酵母表达质粒pGBKT7-hPROKR2-Ct的构建及hPROKR2C端蛋白的自激活鉴定

目的:检测Y2HGold酵母株中表达的h PROKR2 C端蛋白是否有毒性及自激活,为后期利用酵母双杂交技术研究h PROKR2 C端相互作用蛋白奠定基础。方法:构建酵母双杂交载体p GBKT7-h PROKR2-Ct质粒,将其转入酵母感受态中验证其是否表达并计算转化率;通过观察SD/-Trp平板上酵母菌落生长状态进行h PROKR2 C端蛋白的毒性检测;通过观察SD/-Trp、SDO/-Trp/X、SDO/-Trp/X/Aba平板上酵母菌落生长状态进行h PROKR2 C端蛋白自活性检测。结果:构建了酵母双杂交载体p GBKT7-h PROKR2-Ct,将其转入酵母感受态中,转化率为8.5×104cfu/μg;毒性及自活性检测均显示h PROKR2 C端蛋白对酵母菌株无毒性、不具有自活性。结论:可以利用酵母双杂交系统研究hPROKR2 C端相互作用蛋白。

PROKR2基因突变致卡尔曼综合征1例及文献回顾

卡尔曼综合征(KS)是以特发性低促性腺激素性性腺功能减退症(IHH)和嗅觉减退为特征的内分泌疾病。患者性腺发育不全和嗅觉功能障碍的严重程度因致病基因的不同而有所差异。PROKR2基因是KS经典的致病基因,本文报告1例由PROKR2单基因突变导致的KS,并回顾总结文献中该类患者的病例特点。

多浪羊PROKR 2基因克隆、生物信息学及组织差异表达分析

【目的】克隆多浪羊促动力素受体2(prokineticin receptor 2,PROKR2)基因,并检测初情期启动过程中PROKR 2基因在多浪羊不同组织中的表达水平,为探究PROKR 2基因在绵羊初情期启动过程中的作用提供依据。【方法】以初情期后多浪羊下丘脑cDNA为模板,PCR扩增PROKR 2基因并克隆测序。利用DNAMAN软件对测序结果进行拼接,采用MegAlign软件进行物种间相似性比对并构建系统进化树,并利用生物信息学软件预测多浪羊PROKR2蛋白理化性质和结构功能。使用实时荧光定量PCR技术检测PROKR 2基因在多浪羊下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫中初情期前、初情期及初情期后的表达水平。【结果】克隆获得PROKR 2基因序列大小为2641 bp,包括5′-UTR 143 bp、3′-UTR 1343 bp和CDS区1155 bp,编码384个氨基酸,与GenBank中绵羊预测mRNA序列(登录号:XM_004014342.5)相似性为99.83%。系统进化树表明,多浪羊PROKR 2基因的遗传距离与山羊最近,与鸡最远。生物信息学分析表明,PROKR2蛋白为疏水稳定碱性蛋白,有7个跨膜结构,属于跨膜蛋白,存在31个磷酸化位点,主要在质膜上发挥作用。多浪羊PROKR2蛋白与GnRH1、PROK1、ANOS1等蛋白存在相互作用关系。实时荧光定量PCR结果显示,在多浪羊下丘脑各时期中PROKR 2基因表达量均显著高于其他组织(P<0.05),且在初情期后的表达量最高;垂体中PROKR 2基因表达量无显著变化(P>0.05);子宫中PROKR 2基因在初情期前的表达量显著高于初情期和初情期后(P<0.05);卵巢和输卵管中PROKR 2基因在初情期的表达量显著高于初情期前和初情期后(P<0.05)。【结论】试验成功克隆了多浪羊PROKR 2基因CDS区序列,PROKR2蛋白属于疏水稳定碱性蛋白,含有7个跨膜结构,主要在下丘脑中表达,且在卵巢和输卵管中的总趋势为先升后降。研究结果可为进一步探究PROKR 2基因在绵羊初情期启动过程中的调控作用提供参考。

低促性腺激素性性腺功能减退症患者PROKR2基因突变分析

为探讨特发性低促性腺激素性性腺功能减退症(IHH)患者的临床及遗传学特征, 回顾性分析23例IHH患者的临床资料, 应用全外显子测序(WES)结合Sanger方法进行基因分析, SIFT和Polyphen 2种生物信息学平台对突变位点进行功能预测。结果显示, 在23例IHH患者中, 9例患者存在前激动素2(PROKR2)基因突变, 其中4种错义突变(p.W178S、p.Y113H、p.A103V、p.R164Q), 1种移码突变(p.D42delinsDED), 功能预测显示以上突变可能是该病的致病基因, 余14例阴性。IHH患者无论PROKR2基因突变有无, 其卵泡刺激素、黄体生成素、睾酮、雌二醇水平差异均无统计学意义。PROKR2基因突变与IHH疾病可能相关, 其突变丰富基因致病谱。

Kallmann综合征新进展

Kallmann综合征(Kallmann syndrome,KS)是一种少见的遗传疾病,其临床表现以性腺功能减退为主要特征,同时伴有嗅觉丧失或减退。目前已发现3种遗传方式和5个致病相关基因。文中就Kallmann综合征的诊治和遗传学研究进展作一综述。

