PSCA和Oct-4蛋白在眼睑基底细胞癌组织中的表达及其意义

目的 探讨PSCA和Oct-4蛋白在眼睑基底细胞癌组织中的表达及其意义.方法 收集武汉市中心医院和武汉大学人民医院病理科2002～2009年手术切除及活检的眼睑基底细胞癌（basal cell carcinoma,BCC）标本共20例,另取癌周围组织5例作对照.采用免疫组织化学方法观察各组细胞内PSCA和Oct-4蛋白的表达.利用图像分析系统测定PSCA和Oct-4蛋白在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率.结果 （1）PSCA的表达在眼睑基底细胞癌中,PSCA呈高表达,而癌周围组织中PSCA呈低表达.经q 检验,眼睑基底细胞癌组织与癌旁组织之间PSCA的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义（P〈0.05）.（2）Oct-4的表达眼睑基底细胞癌组织中Oct-4蛋白呈高表达;癌旁组织中Oct-4蛋白呈低表达.图像分析结果显示：眼睑基底细胞癌组织与癌旁组织之间Oct-4蛋白的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义（P〈0.05）.结论 在眼睑基底细胞癌组织中PSCA和Oct-4蛋白的高表达可能是＂癌干细胞＂,PSCA和Oct-4蛋白也许参与了眼睑基底细胞癌的发生和发展.

人前列腺干细胞抗原的原核表达、纯化及鉴定

目的构建包含人前列腺干细胞抗原(PSCA)的原核表达质粒,并进行诱导表达、蛋白纯化及鉴定。方法通过PCR扩增人PSCA基因片段,与过渡载体pGEM(-TEasy连接后进行测序鉴定,鉴定正确后,将PSCA基因片段酶切并插入含有谷胱甘肽s-转移本科GST标签的原核表达载体pET42a,得到重组质粒pET42a-PSCA。将pET42a-PSCA转化大肠埃希菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达GST-PSCA融合蛋白,用Glutathione-Sepharose4B柱对融合蛋白进行纯化,纯化产物进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果 PSCA基因的PCR产物大小与预期相符,测序结果与GenBank中的PSCA序列一致。pET42a-PSCA原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE及Western blotting检测显示融合蛋白诱导表达成功,分子量大小约为43kD。结论成功构建了人PSCA的原核表达质粒,能在BL21菌株中表达,且纯化后得到较高纯度的GST-PSCA融合蛋白,为后续抗前列腺癌基因疫苗研究奠定了基础。

前列腺干细胞抗原特异性分子探针的构建及其在体MR成像的实验研究

目的应用纳米金磁微粒标记抗人前列腺干细胞抗原(PSCA)单抗7F5,构建PSCA特异性MR分子探针7F5@Gold Mag,检测其与前列腺癌细胞结合的特异性,并探讨其用于前列腺癌体外及体内MR成像的可行性。方法应用非共价键耦联方法将纳米金磁微粒标记7F5,构建PSCA特异性MR分子探针7F5@Gold Mag,检测其与前列腺癌细胞结合的特异性;应用3.0T磁共振扫描仪,观察不同浓度金磁微粒MR成像情况,探讨MRI可分辨的最低浓度;培养人前列腺癌细胞PC-3和肝癌细胞SMMC-7721,将这两种细胞分别与7F5@Gold Mag、无关抗体@Gold Mag交叉配对,对各组细胞行T2 WI并分别测量其信号强度。建立PC-3和SMMC-7721荷瘤裸鼠模型,对两组荷瘤裸鼠经尾静脉注射7F5@Gold Mag和无关抗体@Gold Mag,分别在注射前、注射后6、12和24 h行MR扫描,观察其对肿瘤T2 WI信号的影响,分别测量其信号强度,探讨其用于MR体内成像的可行性,分析比较其信号强度的差异。结果成功构建PSCA特异性MR分子探针7F5@Gold Mag;流式细胞术检测其与PC-3细胞结合率为92.11%;激光共聚焦显微镜及透射电镜观察见PC-3细胞与7F5@Gold Mag有特异性结合。纳米金磁微粒稀释至1∶640,与1%琼脂糖凝胶相比,T2 WI信号强度差异有统计学意义;7F5@Gold Mag可显著特异性降低PC-3细胞T2 WI信号。PC-3荷瘤裸鼠注射7F5@Gold Mag 6、12和24 h后肿瘤组织T2 WI信号强度较平扫显著降低(F=43.675,P<0.05)。而SMMC-7721荷瘤裸鼠在平扫和注射对比剂后6、12和24 h肿瘤信号强度差异无统计学意义。结论 PSCA特异性MR分子探针7F5@Gold Mag具有良好的理化性质和免疫活性,可特异性降低PC-3细胞的T2 WI信号,对活体前列腺癌组织具有靶向性的增强效果。