猪附红细胞体的体外连续培养

临床疑似猪附红细胞体病猪红细胞,经Giemsa染色镜检及PCR扩增,证实感染猪附红细胞体(M.suis)。PCR扩增片段(781 bp)与M.suis已知序列(AJ504999)同源性达99.4%。经预试验对红细胞接种量、血清添加量、pH等条件优化后,选用添加新生牛血清、酵母浸出液、葡萄糖等成分的PPLO肉汤,将染虫红细胞接种到细胞培养板上,置于37℃、含5%CO2的培养箱培养,定期更换培养液,约72 h后红细胞溶血变为带虫血影(Ghost)。除首次接种外不添加任何红细胞,连续培养达280 d以上,染虫率维持近100%。对培养的带虫血影进行了光镜及扫描电镜观察、PCR鉴定、感染阴性红细胞试验、抗生素敏感性试验,证实与接种物为同一病原,并保持有感染阴性红细胞的能力。

兔附红细胞体的体外培养

为探讨无细胞条件下体外连续培养兔附红细胞体的方法,将感染附红细胞体的兔红细胞接种到多种培养基内培养,不添加阴性红细胞,每次传代更换半量培养基,结果发现经配方筛选的霉形体培养基培养兔附红细胞体效果最佳,兔附红细胞体存活可达300d,并保持感染兔阴性红细胞的能力。兔附红细胞体可以在经配方筛选的霉形体培养基中长期存活并缓慢增殖。

犬附红细胞体的体外连续培养

犬血样经Giemsa染色镜检及PCR检测，证实感染附红细胞体。选择添加新生牛血清（BS）、酵母浸出液、葡萄糖等成份的PPLO肉汤（PPLO—S—BS）为培养液，将染虫红细胞稀释后接种到细胞培养板，置37℃、5％CO2的培养箱中培养。24～72h后红细胞溶血变为带虫血影（ghost）；在PPLO-S-BS中虫体生长较好，并能连续培养180d；除首次接种外不添加任何红细胞。对PPLO-S-BS中培养的带虫血影进行了光镜及扫描电镜观察、PCR鉴定、感染阴性红细胞试验、抗生素敏感性试验，结果表明其特征与接种物相同。