肾细胞癌中PTPN12的表达与临床病理资料的相关性

目的检测非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶12(protein tyrosine phosphatase,non-receptor type 12,PTPN12)及PTPN12基因mRNA在肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)组织及相应正常组织中的表达。方法运用免疫组化P-V染色法检测RCC组织中及相应正常组织中PTPN12蛋白的表达,采用实时定量基因扩增荧光检测系统(real-time quantitative polymerase chain reaction detecting system,RT-qPCR)检测RCC组织及相应正常组织中PTPN12基因mRNA相对表达量,并分析其与各临床病理资料之间的关系。结果在RCC组织中PTPN12蛋白表达的阳性率及mRNA的相对表达量显著低于相应正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。RCC组织中PTPN12蛋白及mRNA表达情况与患者的发病年龄、性别、肿瘤直径及临床分期之间均无明显关联(P>0.05)。结论RCC中PTPN12的低表达可能与RCC的发生有关,但可能与患者发病年龄、性别、肿瘤直径及临床分期无关。

以PTPN12为靶点的肝癌生物靶向治疗初探

目的探讨抑癌基因PTPN12在肝癌细胞系Hep-G2中生物治疗肝癌的效果,揭示PTPN12在临床应用上的潜在意义。方法在Hep-G2细胞中顺转、稳定转染PTPN12基因后,通过MTT、WesternBlot、荧光定量PCR分析抗肿瘤作用。结果转染PTPN12后的Hep-G2细胞增殖慢,凋亡率高,PTPN12蛋白表达量高。结论 PTPN12基因在肝癌表达上调,能有效抑制肿瘤细胞的生长,从而促进肿瘤细胞的凋亡。因此,以PTPN12为靶点开展生物治疗可能是一种新的治疗手段。

PTPN12与非小细胞肺癌放射敏感性的关系研究

目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶12(protein tyrosine phosphatase non-receptor type 12,PTPN12)表达与放疗疗效的关系,评估PTPN12基因下调与H1299细胞放射敏感性的关系。方法:回顾性分析2013年9月至2014年10月河北医科大学第四医院92例接受根治性放疗的NSCLC患者的临床资料,通过免疫组织化学方法检测肿瘤组织中PTPN12的表达,并分析其与患者放疗疗效的关系。通过shRNA-PTPN12干扰质粒转染H1299细胞,利用实时定量PCR技术及Western blot技术检测PTPN12在mRNA及蛋白水平的表达。通过克隆形成实验构建细胞生存曲线,评估PTPN12基因下调对H1299细胞放射敏感性的作用。结果:PTPN12低表达患者的放疗疗效明显优于高表达者(80.0%vs.57.1%,P=0.018)。多因素分析显示PTPN12表达是影响放疗疗效的唯一因素。构建shRNA-GFP及shRNA-PTPN12干扰质粒转染H1299细胞,获得稳定转染细胞株H1299-shGFP及H1299-shPTPN12。细胞生存曲线显示H1299-shGFP及H1299-shPTPN12细胞的D0、Dq、SF2值分别为3.02 Gy、3.41 Gy、0.94及1.81 Gy、2.40 Gy、0.72,具有显著性差异(P<0.05)。结论:PTPN12低表达与NSCLC患者的放疗疗效密切相关,而PTPN12基因下调能明显增加H1299细胞的放射敏感性。

食管癌组织中PTPN12的表达及其对Yes-2细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中PTPN12的表达情况以及对Yes-2细胞生物学行为的影响。方法分别采用RT-qPCR和免疫组化SP法检测PTPN12 mRNA和蛋白的表达情况,分析其与临床病理特征的关系;构建PTPN12过表达质粒并转染Yes-2细胞,检测其对Yes-2细胞生物学行为的影响。结果ESCC组织中PTPN12 mRNA的表达量显著低于癌旁正常组织(P<0.01),并与淋巴结转移(P<0.05)相关;PTPN12蛋白表达显著低于癌旁正常组织(P<0.01),并与淋巴结转移、TNM分期(P<0.05)相关。在Yes-2细胞中过表达PTPN12,与对照组相比,在72 h和96 h的增殖能力显著减弱(P<0.01),克隆形成显著减少(P<0.01),迁移能力及侵袭能力显著减弱(P<0.01)。结论PTPN12在ESCC中低表达,并与ESCC发生、发展密切相关,PTPN12过表达可抑制ESCC的体外增殖、迁移与侵袭能力。

