PTEN siRNARNA对结肠癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨沉默PTEN基因后对结肠癌细胞增殖和侵袭影响的机理。方法 RT-PCR和Western blot法分析PTEN在4种结肠癌细胞株(HT-29、Wi Dr、Ca Co-2、Co Lo320细胞)中的表达,应用短基因干扰RNA(si RNA)技术合成PTEN si RNA并转染结肠癌细胞,Western blot法再次检测PTEN蛋白在结肠癌细胞株的表达。细胞增殖和侵袭实验分别检测PTEN基因沉默后对结肠癌细胞自身增殖和侵袭能力的影响。结果 PTEN在4种结肠癌细胞株中均有表达;4种结肠癌细胞转染PTEN si RNA后,Western blot法证实PTEN蛋白表达明显被抑制(P<0.01),结肠癌细胞的增殖和侵袭能力明显增强(P<0.01)。结论 PTEN基因的沉默能够明显增强结肠癌细胞的增殖和侵袭能力,增强PTEN基因可为临床靶向治疗结肠癌的转移提供新途径。

抑癌基因PTEN在大肠癌中的功能及机制

目的研究抑癌基因第十号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)在大肠癌中的功能及作用机制。方法收集结肠癌细胞HT-29转染各组质粒后细胞,调整各组细胞悬液浓度至5×10~4cells/ml,设立实验组和对照组共5组,即过表达空载体组(转染NC-oe)、过表达组(转染PTEN-oe)、干扰空载体组(转染NC-sh)、干扰表达组(转染PTEN-sh)、空白对照组(不作任何处理)。qPCR检测PTEN基因在结肠癌细胞系样本中的含量;MTT检测PTEN对结肠癌细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测PTEN对结肠癌细胞周期和细胞凋亡的影响;PTEN重组子种植于裸鼠腋部背侧皮下成瘤部位,成瘤后定期测量裸鼠体重及瘤体大小。结果与空载体对照组和空白对照组比较,过表达组PTEN mRNA水平显著升高,干扰表达组PENT mRNA表达水平显著降低;过表达组细胞增殖速度减慢,干扰表达组细胞增殖速度加快;过表达组细胞周期S期细胞数量减少,干扰表达组细胞周期S期细胞数量明显增多;过表达组细胞凋亡率升高,干扰表达组细胞凋亡率降低;干扰组肿瘤生长迅速,提前使裸鼠致死,过表达组肿瘤生长缓慢。结论抑癌基因PTEN能够明显抑制大肠癌细胞增殖,抑制大肠癌细胞DNA合成,促进大肠癌细胞凋亡。增强PTEN基因可为临床瘤体内注射PTEN基因药物治疗提供新途径。

沉默PTEN基因对PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的通过观察沉默PTEN基因在PC-3细胞中的表达,探讨其对细胞增殖和凋亡的影响。方法设计PTEN si RNA序列,筛选最佳转染效率,Real Time PCR及Western blot检测沉默效率,沉默PTEN基因后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 Real Time PCR和Western blot结果显示si RNA003沉默效率最高。MTT法显示,si RNA转染组比空白对照组和阴性对照组细胞增殖能力增加(P<0.05),流式细胞术实验显示,si RNA转染组比空白对照组和阴性对照组细胞凋亡降低(P<0.05)。结论 PTEN表达的沉默使PC-3细胞增殖能力上升和凋亡水平下调。

沉默P-REX2a对胃癌细胞SGC7901增殖、阿霉素敏感性的影响及其机制

目的观察沉默P-REX2a对胃癌细胞SGC7901增殖、阿霉素敏感性的影响,并探讨其机制。方法将胃癌细胞SGC7901分为正常培养组(NM组)、阴性对照组(NC组)、干扰组(siRNA组)。NM组正常培养,NC组细胞转染阴性对照序列,siRNA组转染P-REX2a siRNA,转染24 h时采用实时荧光定量PCR法检测各组P-REX2a mRNA,转染24、48、72 h时用MTT法观察各组细胞增殖情况(以OD570表示)。另取胃癌细胞SGC7901同法分组并转染48 h后加入0.3μmol/L阿霉素培养24 h,用流式细胞术测算各组细胞凋亡率,用Western blotting法检测各组Bcl-2、Bax、PTEN、Akt、p-Akt蛋白,用基于PIP3底物的定磷比色法测定PTEN磷酸酶活性。结果 siRNA组P-REX2a mRNA低于NC组、NM组(P均<0.05),转染24、48、72 h时OD570高于NC组、NM组(P均<0.05),加入阿霉素培养后细胞凋亡率高于NC组、NM组(P均<0.05),Bax蛋白表达量、PTEN磷酸酶活性高于NC组、NM组(P均<0.05),Bcl-2、p-Akt蛋白表达量低于NC组、NM组(P均<0.05)。三组PETN、Akt蛋白表达量相比P均>0.05。结论沉默P-REX2a可以抑制胃癌细胞SGC7901增殖,提高胃癌细胞SGC7901对阿霉素的敏感性。这可能是由于沉默P-REX2a可以提高PTEN磷酸酶活性、抑制PI3K/Akt通路活化、抑制Bcl-2表达。

