miRNA-29a-3p通过靶向PROM1在喉癌细胞增殖中的作用研究

目的探讨miRNA-29a-3p在喉癌细胞增殖中的作用和分子机制.方法选择4种人喉癌细胞系(TU212、M4E、M2E、HEP-2)以及正常鼻咽上皮细胞系NP69,将转染mimic-NC质粒和miRNA-29a-3p mimic质粒的细胞分别设为mimic-NC组和miRNA-29a-3p mimic组,并根据是否转染mimic-NC质粒、oe-NC质粒、miRNA-29a-3p mimic质粒、oe-prominin 1(PROM1)质粒分别设立mimic-NC+oe-NC组、miRNA-29a-3p mimic+oe-NC组、miRNA-29a-3p mimic+oe-PROM1组.使用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测各细胞系中miRNA-29a-3p表达,利用荧光素酶报告实验验证miRNA-29a-3p与PROM1的靶向关系,采用克隆形成实验及噻唑蓝(MTT)实验检测喉癌细胞的增殖能力,利用Western blot法检测喉癌细胞中PROM1的表达情况.结果 TU212细胞、M4E细胞、M2E细胞和HEP-2细胞的miRNA-29a-3p相对表达量均明显低于正常NP69细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.01).选择相对表达量最低的TU212细胞作为受试细胞进行后续实验.miRNA-29a-3p mimic组TU212细胞PROM1蛋白相对表达量明显低于mimic-NC组,差异有统计学意义(P﹤0.01).转染miRNA-29a-3p后,野生型PROM1的荧光素酶活性明显低于mimic-NC组,差异有统计学意义(P﹤0.01);而转染miRNA-29a-3p后,突变型PROM1的荧光素酶活性与mimic-NC组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05).miRNA-29a-3p mimic+oe-NC组细胞克隆形成率及各时间点吸光度(OD)值均低于mimic-NC+oe-NC组和miRNA-29a-3p mimic+oe-PROM1组,差异均有统计学意义(P﹤0.05);mimic-NC+oe-NC组与miRNA-29a-3p mimic+oe-PROM1组细胞克隆形成率及各时间点OD值比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05).结论 miRNA-29a-3p可明显抑制喉癌细胞的增殖,其可能的机制是通过靶向调控PROM1发挥作用.

miR-200b通过靶向PROM1抑制胶质瘤细胞侵袭

目的探讨miR-200b靶向调控PROM1的表达对胶质瘤细胞侵袭能力的影响以及miR-200b抑瘤的分子机制。方法构建PROM13’端非翻译区（3’UTR）荧光素酶报告载体，荧光素酶报告检测miR-200b对PROMI3’UTR-荧光素酶活性的影响。将miR-200b模拟物转染胶质瘤U87细胞，采用实时荧光定量PCR和Westernblot检测PROMlmRNA和蛋白的表达水平。将PROM1 siRNA转染U87细胞，Transwell侵袭实验检测PROM1下调对U87细胞侵袭能力的影响。结果双荧光素酶报告检测显示，miR．200b能特异性地与PROM13’UTR结合，抑制其荧光素酶活性，其荧光素酶活性强度下降了57．0％，差异有统计学意义（P〈0．01）。过表达miR-200b的U87细胞中PROM1蛋白和mRNA表达水平均降低，转染miR-200b组和对照组中PROMImRNA的表达水平分别为0．64±0．05和0．95±0．09，差异有统计学意义（P〈0．05）。siRNA干扰PROM1表达能抑制U87细胞的生长和侵袭能力。转染PROMIsiRNA组和对照组中穿膜细胞数分别为（85±9）个和（155±16）个，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论miR．200b可通过靶向调控PROM1的表达而抑制胶质瘤细胞的侵袭力。

PROM1基因突变致常染色体显性遗传性黄斑营养不良1例

患者女,42岁。因双眼视力下降伴畏光2年,于2021年7月6日到天津医科大学眼科医院就诊。否认全身疾病史,有相关眼部遗传史(图1)。眼部检查:右眼、左眼最佳矫正视力分别为-0.25DS→0.6、+0.50DS-0.50DC×90°→0.3。右眼、左眼眼压分别为10.9、9.4 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)。双眼眼前节未见明显异常,晶状体及玻璃体透明。眼底检查:双眼黄斑对称性环形萎缩灶伴色素沉着(图2A,图2B)。光相干断层扫描(OCT)血管成像(OCTA)检查,双眼深层毛细血管层血流密度降低(图2C,图2D)。频域OCT检查,双眼外核层萎缩、外界膜和椭圆体带缺失,视网膜中心凹处不规则强反射,黄斑区局部视网膜色素上皮(RPE)强反射光带断裂,其下脉络膜毛细血管光带存在(图2E,图2F)。