PTPN12在乳腺癌中的表达及其影响指标研究

目的探讨PTPN12在乳腺癌中的表达情况及其影响指标。方法选取2011年1月~2012年12月于汕头大学医学院第一附属医院诊治的60例乳腺癌患者为观察组,并选取同时期60例乳腺良性疾病患者为对照组,统计及比较两组患者的PTPN12阳性表达率;比较观察组不同PTPN12表达情况患者的生存期;比较观察组中不同分子分型、EGFR及VEGFR-3表达情况乳腺患者的PTPN12阳性表达率。结果观察组患者的PTPN12表达总阳性率低于对照组,且观察组中PTPN12阳性者的生存期长于PTPN12阴性者,同时观察组中不同分子分型、EGFR及VEGFR-3表达情况者的PTPN12表达总阳性率比较,差异均无统计学意义(均P<0.05)。结论 PTPN12在乳腺癌中的表达呈现明显异常的状态,且其表达与患者的预后存在一定的关系,应重视对乳腺癌患者PTPN12的检测与干预。

PTPN12低表达参与调控肺癌H1299细胞凋亡的作用及对放疗敏感性的影响

目的探讨PTPN12低表达参与调控肺癌H1299细胞凋亡的作用及对放疗敏感性的影响。方法选取肺癌患者82例,应用QIAamp DNA FFPE Tissue Kit试剂盒进行样本DNA提取,采用NanoDrop1000 spectrophotometer测定样本DNA浓度与纯度,所提取的DNA采用紫外分光光度仪进行浓度检测与质量评估。采用化学发光法检测外周血血清肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCC-Ag)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、肿瘤特异性生长因子(TSGF)]。扩增产物采用western blot法进行蛋白产物的定性和定量分析。结果PTPN12表达对肺癌病情的调控作用分析结果可见,在组织分化和病理分期更严重的患者中PTPN12-mRNA表达更低,且在随访生存期更低的患者中也可见表达更低,均有统计学意义;但PTPN12蛋白表达只在不同病理分期患者中检出差别有统计学意义,且同mRNA表达规律相一致;而在不同组织分化和预后患者间差别尚未见统计学意义,与样本量等因素限制有关。PTPN12基因在肺癌组织中突变38例,突变患者血清CEA高于野生型患者,CA125、CYFRA21-1低于野生型患者(P均<0.05)。同时,PTPN12低表达与NSCLC患者的放射敏感性密切相关,而且PTPN12基因下调能明显增加H1299细胞的放射敏感性。结论PTPN12低表达同肺癌患者的放射敏感性存在关联,PTPN12下调可以有效增加H1299细胞的放射敏感性,可以考虑作为提示患者的放射敏感性的靶点,并为靶向治疗联合放疗提供更多依据。

PTPN12蛋白表达下调与原发性肝细胞癌患者复发和预后关系研究

目的探讨非受体蛋白酪氨酸磷酸酶12(PTPN12)在肝癌组织与其癌旁组织中的表达并研究其表达与原发性肝细胞癌预后的关系。方法以肝癌组织与其癌旁组织为研究对象,用免疫组化法检测肝癌组织及癌旁肝组织的PTPN12蛋白的表达。用等级相关和Cox比例风险回归模型等评估PTPN12蛋白的表达与原发性肝细胞癌预后的关系。结果与癌旁肝组织相比,在肝癌组织中的PTPN12蛋白表达明显下调(55.83%vs.43.12%,P<0.005)。进一步的相关分析表明PTPN12蛋白表达降低与肿瘤复发密切相关(χ~2=4.346,P=0.015);单因素分析结果表明肝癌PTPN12表达降低与肝癌肿瘤特异生存率和肝癌复发相关(χ~2=5.687,P<0.001);多变量Cox比例风险回归模型分析发现PTPN12表达是肝癌患者预后的独立因素(χ~2=6.687,P<0.05)。结论 PTPN12蛋白在人肝癌组织中表达下降或缺失,PTPN12表达可能作为肝细胞癌患者复发和预后的生物标志物。

