PRRS导致母猪PRRSV病原检测、抗体水平及繁殖性能指标的变化

试验旨在比较猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病前后母猪血液猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)病原检测、血清抗体水平以及引种前后繁殖性能指标的变化,探讨药物和PRRSV灭活疫苗对上述指标的改善效果。结果显示,母猪发病前血液PRRSV阳性率为0,发病后分别为30%、40%、12%、10%。发病前未检出Ct值,发病后Ct值中位数分别为26.45、30.82、32.92、33.85。发病前血清PRRSV抗体阳性率为78.65%,发病后分别为97.14%、95.89%和91.43%;发病前S/P平均值为1.11,发病后分别为1.69、1.88、1.43。引种前母猪失配率为1.92%,引种后为2.50%~13.77%;引种前母猪分娩率为94.72%,引种后为84.41%~94.05%;引种前无效仔率为7.37%,引种后为5.26%~10.43%;引种前母猪死亡率为0.52%,引种后为0.38%~0.90%;引种前仔猪死亡率为3.14%,引种后为2.02%~4.68%。研究表明,母猪PRRS发病后,PRRSV核酸阳性率、抗体水平提高,Ct值中位数逐月提高,引种后失配率、无效仔率、母猪和仔猪死亡率增加,分娩率降低,上述指标持续异常的时间2~5个月。药物和PRRSV灭活疫苗对母猪和仔猪的死亡率具有一定改善效果,对PRRSV持续性感染和繁殖性能改善不明显。

河南地区PRRS的病原分离鉴定及血清学调查

对河南省猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)地方株分离鉴定结果表明,河南省分离毒株属于美洲型。自2001年6月至2003年12月,对河南省的9个主要养猪地区规模化猪场进行PRRS抗体检测,被检血清2 403份,其中阳性血清1 520份,阳性率为63.25%,阳性率较高。

一例疑似PRRSV感染的实验室诊断

江西某猪场发生疑似猪繁殖与呼吸综合征病例,为确诊该病,通过临床观察,仔猪表现出咳嗽、气喘、呼吸困难、体温高达42℃、耳尖及皮下发绀、生长发育迟缓等一系列症状;通过死亡猪剖检可见肾脏有出血点、肠系淋巴结肿大、肺弥漫性出血呈肉样变、心外膜出血、脾脏周边有梗死灶;取肺脏进行病毒RNA的提取,RT-PCR扩增、PCR产物凝胶电泳等一系列方法,获得与预期一致的特异性片段。综上可得,确诊本次病例为猪繁殖与呼吸综合征,其遗传变异和致病性有待进一步研究。

PRRS病毒核衣壳蛋白在大肠杆菌中的高效表达

用表达非融合蛋白的原核表达载体 p BV2 2 0 ,通过 PCR技术的引物设计对猪繁殖与呼吸综合征( PRRS)病毒 BJ-4株核衣壳蛋白 ( N)基因起始密码子上游进行了改造和修饰 ,成功地构建了含有 PRRS病毒 N基因的原核重组表达载体 p BV-N。 p BV-N转化大肠杆菌 DH5α,温度诱导后菌体裂解物经 SDS-PAGE分析发现 ,在约 1 5 0 0 0处出现 1条诱导前后的 p BV2 2 0载体对照和诱导前的 p BV-N中均缺少的特异性的蛋白条带 ,分子量大小与 PRRS病毒 N蛋白相符 ,并随着诱导时间的延长而变化 ,在诱导后 4 h达到高峰。薄层扫描结果显示 ,重组 N蛋白表达量最多可占菌体总蛋白的 2 7.4 %。 Western-blotting检测 ,此 1 5 0 0 0的蛋白带可为 PRRS病毒 N蛋白的单克隆抗体所识别 ,表明该重组

PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗免疫特性的研究

为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株疫苗的免疫机理和明确PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗各自的免疫特性,本实验分别采用PRRSV变异株(HuN4)活疫苗和PRRSV变异株(JXA1)灭活苗免疫PRRSV抗原和抗体阴性的健康断奶仔猪,免疫后21d用PRRSV变异株HuN4强毒攻毒,ELISA方法检测血清中PRRSV特异的抗体水平及TNF-α、IFN-α、IL-1、IL-6和CRP细胞因子水平,荧光定量RT-PCR方法检测病毒血症的发生和持续情况,并取主要器官进行病理组织学观察。结果表明:HuN4活疫苗组免疫后14d便可检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d各细胞因子水平升高,攻毒后21d病毒血症完全消失,免疫后各器官没有明显病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化轻微;JXA1株灭活苗组免疫期间没有检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d～9d各细胞因子水平升高,攻毒后病毒血症持续存在,免疫后各器官有轻微病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化比HuN4活疫苗组严重,但比对照组明显减轻。本实验表明,HuN4活疫苗能够快速有效的激发机体的体液免疫反应,在抵抗PRRSV变异株HuN4强毒攻毒时,临床症状明显优于JXA1灭活苗。

拟南芥prr5突变体对ABA的响应

以拟南芥为材料,统计PRRs(pseudo-response regulators)突变体prr5及其野生型经ABA处理后的萌发率、根长和NaCl处理后的萌发率,并采用实时定量PCR方法,对不同浓度ABA处理的拟南芥幼苗中的PRR5基因表达进行分析。结果表明:prr5突变体对ABA弱敏感,其种子萌发率比野生型显著或极显著增高,主根比野生型长,且PRR5基因表达受ABA抑制。同时,NaCl处理后,prr5的萌发率比野生型极显著增高。因此,推测prr5可能为ABA信号通路相关基因。

PRRSV抗GP5和抗M蛋白抗抗体的制备及免疫作用的研究

制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗抗体(Ab2),探讨Ab2在不同的动物体内诱导机体产生免疫作用的研究。用已纯化的抗PRRSV-GP5(GP5-Ab1)单抗和抗PRRSV-M(M-Ab1)单抗免疫哈尔滨大白兔,当免疫血清琼扩效价达1∶16时,则加强免疫1次心脏采血分离血清,分别纯化兔抗抗PRRSV-GP5 IgG(GP5-Ab2)和抗抗PRRSV-M IgG(M-Ab2)血清。用GP5-Ab2、M-Ab2以及GP5-Ab2与M-Ab2混合型3种分别免疫昆明小鼠和未免PRRS疫苗的小猪,同时设PRRS弱毒苗、灭活苗和空白组作对照。免疫后第21 d分别采集小鼠血清和猪血清,用PRRSV作抗原包被,间接ELISA检测免疫Ab2和PRRS疫苗的小鼠血清和猪血清全为阳性,空白组仍然为阴性。说明制备的Ab2在不同动物体内均能引起机体产生免疫反应,从而为猪繁殖与呼吸综合征病新型疫苗的研究提供了新的思路。

抗PRRSVGP5和M蛋白独特型抗体替代抗原诱导机体产生中和抗体的研究

制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗独特型抗体(Ab2),探讨Ab2替代抗原对机体免疫调节作用的研究。用纯化的PRRSV-GP5(GP5-Ab1)蛋白和抗PRRSV-M(M-Ab1)蛋白单抗免疫大白兔,当免疫血清琼扩效价达1:16以上,加强免疫后心脏采血分离血清,分别纯化兔抗PRRSV-GP5IgG(GP5-Ab2)和抗PRRSV-MIgG(M-Ab2)血清,分别用GP5-Ab2、M-Ab2以及GP5-Ab2与M-Ab2混合型三种分别免疫未免PRRS疫苗的小猪,同时设PRRS弱毒苗、灭活苗和空白组作对照,免疫后21d采集猪血清,间接ELISA检测免疫Ab2和PRRS疫苗的猪血清全为阳性,空白组仍然为阴性。经细胞中和试验证明免疫Ab2及PRRS疫苗的猪血清都具有中和抗体,说明Ab2在体内具有替代PRRSV的作用诱导机体产生具有中和效应的中和抗体,从而起到保护机体免受PRRSV的感染作用,为猪繁殖与呼吸综合征病新型疫苗的研究提供了新的思路。

