PRAME基因在急性白血病中的表达及临床意义分析

本研究检测黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)基因在不同类型急性白血病(acute leukemia,AL)中的表达及其与病情发展的相互关系。用建立的检测PRAME基因的SYBR Green I荧光实时定量逆转录聚合酶链反应(RQ-RT-PCR)方法,对55例急性白血病患者(急性髓系白血病43例、急性淋巴细胞性白血病9例、其它类型的白血病3例)的骨髓样本进行PRAME基因表达情况的检测。同时选择7例非恶性血液疾病患者的骨髓样本和8例正常人外周血样本作为阴性对照,并用白血病细胞系K562作为阳性对照。结果表明:35例急性白血病患者中检测出不同水平的PRAME基因表达,在其余20例急性白血病患者及15例对照样本中均未检测出PRAME基因,总阳性率64%,两组之间具有非常显著的差异(p<0.005)。在35例PRAME基因阳性表达的患者中,AML28例,阳性检出率为65%,其中以M3、M4和M2亚型的阳性检出率较高,分别为90%、70%、67%;ALL5例,阳性检出率为56%。在31例融合基因阳性患者中,PRAME基因阳性患者为23例,而在24例融合基因阴性患者中,PRAME基因阳性患者达到12例。比较各种临床因素与PRAME表达水平的相关性未发现明显相关。短期观察5例PRAME基因阳性表达的患者显示出经化疗达到完全缓解(CR)后,患者PRAME基因表达均转阴,下降水平为63-23921/106×GAPDH拷贝。长期观察1例M3患者显示化疗后PRAME基因水平逐渐下降并转阴,患者至今仍处于CR状态。结论:PRAME基因在65%的急性白血病中呈阳性表达,其中以M3、M4和M2亚型最常见,在正常个体和非恶性血液病患者中不表达。不同白血病个体之间PRAME基因表达水平不同,随病情缓解其表达水平降低或转阴。PRAME基因可以成为微小残留病(MRD)检测的一种分子标志。

慢性髓系白血病中prame基因转录本的定量研究

本研究旨在分析慢性髓系白血病(CML)患者中黑色素瘤优先表达抗原(prame)的基因转录本表达状况及其临床意义。用实时定量PCR(RQ-PCR)方法对30例CML患者和15例缺铁性贫血(IDA)患者骨髓单个核细胞中prame基因转录本水平进行检测。结果表明:15例缺铁性贫血患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中prame转录本水平为0%-1.46%(中位0.19%),30例CML患者中BMMNC中prame基因转录本水平为0%-772.25%(中位8.28%),二组之间具有显著性差异(p<0.001)。CML患者中prame基因转录本含量与bcr-abl融合基因转录本水平显著相关(r=0.708,p<0.001);6例CML加速期(AP)和急变期(BC)患者中prame基因转录本水平明显高于24例慢性期(CP)患者(p=0.007)。动态检测2例CML患者在不同病程中prame基因转录本水平变化显示,AP及BC时prame基因转录本水平增高,经治疗后恢复至CP时prame基因转录本水平降低,与bcr-abl转录本变化趋势一致。结论:CML患者中prame基因转录本表达水平增高,且与病情发展相关,可用于病情监测。

慢性髓细胞白血病患者PRAME基因启动子甲基化改变

目的:慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者中黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)基因启动子区域的甲基化改变其及其临床相关性。方法:应用实时定量甲基化特异性PCR(real-time quantitative methylation-specific PCR,RQ-MSP)技术对55例CML患者及20例对照组骨髓单个核细胞标本的PRAME基因启动子甲基化状态进行检测。结果:28/55例(51%)CML患者出现PRAME启动子低甲基化改变,而20例对照未显示低甲基化,两组差异有显著统计学意义(P<0.001)。PRAME低甲基化与患者血液学相关参数及染色体分组均无相关性。PRAME启动子低甲基化频率随疾病进展而降低,在慢性期、加速期及急变期中分别为48%(22/46)、33%(1/3)及17%(1/6)。结论:PRAME基因低甲基化可能是参与CML发生的早期分子事件之一。

EvaGreen染料法实时定量PCR检测急性髓系白血病PRAME基因转录本

目的：采用实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）法检测急性髓系白血病（AML）中黑色素瘤优先表达抗原（PRAME）基因转录本,初步评价其在AML中的临床意义。方法：设计PRAME基因引物,建立扩增PRAME基因转录本的EvaGreen染料法RQ-PCR法,对PRAME转录本克隆质粒进行扩增,评价其特异性、重复性和灵敏性。并对10例AML患者的骨髓单个核细胞标本进行初步检测。结果：所建立的EvaGreen RQ-PCR法具有良好的特异性,最低可检测到10个拷贝/μl的阳性模板,但其重复性差,而10^8～10^2拷贝/μl阳模的重复性良好。10例初诊AML患者PRAME转录本绝对含量为4.91×10^2～8.07×10^5拷贝/50ng（中位7.26×10^3拷贝/50ng）,ABL标化后的相对含量为4.42%～13 170.01%（中位67.98%）。而对照组8例缺铁性贫血患者中PRAME转录本相对含量为0.00%～0.01%（中位0）。1例AML患者诱导缓解后PRAME转录本下降,复发时又明显升高。结论：EvaGreen染料法RQ-PCR检测PRAME转录本方法敏感可靠,可用于AML患者临床监测。