PTPN12甲基化调控胃癌细胞增殖的研究

目的探讨胃癌细胞PTPN基因启动子区甲基化及其表达与细胞生长周期的影响。方法采用甲基化特异性PCR法(MSP)检测不同分化胃癌细胞(AGS、MKN45、SGC7901、MGC803及MKN28)及正常胃黏膜细胞株(GES)中PTPN12基因甲基化状态;Western blot检测各细胞系PTPN12表达水平;流式细胞术检测甲基化抑制药物5-氮杂胞嘧啶核苷(5-azacytidine,5-Aza C)及特异性siRNA处理后胃癌细胞生长周期变化。结果各胃癌细胞株均有PTPN12基因启动子的甲基化,甲基化水平与PTPN12表达相关,且与胃癌细胞分化程度相关。5-Aza C处理后,各胃癌细胞株PTPN12蛋白表达均有所恢复。PTPN12甲基化程度最高且表达量最低的MKN45进行5-Aza C处理后,细胞生长被阻滞在G0/G1期[(56.82±6.37)%],与对照相比差异有统计学意义(P<0.05)。此外,PTPN12 siRNA转染低甲基化且高表达PTPN12的MGC803胃癌细胞,S期细胞相对增多[(51.32±7.32)%,P<0.05],细胞增殖能力增强。结论胃癌细胞PTPN12基因启动子区异常甲基化,可能是导致其表达异常的主要原因,也可能是导致胃癌发生、发展的重要机制之一。

PTPN12在不同分子分型乳腺癌组织中的表达及其与预后的关系

目的观察乳腺癌组织中PTPN12的表达情况,初步探讨其可能作用的蛋白,并分析其与临床病理参数及预后的关系。方法收集2005-2009年南方医院收治的84例乳腺癌患者的病理及临床资料,其中"三阴"乳腺癌患者50例,"非三阴"乳腺癌患者34例。采用免疫组化染色方法检测组织中PTPN12、EGFR的表达,并分析PTPN12表达与临床病理参数以及患者预后的关系。结果 "三阴"乳腺癌患者中PTPN12的缺失表达率、EGFR的阳性表达率显著高于"非三阴"乳腺癌患者(42.0%vs 20.6%,P=0.041;76.0%vs 47.1%,P=0.007)。PTPN12的表达与EGFR(rs=-0.208,P=0.058)、Her-2(rs=-0.250,P=0.022)存在负相关关系。PTPN12表达阴性的患者,其生存期更短。多因素分析表明PTPN12是乳腺癌独立的预后因子。结论PTPN12在"三阴"乳腺癌中具有更高的缺失突变,它的表达与EGFR和Her-2负相关。PTPN12是乳腺癌独立的预后因子。

胃贲门腺癌组织PTPN12表达生物学意义研究

目的探讨非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶12(PTPN12)在胃贲门腺癌(GCA)的表达以及对胃癌细胞体外增殖、迁移和侵袭等生物学特性的影响。方法分别采用RT-qPCR和SP免疫组织化学法检测67例GCA组织及其相应癌旁正常组织中PTPN12mRNA和蛋白的表达情况,分析其与患者临床病理特征的关系;分别采用RT-qPCR和蛋白质印迹法方法检测PTPN12在胃癌细胞中mRNA和蛋白的表达;构建pcDNA3.1-PTPN12过表达质粒并转染BGC823细胞,检测其转染效率,并应用MTS法、克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室分别检测转染前后细胞增殖、迁移和侵袭的变化。结果在GCA组织中,PTPN12mRNA的相对表达量显著低于其相应癌旁正常组织,Z=-10.359,P<0.01;与淋巴结转移(Z=-2.704,P=0.007)和TNM分期(Z=-3.699,P<0.01)相关。在GCA组织中,PTPN12蛋白阳性表达率与相应癌旁正常组织阳性表达率分别为32.84%(22/67)和79.10%(53/67),差异有统计学意义,χ2=29.101,P<0.01;并且与淋巴结转移(χ2=5.298,P=0.021)和TNM分期(χ2=5.761,P=0.016)相关;在胃癌细胞中PTPN12 mRNA和蛋白表达均低于对照组,F=862.733,P<0.01。在BGC823细胞中转染PTPN12过表达质粒,BGC823未转染组、pcDNA3.1-NC组和pcDNA3.1-PTPN12组PTPN12mRNA相对表达量分别为1.279±0.258、1.100±0.052和20.442±0.619,F=2457.892,P<0.01。BGC823未转染组与pcDNA3.1-NC组差异无统计学意义,t=1.178,P=0.304。转染后0、24、48、72和96h,BGC823未转染组细胞增殖速度分别为0.237±0.005、0.306±0.017、0.551±0.016、0.877±0.075和1.014±0.039,pcDNA3.1-NC组增殖速度分别为0.227±0.010、0.310±0.010、0.508±0.045、0.886±0.025和0.923±0.050,pcDNA3.1-PTPN12组增殖速度分别为0.232±0.010、0.261±0.010、0.395±0.025、0.676±0.035和0.678±0.038。在BGC823细胞中过表达PTPN12,与对照组相比,在72h其增殖能力显著减弱,F72h=22.668,P<0.01;96h其增殖能力显著减弱(F96h=66.812,P<0.01),克隆形成率显著减少(F=1484.140,P<0.01),抑制其侵袭能力(F=234.999,P<0.01)。结论PTPN12在GCA组织中低表达,并与胃贲门腺癌的发生发展密切相关,PTPN12过表达可抑制胃癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力。