一个猪场高致病性PRRSV的分离鉴定

本研究对一个猪场高致病性PRRSV疑似病例进行了病理剖检、PRRSV N蛋白基因RT-PCR扩增以及序列测定和分析。结果表明,N2号分离株N蛋白核苷酸序列与高致病性毒株(JXA1株、Hu N4株、SX-1株、TJM株)的一致性均为99.1%,N3/N4号与高致病性毒株的一致性均为98.9%,由此判定该猪场病猪感染毒株为高致病性PRRSV。该研究结果可为养猪生产中高致病性PRRSV感染的判断提供借鉴。

江西PRRS流行毒株ORF7基因遗传变异分析

江西某4个猪场发生以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状等为特征的传染病，怀疑为猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染所致。本研究对送检病料进行RT—PCR检测为阳性后，克隆出PRRSV ORF7基因，序列分析表明4个序列之间同源性是98．7％～100％，同源性很高；与美洲型蓝耳病标准毒株VR-2332的同源性为93．3％～94．6％，与疫苗株MLV的序列同源性在93．3％～94．6％；而与欧洲株LV的同源性只有58．1％～58．6％。结果表明这4个毒株与VR-2332和MLV株亲缘关系比较密切，属于美洲型毒株。

PRRS疫苗的安全性与猪场防疫的关系

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）又称“猪蓝耳病”，是由PRRS病毒（Porcine reproductive and respiratory syn-drome virus，PRRSV）引起的一种猪烈性传染病，具有传播速度快、传染性强、流行范围广、长期持续存在、长期免疫抑制等特点。自2006年6月全国暴发的高致病性PRRS给养猪企业造成了巨大的经济损失，PRRSV的优势流行毒株发生了变化，致病强度普遍高于大疫情出现之前，已成为影响养猪业发展的首要问题。

2019—2023年张家港市生猪FMD、CSF和HP-PRRS免疫抗体水平的监测与分析

生猪疫病是困扰健康养殖的重要因素。为了解张家港市生猪口蹄疫(FMD)、猪瘟(CSF)、高致病性蓝耳病(HP-PRRS)3种主要疫病免疫抗体水平,从2019—2023年分别采集张家港市规模化养殖场和散养户3738、3674、3085份猪血清,用于检测口蹄疫、猪瘟、高致病性蓝耳病抗体水平。检测结果显示,口蹄疫免疫抗体水平在2021年最低为77.07%,2022年最高为96.79%;猪瘟免疫抗体水平在2019年最低为82.00%,2021年最高为97.51%;高致病性蓝耳病免疫抗体水平在2021年最低为88.43%,2020年最高为96.74%。近5年口蹄疫、猪瘟、高致病性蓝耳病抗体水平总体维持在77.07%~97.51%,能够更好地保护生猪免遭重大疫病的威胁。该研究为动物疫病防控和流行病学调研提供重要的参考依据。

HP-PRRSV人工感染后猪血清病毒载量和体重增长的变化规律

为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(high pathogenic-porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV)感染猪后其血清病毒载量和体重增长的变化规律,以大白猪和通城猪的高代横交群体中72头健康仔猪为研究对象进行HP-PRRSV人工感染,观察临床症状,并在感染前和感染后第4、7、11、14、21、28、35天进行空腹采血、体重称量、血清分离以及病毒载量检测。结果显示:在感染第0~4天体重增长速度缓慢,第4~21天体重一直呈负增长、第7~11天体重减少量达最大值、第21~35天体重呈正增长;病毒载量在感染第4天达到峰值并持续到第7天,第7~35天病毒载量逐渐下降至6.62 lg copies/mL;感染第7天出现死亡,死亡个体主要集中在7~14 d,在第10天出现死亡高峰,第19天后基本稳定;依据第14天存活与否,将试验猪分为抗病和易感2个组,抗病组的病毒载量在第4、7、11天均显著低于易感组(P<0.05),该组的体重增长量在第4~7、7~11、11~14天均显著高于易感组(P<0.05)。上述结果表明,在感染过程中体重增长和病毒载量2个性状可作为预测PRRS抗病性的指示性状。

