人参皂苷Rb1抗小鼠脑自然衰老及其对mTOR/p70S6K通路的影响

【目的】观察人参皂苷Rb1对小鼠脑组织自然衰老的作用,并探讨mTOR/p70S6K通路在其中的作用。【方法】27只C57/B6雌性小鼠购于中山大学实验动物中心,其中7只3月龄C57/B6雌性小鼠为青年组,20只22月龄C57/B6雌性小鼠为老年组,青年组小鼠予生理盐水(PBS)腹腔注射,老年组小鼠分别予PBS(对照)、低剂量Rb1(10 mg·kg-1·d-1)、高剂量Rb1(20 mg·kg-1·d-1)腹腔注射。6周后处死小鼠,取脑组织匀浆,检测丙二醛(MDA)含量、单胺氧化酶(MAO)活性,western blot技术检测血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、p-m TOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K蛋白表达情况。【结果】与青年小鼠比较,老年对照组小鼠脑组织中的MDA含量增多,MAO活性增加,PAI-1蛋白表达增多,m TOR蛋白、p70S6K蛋白磷酸化水平增加。与老年对照组比较,注射Rb1的两组小鼠脑组织MAO活性,m TOR蛋白、p70S6K蛋白磷酸化水平均降低;此外,高剂量Rb1组MDA含量、PAI-1蛋白的表达降低。【结论】高剂量(20 mg·kg-1·d-1)人参皂苷Rb1可以减轻小鼠脑自然衰老;人参皂苷Rb1的这一抗衰老作用可能与m TOR/p70S6K通路密切相关。

PI3K、P70S6K在胰岛素抵抗大鼠脂肪中的表达及其意义

目的测定不同饮食喂养大鼠产生胰岛素抵抗(IR)的情况,观察大鼠脂肪中PI3K、P70S6K的表达及大鼠血清中游离脂肪酸(FFA)和超敏C反应蛋白(hs-CRP)的变化。方法4周龄Wistar雄性大鼠40只,随机分为4组,分别以普通、高糖、高脂、高糖高脂饲料喂养大鼠8w后,行高胰岛素-正常血糖钳实验,对大鼠IR程度进行评估,应用酶联免疫吸附法检测大鼠血清中FFA及hs-CRP,分别用原位杂交、Western印迹方法检测大鼠脂肪中的PI3K、P70S6K。结果高脂、高糖高脂饲料组大鼠产生IR,普通、高糖饲料组未出现IR,IR组大鼠FFA及hs-CRP明显高于非IR大鼠(P<0.01),PI3K表达在IR组大鼠明显低于非IR组大鼠、P70S6K的表达在IR组大鼠明显高于非IR组大鼠(P<0.01)。结论高脂、高糖高脂饲料喂养大鼠8w可成功诱导大鼠产生IR,IR的产生可能与肥胖、高FFA及炎症反应有关,PI3K在IR组表达降低,P70S6K升高。

TGF-α/EGFR自分泌环调控卵巢癌细胞增殖转移的分子机制

背景与目的:TGF-α/EGFR自分泌环在许多恶性肿瘤中异常激活,与肿瘤发生、发展密切相关。本研究观察TGF-α诱导的卵巢腺癌细胞Caov-3生物学行为及相关信号分子的改变,探讨TGF-α/EGFR自分泌环在卵巢癌发生、发展中的作用机制。方法:采用MTT和BOYDEN小室体外侵袭实验检测Caov-3细胞增殖和侵袭能力;采用Westernblot方法检测EGFR、ERK1/2、PI3K、AKT、P70S6K蛋白表达情况。结果:TGF-α促进Caov-3细胞增殖和转移,0.5-25ng/ml浓度范围内,细胞增殖率与TGF-α浓度成剂量效应关系;TGF-α在短时间内可使Caov-3细胞EGFR表达量骤增,并伴随PI3K、AKT、P70S6K等信号传导分子表达量的上调;但ERK1/2表达量无明显变化。结论:TGF-α/EGFR自分泌环可能通过激活PI3K/AKT信号传导通路,上调P70s6k来增强卵巢癌细胞的增殖和转移能力。

p70S6K结构与功能研究进展

p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)是m TOR的主要下游作用靶物,在翻译起始、蛋白合成、细胞周期、细胞迁移等方面具有重要作用。本文综述了p70S6K的结构和功能,这对于了解p70S6K以及其调控的相关信号通路分子具有重要意义。

DZNep对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨EZH2抑制剂DZNep对裸鼠Eca109细胞移植瘤生长及mTOR/p70S6K信号通路的影响。方法:将Eca109细胞接种于15只裸鼠右侧背部皮下构建裸鼠移植瘤模型后分为3组,每组5只,其中2组分别腹腔注射5-氟尿嘧啶(5-FU)、DZNep治疗2周,另外1组腹腔注射生理盐水作为对照组。观察肿瘤生长情况,采用Western blot检测肿瘤组织中EZH2、SAHH、组蛋白甲基化相关蛋白及mTOR/p70S6K信号通路相关蛋白、Caspase-3、E-cadherin的表达情况,并通过TUNEL法检测肿瘤组织中细胞的凋亡,计算细胞凋亡率。结果:DZNep组肿瘤块质量小于对照组(P<0.05)。与对照组比较,DZNep组肿瘤组织中Caspase-3和E-cadherin表达水平增高,细胞凋亡率升高(P<0.05)。另外,与对照组相比,DZNep组H3K27me3表达降低,PTEN表达升高,mTOR和p-p70S6K表达均下降(P<0.05)。结论:DZNep可抑制食管鳞癌移植瘤增长,并诱导肿瘤细胞凋亡;其机制可能是通过对EZH2的抑制增强PTEN的表达,从而抑制mTOR/p70S6K信号通路的激活。

4EBP1和P70S6K在不同宫颈病变组织中的表达及其意义

目的:研究真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白(4EBP1)及核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(P70S6K)在不同宫颈病变组织中的表达水平及其在宫颈癌发生、发展中的作用。方法:采用免疫组化SP法及PT-PCR法检测宫颈癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)及正常宫颈组织中的4EBP1和P70S6K表达水平。结果:在正常宫颈、CIN及宫颈癌组织中,4EBP1和P70S6K蛋白及mRNA水平表达依次增高,且3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。4EBP1和P70S6K在宫颈癌中的表达水平呈正相关(r=0.354,P<0.05)。结论:4EBP1和P70S6K在宫颈癌发生、发展中起促进作用,二者可作为宫颈癌诊断及靶向治疗的重要生物学标记物。