SOX9基因沉默对膀胱癌EJ细胞株生物学特性的影响及其机制研究

目的探讨SOX9基因沉默对膀胱癌EJ细胞株增殖、凋亡及迁移的影响及其潜在的作用机制。方法采用SOX9 si RNA转染EJ细胞,抑制SOX9基因的表达,并以非特异性si RNA转染EJ细胞为对照。采用Edu细胞荧光染色法检测SOX9基因沉默对EJ细胞增殖的影响,Hoechst 33342细胞染色法检测SOX9基因沉默对EJ细胞凋亡的影响,划痕愈合实验检测SOX9基因沉默对EJ细胞迁移的影响,蛋白质免疫印迹(Western Blot)实验检测PTEN/AKT信号通路相关蛋白的表达水平。结果对照组的SOX9 m RNA表达水平为(100.0±0.5)%,明显高于SOX9沉默组的(14.2±1.3)%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。转染72 h后,对照组细胞在450 nm激发光下的OD值为(4.0±0.3),明显高于SOX9沉默组的(2.3±0.2),差异有统计学意义(P﹤0.01)。Edu细胞荧光染色结果显示,转染48 h后,对照组的细胞相对增殖率为(100.0±2.3)%,明显高于SOX9沉默组的(42.2±3.2)%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。Hoechst 33342免疫荧光染色结果表明,对照组的细胞凋亡率为(7.2±1.2)%,明显低于SOX9沉默组的(33.2±2.4)%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。划痕愈合实验表明,对照组的相对划痕愈合比例为(100.0±1.9)%,明显高于SOX9沉默组的(56.6±4.3)%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。SOX9 si RNA转染EJ细胞1 h后,采用Western Blot检测PTEN、AKT及p-AKT蛋白的表达水平。结果显示,SOX9沉默组的PTEN蛋白表达水平高于对照组,p-AKT蛋白表达水平低于对照组。结论沉默SOX9基因能够明显抑制膀胱癌EJ细胞株的增殖和迁移,并促进细胞凋亡,PTEN/AKT信号通路的激活可能与之有关。

沉默mGluR5对卵巢癌SKOV3细胞生物学特性的影响及其机制研究

目的探讨小干扰RNA(siRNA)靶向代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响及可能的机制。方法采用靶向mGluR5表达的特异siRNA转染卵巢癌SKOV3细胞(转染组),同时设置转染无义序列的阴性对照组。转染48 h,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测siRNA对mGluR5的沉默效果;采用CCK-8法、Ed U细胞荧光染色实验、Hoechst 33342细胞染色实验、划痕实验检测沉默mGluR5表达后SKOV3细胞的活性、增殖、凋亡和迁移情况;采用Western blotting检测PTEN/Akt信号通路相关蛋白的表达情况。结果 QPCR检测显示,转染组中mGluR5 mRNA的表达水平降至(18.3±2.3)%,显著低于阴性对照组(P<0.05)。CCK-8法检测显示,转染72 h阴性对照组的吸光值为4.1±0.2,高于转染组的2.4±0.3(P<0.05)。Ed U免疫荧光染色实验显示,转染48 h阴性对照组的细胞增殖率为(22.4±2.3)%,高于转染组的(9.2±1.2)%(P<0.05)。Hoechst 33342细胞染色实验显示,转染48 h阴性对照组的细胞凋亡率为(6.2±1.3)%,低于转染组的(28.2±2.2)%(P<0.05)。划痕实验显示,阴性对照组的相对划痕愈合比例为(100.0±2.1)%,显著高于转染组的(48.6±4.3)%(P<0.05)。Western blotting检测显示,转染组PTEN蛋白的表达增加,p-Akt蛋白的表达降低(P<0.05);而Akt蛋白无明显变化(P>0.05)。结论沉默mGluR5表达能显著抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,促进凋亡,降低细胞迁移能力,该过程可能与激活PTEN/Akt信号通路有关。

多效生长因子基因沉默抑制PTEN基因敲除细胞的增殖

目的:在肿瘤抑制基因PTEN缺失的小鼠胚胎成纤维细胞Pten-/-MEF241细胞中,研究多效生长因子(p le iotroph in,Ptn)对细胞增殖的影响。方法:设计并合成可编码针对小鼠Ptn基因的小干扰RNA(siRNA)寡核苷酸,构建至pS ilencerTM3.1-H1载体,将载体转染进Pten-/-MEF241细胞中,获得稳定表达细胞克隆株,通过Northern印迹检测Ptn基因表达被抑制的情况,根据细胞生长曲线检测沉默Ptn基因对Pten-/-MEF241细胞生长的影响。结果:获得的稳定克隆株中,与对照细胞相比,Ptn基因的表达在转染Ptn siRNA-B的3株细胞中均得到了有效的抑制,而在转染Ptn siRNA-C的2株细胞中抑制效果较差。生长曲线结果显示,在Pten-/-MEF241细胞中,沉默Ptn基因能够减缓Pten-/-MEF241细胞的生长速度。结论:本研究获得了可有效抑制Ptn基因的小干扰RNA,证明沉默Ptn基因可抑制PTEN基因缺失细胞的增殖,提示Ptn可作为治疗具有PTEN基因突变的肿瘤的药物靶标。