PRRS病毒感染对猪细胞因子IL-2、IL-4和IL-10mRNA转录的影响

通过构建猪细胞因子IL 2、IL 4和IL 10的缺失cDNA竞争分子,利用定量竞争PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒感染过程中细胞因子IL 2、IL 4和IL 10的mRNA进行转录水平变化的定量检测,研究PRRS病毒感染对猪细胞因子IL 2、IL 4和IL 10mRNA转录的影响。结果表明猪Th1型细胞因子IL 2的mRNA转录水平分别在PRRS病毒感染后1d、28d和56d出现3个mRNA转录高峰;而Th2型细胞因子IL 4的mRNA转录水平在病毒感染后56d内,一直处于低水平,而后才逐渐升高;IL 10的mRNA转录水平在病毒感染后6d内,一直处于低水平状态,第6d后才逐渐上升,至42d到达高峰,而后下降,恢复正常。结果显示PRRS病毒感染可导致Th2型细胞因子IL 4和IL 10基因转录的抑制。

2008-2010年中国华东地区PRRSV ORF5基因遗传变异分析

【目的】对来自2008-2010年中国华东地区7个不同省市的疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场送检的病料进行PRRSV检测,并对其ORF5基因进行测序,确定当前PRRSV在中国华东地区的分子流行病学特征,并分析PRRSV在中国的遗传演化规律。【方法】利用RT-PCR方法对采集的样品进行PRRSV检测,并对PRRSV检测呈阳性的36份病料进行ORF5基因的序列测定和分析。【结果】260份病料中共检测到118份PRRSV阳性样品,阳性率为45.4%。ORF5序列分析和系统进化树分析结果表明,本试验所获得的36株PRRSV毒株序列均属于北美型,与GenBank中高致病性PRRSV(HP-PRRSV)参考毒株的氨基酸同源性为94.6%-100%,并可分为5个亚群,亚群III与HP-PRRSV同源性最高,几乎所有的亚群中和表位(primary neutralizing epitope,PNE)都存在变异,亚群III和IV相对于其它亚群具有更多的糖基化位点。由于36个毒株是于2008-2010年间采集自安徽、江苏、上海等7省,进化树分析结果表明,病毒的分型并没有呈现明显的地域性。【结论】2008-2010年间中国华东地区普遍存在PRRSV感染,PRRSV流行株为HP-PRRSV,其遗传演化相对稳定,但也具有不同的遗传特征。来源于不同省市的PRRSV毒株的遗传关系存在交叉,虽然亚群IV和V只出现在部分省市,但PRRSV的分布没有呈现明显的地域特征。

从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究

采用猪肺巨噬细胞和Marc-145细胞培养对国内暴发流行PRRS的某地猪场进行了病毒分离,从流产胎儿分离出特征性致细胞病变因子。用PRRSV SDOW-17单克隆抗体进行间接免疫荧光染色,证明从4头流产胎儿分离出4株PRRSV(CH-la,CH-lb,CH-lc,CH-ld)。这4株毒均可在猪肺巨噬细胞和Marc-145细胞上生长,并产生特征性CPE变化。用PRRSV美国分离毒株VR-2332和NVSL抗血清分别对4株CH-1、VR-2332和NVSL毒株感染细胞进行间接免疫荧光试验,结果表明4个CH-l毒株近似于美洲型PRRSV。间接免疫荧光试验证明,4个CH-l分离株与HCV、PrV、PPV、TGEV、PEDV和HEV无交叉抗原。本文首次报道在国内暴发生殖和呼吸道综合征猪群分离到PRRS病毒。

