PPFC .进一步将该基因片段克隆到中间载体pGEM T easy ,再酶切得到PPFC片段插入到pGEX 4T 1载体中 ,构建成表达质粒p... PPF1是与G2豌豆短日不衰老现象紧密相关的基因之一 .以pSK PPF1为模板 ,用PCR方法得到了编码该蛋白C端的基因片段 ,称为PPFC .进一步将该基因片段克隆到中间载体pGEM T easy ,再酶切得到PPFC片段插入到pGEX 4T 1载体中 ,构建成表达质粒pGEX 4T PPFC .在BL2 1细胞中经IPTG诱导表达 ,得到GST PPFC融合蛋白 .用GST亲和柱纯化得到PPFC蛋白 ,将其作为抗原得到兔源的多克隆抗体 .Western杂交分析表明所得到的抗体具有较强的特异性 ,ELISA分析证实其效价为 10 6.该抗体的获得为用免疫沉淀等免疫分析技术研究PPF1与其它蛋白质的相互作用 。 展开更多
关键词 ppf1基因 C端片段 大肠杆菌 融合表达 纯化 抗体制备 多克隆抗体 植物细胞
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Expression of the Thylakoid Membrane Localized PPF1 in Transgenic Arabidopsis Affects Chloroplast Development 被引量:3
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作者 徐云剑 王大勇 朱玉贤 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2002年第11期1314-1320,共7页
PPF1 is a vegetative growth related gene that encodes a putative membrane protein having high homology with Arabidopsis chloroplast thylakoid protein ALB3. Immunoelectron microscopic assay showed that PPF1 was mainly ... PPF1 is a vegetative growth related gene that encodes a putative membrane protein having high homology with Arabidopsis chloroplast thylakoid protein ALB3. Immunoelectron microscopic assay showed that PPF1 was mainly localized in the thylakold membrane and was highly expressed in well-developed chloroplasts of short day (SD) grown G2 pea while having a very low abundance in chloroplasts of long day (LD) grown plants two weeks after flowering. Comparison of the leaf senescence processes in transgenic Arabidopsis and wild type plants revealed that overexpression of PPF1 delayed leaf senescence, while the depression of its Arabidopsts homologue (ALB3) with PPF1 antisense mRNA accelerated leaf senescence obviously. Ultrastructural analysis of transgenic Arabidopsis plants showed that when PPF1 was overexpressed in Arabidopsis, the chloroplasts were bigger and had much more grana and stroma thylakoid membranes than those of wild type plants. On the contrary, when PPF1 was expressed in antisense orientation to reduce the level of PPF1 homologue in Arabidopsis, the transgenic plants had smaller chloroplasts With less grana. and poorly developed thylakoid membrane systems. These results suggested that the developmental status of chloroplasts was positively correlated with the level of PPF1 or its Arabidopsts homologue, ALB3. Our results suggested that PPF1 gene might regulate plant development by controlling chloroplast development. 展开更多
关键词 ppf1 IMMUNOLOCALIZATION chloroplast development SENESCENCE
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PPF1 May Suppress Plant Senescence via Activating TFL1 in Transgenic Arabidopsis Plants 被引量:4
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作者 Da-Yong Wang 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2008年第4期475-483,共9页
Senescence, a sequence of biochemical and physiological events, constitutes the final stage of development in higher plants and is modulated by a variety of environmental factors and intsmal factors. PPF1 possesses an... Senescence, a sequence of biochemical and physiological events, constitutes the final stage of development in higher plants and is modulated by a variety of environmental factors and intsmal factors. PPF1 possesses an important biological function in plant development by controlling the Ca^2+ storage capacity within chloroplasts. Here we show that the expression of PPF1 might play a pivotal role in negatively regulating plant senescence as revealed by the regulation of overaxpression and suppression of PPF1 on plant development. Moreover, TFL1, a key regulator in the floral repression pathway, was screened out as one of the downstream targets for PPF1 in the senescence-signaling pathway. Investigation of the senescence-ralatsd phenotypes in PPFI(-) till-1 and PPFI(+) till-1 double mutants confirmed and further highlighted the relation of PPF1 with TFL1 in transgenic plants. The activation of TFL1 expression by PPF1 defines an important pathway possibly essential for the negative regulation of plant senescence in transgenic Arabidopsis. 展开更多
关键词 Arabidopsis thaliana plant senescence ppf1 TFL1 target.
原文传递
差异筛选与基因克隆
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作者 朱玉贤 《科学中国人》 2003年第7期44-45,共2页
1995年,科学家首次发表研究报告,证实受发育过程特异性诱导表达的启动子指导细菌异戊烯转移酶基因,导致转基因植物发育后期细胞分裂素含量显著提高,从而延缓植物叶片的衰老过程.1999年,又有人发表论文证实用上述启动子指导同源域转录调... 1995年,科学家首次发表研究报告,证实受发育过程特异性诱导表达的启动子指导细菌异戊烯转移酶基因,导致转基因植物发育后期细胞分裂素含量显著提高,从而延缓植物叶片的衰老过程.1999年,又有人发表论文证实用上述启动子指导同源域转录调控因子基因Knotted1表达,也能明显延缓烟草叶片的衰老.与此同时,有学者撰文称在番茄中过量表达拟南芥己糖酸化酶基因,导致转基因植物衰老进程加快.此后,不少作者相续报道了不同基因或不同成份对植物生长发育的调控作用. 展开更多
关键词 基因克隆 转基因植物 cDNA差示分析法 ppf1基因 细菌异戊烯转移酶基因 细胞分裂素 差异筛选 G2豌豆 生长发育
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植物衰老的研究进展及其在分子育种中的应用 被引量:19
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作者 李晴 朱玉贤 《分子植物育种》 CAS CSCD 2003年第3期289-296,共8页
植物衰老是植物生命科学研究领域的核心问题之一。无论是在器官水平上还是在个体水平上 ,衰老都是一个高度有序的被调控的过程。近年来 ,已发现大批衰老相关基因以及突变体 ,初步阐明了叶片衰老的分子机制。而在个体水平 ,G2豌豆以其在... 植物衰老是植物生命科学研究领域的核心问题之一。无论是在器官水平上还是在个体水平上 ,衰老都是一个高度有序的被调控的过程。近年来 ,已发现大批衰老相关基因以及突变体 ,初步阐明了叶片衰老的分子机制。而在个体水平 ,G2豌豆以其在短日条件下无限生长的独特发育模式 ,提供了很好的实验材料。PPF1(Pisumsativumpost floralgene1)是首次在短日条件下G2豌豆中分离出来的与衰老相关的基因 ,过表达PPF1基因可以显著延迟转基因拟南芥的开花时间。最新的研究表明 ,它可能编码一个定位于叶绿体膜上的钙离子泵 ,通过调节细胞质中钙离子浓度来影响植物的生长发育。PPF1还可能通过调控LFY (LEAFY)等一系列开花途径调节基因的表达水平来影响植株的整体衰老进程。关于植物衰老的研究 ,不仅具有理论上的重大意义 ,并且在分子育种中具有潜在的价值。 展开更多
关键词 植物 叶片衰老 分子育种 应用 突变体 PPFl基因
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