急性髓系白血病PRAME基因转录本的定量研究

目的探讨黑色素瘤优先表达抗原（preferentially expressed antigen of melanoma，PRAME）基因转录本在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）患者中的表达和临床意义。方法建立荧光染料EvaGreen实时定量聚合酶链反应（real—time quantitative PCR，RQ～PCR）对56例初诊AMI，患者和20例对照的骨髓单个核细胞标本中PRAME转录本进行检测，分析其临床相关性。结果PRAME转录本含量在对照组和AMI，患者中分别为0～1．46％（中位0．18％）和0～21618．09％（中位9．79％）（P〈0．01）；FAB亚型中M1、M2、M3和M4患者中PRAME转录本含量较对照组明显增高，而M5患者与对照组差异无统计学意义。PRAME转录本含量与染色体预后分组显著负相关（r=-0．438，P=0．001），低危组患者中PRAME转录本含量显著高于中危组和高危组患者。AML—M2患者中t（8；21）易位阳性者PRAME转录本含量（135．06％～21618．09％，中位2201．88％）明显高于无t（8；21）易位者（0．14％～1696．30％，中位17．97％）（P=0．002）。对1例AML患者不同阶段的标本检测发现诱导缓解后PRAME转录本明显下降，复发时又明显升高。结论PRAME转录本在AML患者中高表达，是患者预后良好的一个标记，可用于AML患者的随访监测。

PRAME mRNA在初诊急性髓系白血病患者中的表达及微量残留病监测中的应用

目的了解黑色素瘤优先表达的抗原（PRAME）mRNA在初诊急性髓系白血病（AML）患者中的表达，评估其在微量残留病（MRD）监测中的作用。方法采用基于TaqMan探针的实时定量RT—PCR技术检测142例初诊AML患者（其中72例不具有特异融合基因）骨髓单个核细胞PRAME mRNA水平，动态观察3例持续缓解及6例血液学复发患者（2例不具有特异融合基因）治疗前后共60份骨髓标本PRAME mRNA水平，以22份异基因骨髓移植供者的骨髓标本作为健康对照。随访的7例AML1-ETO（＋）M2患者同时检测AML1-ETOmRNA水平。以ab1作为内参基因。结果健康对照骨髓标本均表达PRAME mRNA，表达水平最高为0．28％。全部初诊AML患者骨髓中位PRAME mRNA水平为3．97％（0．00％～714．97％）。无特异融合基因的AML患者骨髓中位PRAME mRNA水平为0．60％（0．00％～408．72％）。PRAME mRNA水平在AML各亚型之间差异有统计学意义（P〈0．01），AML1-ETO（＋）M，患者PRAME mRNA水平高于其他亚型（P值均〈0．01），S型PML—RARer（＋）急性早幼粒细胞白血病患者次之。随访的AML1-ETO（＋）M，患者PRAME mRNA与AML1-ETO mRNA呈现同样的变化趋势，二者呈明显正相关（r=0．88，P〈0．01）。血液学复发患者中3例复发前PRAME mRNA水平逐步升高，分别在复发前1～4个月超过正常上限，另3例患者在血液学缓解状态时PRAME mRNA水平始终未降至正常。结论PRAME mRNA可以用于监测AML患者MRD，其水平持续升高或始终异常预示血液学复发。

肢端黑素瘤合并骨髓增生异常综合征1例

患者男,67岁,发现右足底黑斑和肿物2个月,迅速增大10 d。患者1年前确诊骨髓增生异常综合征-EB1型。皮肤科情况:右足底单发肿物,表面颜色不均,伴糜烂,周围形状不规则的浅褐色至深褐色斑片。组织病理提示:黑素细胞瘤,梭形细胞型。免疫组织化学显示:S-100(+),SOX-10(+)。建议行右足底皮肤恶性肿瘤扩大切除术,患者拒绝。3个月后患者死亡,死因不详。

急性白血病患者黑色素瘤特异性抗原基因的表达及其与FLT3基因比较的临床意义

目的 探讨黑色素瘤优先表达抗原（PRAME）基因在急性白血病（AL）患者中的表达及其临床意义.方法 应用基于TaqMan探针的RT-PCR技术榆测119例AL患者骨髓中PRAME mRNA的表达,包括急性髓细胞性白血病（AML）97例,急性淋巴细胞性白血病（ALL）22例,并与FLT3 mRNA的表达相比较.结果 AML患者PRAME阳性表达为50例（51.5%）,ALL患者PRAME阳性表达为8例（36.4%）.11例健康对照及17例非血液病患者骨髓细胞中有5例PRAME mRNA呈微量表达.AL患者中AML 33例和ALL 5例患者PRAME和FLT3均阳性,AML 17例和ALL 3例患者PRAME阳性而FLT3阴性.短期观察,9例PRAME、FLT3均阳性的患者经化疗达完全缓解后,PRAME表达均有不同程度地下降.结论 PRAME基因在AL中阳性表达,其有望成为AL微小残留监测的标志性基因.