一例Kallmann综合征患者双基因突变分析

目的分析Kallmann综合征(Kallmann syndrome,KS)患者KS1(Kallmann syndrome 1,KAL1),前动力蛋白2(prokineticin 2,PROK2)和前动力蛋白受体2(prokineticin receptor 2,PROKR2)3个基因的突变情况。方法 1采用放射免疫分析法检测激素水平,超声扫描评估腹部结构,脑部磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)检测嗅球、脑沟和内耳的结构。2运用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),结合PCR产物直接测序技术分析KAL1、PROK2和PROKR2 3个基因外显子突变。3分别利用SIFT、Polyphen和Mutation Taster 3种生物信息学平台进行了错义位点和多态性位点的功能分析。结果1患者青春期发育不良,嗅觉减退,其父母无症状。2在患者基因组中找到2个KAL1杂合突变位点(Ile 565 Thr和Ser 570Thr),5个KAL1基因单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphism,SNP):Val 534 Ile、Val 560 Phe、Gly 567 Ser、Lys 666 Met和Agr 668 His,以及一个PROKR2纯合突变位点(Tyr 113 His)。同时也在患者父母基因组中检测到PROKR2杂合突变位点(Y113H)。3生物信息学分析结果显示I565T、S570T和Y113H(PROKR2)3个位点可能是该患者的致病基因位点。结论这2个新的突变位点还未在中国人群中报道过,这也是国内报道的第1例同时带有2个KAL1突变和一个PROKR2突变的KS患者,表明该患者可能是一个双基因遗传的KS患者。

电针治疗慢性萎缩性胃炎的研究进展

慢性萎缩性胃炎作为一种癌前病变,对其进行及时有效的治疗十分重要。随着发病率的逐年攀升及西医治疗的非特异性,中医尤其是针灸治疗慢性萎缩性胃炎越来越被患者接受。本研究从慢性萎缩性胃炎的流行病学、西医研究进展(西医病因病机、西医治疗)、中医研究进展(中医病因病机、辨证分型、中医治疗)、电针治疗慢性萎缩性胃炎的理论依据与优势等角度,较为全面地对近年来本病的研究状况进行综述,包括最新研究对电针治疗慢性萎缩性胃炎的理论支持:表达Prokr2蛋白的神经元在介导电针抗炎中具有特异性作用。

Kallmann综合征分子遗传学研究进展

Kallmann综合征（KS）是一种临床和遗传异质性疾病，呈家族性或散发性发病。Ks是由胚胎时期嗅球、嗅束的异常发育致使GnRH-1神经细胞不能完成从鼻基板迁移至下丘脑这一过程所引起。GnRH分泌不足导致低促性腺激素性腺功能减退，嗅球、嗅束的异常发育或缺如引起嗅觉丧失。除上述典型症状外，KS患者还可以表现出一些非生殖和非嗅觉表型。KS分子遗传学机制十分复杂，目前只有6个KS致病基因被鉴定。KAL1基因与KS的X连锁隐性遗传模式相关。成纤维细胞生长因子受体1基因（FGFR1／KAL2）和成纤维细胞生长因子8基因（FGFS／KAL6）与常染色体显性遗传模式有关。但是这6个基因的突变只能解释25％～30％的KS病例，提示还有其他KS致病基因有待发现。本文就KS致病基因的研究进展、临床诊断和治疗作一综述。

《自然》发表的“电针驱动迷走-肾上腺轴的神经解剖学机制”一文对针灸研究的意义

《自然》杂志于2021年10月刊登"电针驱动迷走-肾上腺轴的神经解剖学机制"一文,引起了针灸学术界的广泛关注和讨论。在前期工作的基础上,该研究证实PROKR2-Cre神经纤维在躯体不同部位和层次的差异性分布是电针低强度刺激"足三里"或"手三里"穴,通过"迷走-肾上腺轴"产生抗炎效应的关键。该研究成果是针灸基础科研领域的里程碑事件,是针灸学科与神经-免疫学科交叉相互碰撞融合的代表作,揭示了针刺起效的部分因素构成和穴位结构相对特异性的神经解剖学基础,对未来针灸科研模式的变革和针灸科研成果的转化具有一定指导意义,其研究思路、方法和结论值得针灸科研工作者学习和借鉴。

双基因突变导致的卡尔曼综合征一例病例报道及文献回顾

卡尔曼综合征(Kallmann syndrome,KS)是特发性低促性腺性性腺功能减退症(idiopathic hypogonadotropic hypogonadism,IHH)的一种亚型,表现为青春期发育延迟,第二性征不发育,伴随嗅觉减退或消失。目前已发现超过40个基因与IHH的发病有关,而且还不断有新的基因位点被发现,同时,双基因突变或寡基因突变被认为是IHH的重要致病机制。不同基因突变导致的KS/IHH的临床表型复杂多样,对治疗的反应也各异。本文报道1例由WDR11和PROKR2基因的复合双基因杂合突变导致的KS的临床资料和治疗经过,其中PROKR2基因是经典的KS致病基因,而WDR11基因是KS致病基因中较新的类型,本文回顾总结了文献中携带WDR11基因突变的病例特点。