大肠杆菌ppsA和tktA基因的串联表达

ppsA和tktA是芳香族氨基酸生物合成中心途径的两个关键酶基因 ,在大肠杆菌中 ,ppsA基因编码磷酸烯醇式丙酮酸合成酶A(PpsA) ,该酶催化丙酮酸合成磷酸烯醇式丙酮酸 ;tktA基因编码转酮酶A ,该酶在磷酸戊糖途径中生成 4 磷酸赤藓糖起主要作用。采用PCR方法从大肠杆菌K 12株中扩增到ppsA和tktA ,并实现了两基因的高效表达 ,其中ppsA活性提高了 10 .8倍 ,tktA活性提高了 3.9倍 ,当这两个基因串联在一个质粒上导入大肠杆菌进行表达时 ,PpsA的活性变化较大 (2 .1～ 9.1倍 ) ,TktA的活性相对稳定 (3.9～ 4 .5倍 ) ,且这两个基因单独表达和串联表达都能使芳香族氨基酸生物合成共同途径中关键中间产物DAHP的产量提高 ,且串联表达比单独表达较高。

大肠杆菌ppsA基因的克隆表达

The pps A gene encoding PpsA was obtained by polymerase chain reaction(PCR) and expressed in E.coli BL21 strain.SDS PAGE demonstrated that the band at 87 kD was more intensive than the same bands of the constract.The specific activity of PpsA in crude extracts was increased 3.9 fold.

策略性库存路线的PPSA算法

总结了Larson 的SIRSA(Strategic Inventory and Routing Saving Algorithm)启发式解法,针对其补充周期短的缺陷,提出了以库存补充周期和补充阶段为变量的PPSA(Period andPhase Saving Algorithm)启发式解法。计算结果表明,当车辆每作业一次能补充的客户数较多,且客户间最大的可能补充时间间隔差别较大时,PPSA算法对车辆的需求明显少于SIRSA算法。

大肠杆菌ppsA,pckA基因的克隆与串联表达

磷酸烯醇丙酮酸合成酶 (PpsA)和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶 (PckA)是糖代谢中心途径中生成磷酸烯醇丙酮酸 (PEP)的 2个关键酶 ,在大肠杆菌中分别由 ppsA和 pckA基因编码 .首先用PCR方法从大肠杆菌K12菌株基因组DNA扩增得到了 ppsA和 pckA基因 ,并将ppsA ,pckA以单独或串联的方式克隆到大肠杆菌表达质粒pλPR上 .构建成的质粒pλPR ppsA ,pλPR pckA和 pλPR ppsA pckA导入E .coliP2 392菌株中表达 .结果表明 ,ppsA ,pckA基因的单独表达使宿主细胞的PpsA和PckA酶活力分别提高到 5 .2和 2 .5倍 ;串联表达使宿主细胞PpsA和PckA酶活力分别提高到 3.1和 2 .3倍 ,还使得以PEP为底物合成的 3 脱氧 α 阿拉伯庚酮糖 7 磷酸(DAHP)产量提高到 2 .1倍 .

反吹过程对等比例变压吸附法分离富集低浓度含氧煤层气的影响

在Coward爆炸三角形的基础上分析研究了低浓度煤层气（甲烷浓度低于30％）吸附富集过程的安全性，提出了一种安全分离富集低浓度煤层气的方法——等比例变压吸附（PPSA）法，并且通过实验研究了用PPSA法时增加反吹过程对低浓度煤层气吸附富集效果和安全性的影响。结果表明：循环步骤中设置反吹过程有利于降低排放气中甲烷和氧气的体积分数。反吹时间越长，排放气中甲烷和氧气体积分数越低，但会使解吸气即产品气中甲烷浓度降低。为了确保低浓度煤层气吸附富集过程的安全性，可以适当地对吸附塔进行反吹，降低排放气中氧气浓度，使之处于安全范围内。但是反吹时间不宜过长，以免使解吸气中甲烷浓度降低过多，使产品气品质不满足后续设备的使用要求。

等比例变压吸附法富集低浓度煤层气的安全性分析

在Coward爆炸三角形的基础上分析研究了低浓度煤层气(CH4浓度低于30%)吸附富集过程的安全性。研究结果表明,如果采用常规的变压吸附方法,使用单一吸附剂富集低浓度煤层气,在吸附过程中CH4浓度会进入爆炸极限,存在安全隐患。基于安全性和可行性分析,提出了一种安全的分离富集低浓度煤层气方法——等比例变压吸附法,采用活性炭和碳分子筛作为混合吸附剂,通过调节混合吸附剂中AC/CMS质量比,使低浓度煤层气中甲烷和氧气能按比例同时被吸附,确保整个吸附富集过程中吸附器内、排放气以及解吸气中的甲烷和氧气浓度都处于安全范围内,实现低浓度煤层气的安全有效吸附富集。