板蓝根多糖对PRRS弱毒苗免疫猪抗体和T细胞亚群的影响

研究板蓝根多糖对PRRSV弱毒苗免疫抗体和猪外周血T细胞亚群的影响。35日龄断奶仔猪16只随机分为4组,将多糖分别以高、低两个剂量和猪PRRSV弱毒苗同时注射,于免疫后不同的时间点采血,ELISA方法检测猪PRRSV抗体水平,流式细胞术检测猪外周血中T淋巴细胞亚群的变化。弱毒苗免疫后7d,板蓝根多糖高剂量组即可检测到PRRSV阳性抗体,而其它组在免疫后14d,均可检测到PRRS阳性抗体,板蓝根多糖对PRRS弱毒苗产生抗体的影响是和剂量密切相关的,高剂量能提高抗体水平,低剂量会阻碍PRRSV抗体的产生。板蓝根多糖和PRRS弱毒苗联合使用对猪外周血CD3+和CD4+细胞数量的影响不显著,在早期可促进猪外周血CD8+细胞的增殖。合适剂量的板蓝根多糖可以作为免疫增强剂与PRRSV弱毒苗联合使用。

人PRR11启动子的结构与功能初步分析

PRR11(proline-rich protein 11,PRR11)是我们最近发现的一个新的肿瘤相关基因.初步研究表明,PRR11参与细胞增殖、细胞周期和细胞癌变等多种生物学过程.为了进一步研究PRR11基因的转录调控机制并全面解析其功能,本研究对PRR11基因的启动子进行了克隆鉴定和初步分析.首先,应用5'RACE(rapid amplification of cDNA ends,cDNA末端快速扩增)技术鉴定了PRR11基因的转录起始位点,发现了其具有多个转录起始位点.通过PCR定向克隆和DNA blunting技术,构建了6个相互重叠并覆盖PRR11基因转录起始位点附近约2.0 kb区域的PRR 11基因启动子荧光素酶报告基因重组体.启动子活性分析表明,PRR 11基因启动子主要定位于转录起始位点附近-563 bp～+341 bp的区域内.采用转录因子结合位点预测分析软件分析表明,PRR 11基因启动子缺乏典型的TATA盒,但含有典型的GC盒、CCAAT盒以及潜在的经典转录因子E2F1和MYB的结合位点,提示Sp1、NF-Y、E2F1和MYB等经典转录因子可能参与PRR 11基因的转录调控.

猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)S_A毒株的分离与鉴定

从仔猪内脏分离到一株猪繁殖呼吸综合征病毒 (PRRSV)毒株 ,该毒株能在Marc 14 5细胞上增殖致细胞病变 ,该病变能被PRRSV美洲型阳性血清所抑制 ,不被乙脑病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒阳性血清所抑制 ,经美洲型PRRSV荧光抗体染色呈阳性反应 ,电镜观察到直径 5 5nm左右的病毒粒子 ,属RNA病毒 ,接种阴性仔猪未见临床症状异常 ,但血清学阳性。命名该分离毒为PRRSV SA 毒株。

重组M蛋白-乳胶凝集试验检测PRRS病毒血清抗体的研究

利用纯化的 PRRS病毒重组 M蛋白致敏乳胶制成乳胶抗原 ,成功地建立了一种检测 PRRS病毒血清抗体的乳胶凝集试验 (L AT)诊断方法。用制备的乳胶 M抗原分别检测猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病、猪弓形体病、猪衣原体病、猪乙型脑炎阳性血清 ,结果均为阴性 ,无交叉反应 ,说明建立的 L AT方法具有良好的特异性。用建立的乳胶凝集试验方法与国外IDEXX公司 PRRS病毒抗体检测试剂盒同时对 76份猪血清样本进行检测 ,结果表明建立的 L AT方法的特异性和敏感性均为 95 % ,两种方法的总符合率为 87% ,检出率基本一致。研究结果表明 L AT方法具有操作简便、快速、敏感性高、特异性强、价格低廉且可用于现场检测等优点 ,是一种适合基层兽医单位用于