miR-194在增龄性胸腺萎缩中的表达及靶基因研究

目的:检测增龄性胸腺萎缩过程中miR-194与PTPN12的表达水平变化,并分析二者相互作用,阐明其中的分子调节机制。方法:选用C57BL/6小鼠,分为4组:1月龄组、6月龄组、10月龄组和19月龄组,每组6只,雌雄各半。麻醉后取出胸腺组织,用CD45抗体与LS柱吸附洗脱,筛选出胸腺上皮细胞。实时荧光定量PCR与Western blot方法检测随年龄增长,胸腺上皮细胞中miR-194与PTPN12基因的表达变化趋势。体外实验共转染miR-194与PTPN12荧光素酶报告载体到HEK293细胞内,分别于24、48 h后检测自发荧光值。结果:随月龄增长,miR-194表达出现下调趋势(P<0.05),而PTPN12基因表达出现上调趋势(P<0.05),且二者呈负相关性(P<0.05)。体外荧光素酶报告基因结果显示,miR-194与PTPN12基因3'UTR区域发生直接作用,并在48 h结合效率最高。结论:PTPN12是miR-194靶基因之一,参与了增龄性胸腺萎缩过程,是调节胸腺上皮细胞功能的重要因子。

蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12与心脏HERG钾通道相互作用

目的鉴定HERG钾通道的相互作用蛋白,并进一步研究该相互作用蛋白对HERG钾通道的功能调控。方法 (1)应用酵母双杂交技术,构建含有HERG氨基末端的诱饵载体,将转染有诱饵载体的酵母菌AH109与预转染有人类cDNA文库的Y187酵母菌进行双杂交,初步筛选出HERG的相互作用蛋白;(2)应用免疫共沉淀技术进一步验证酵母双杂交所筛选蛋白与HERG之间的相互作用;(3)GSTpull-down分析:应用GST-HERGT-NT融合蛋白和谷光苷肽-琼脂糖4B小球从大鼠心肌裂解物中沉淀蛋白质,应用抗PTPN12抗体对沉淀物进行WesternBlot分析;(4)免疫荧光组织化学分析:应用抗PTPN12和抗HERG的抗体和荧光标记二抗显示PTPN12及HERG的亚细胞定位,应用激光共聚焦显微镜观察。结果 (1)酵母双杂交筛选发现蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12(Proteintyrosinephosphatasenonreceptortype12,PTPN12)与HERG氨基末端存在相互作用;(2)免疫共沉淀分析发现抗HERG的抗体能够沉淀HERG和PTPN12复合物;(3)GSTpull-down分析发现GST-HERG-NT能够将PTPN12沉淀,而GST蛋白则不能沉淀PTPN12;(4)免疫荧光组织化学分析发现PTPN12和HERG两个蛋白共定位的地方主要出现在细胞膜。结论 PTPN12与HERG氨基末端相互作用,这一发现将有助于更加透彻地理解HERG通道特性多样性的分子基础和LQTS的发病机理。

TGF-β1在乳腺癌EMT中作用机制探讨

目的乳腺癌的发病率不断上升,上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)在乳腺癌病变中广泛存在。本研究探讨TGF-β1在乳腺癌EMT中的作用及PTPN12在此过程中的作用和相关机制。方法蛋白质印迹法检测TGF-β1处理乳腺癌细胞后EMT相关基因以及PI3K、p-AKT和mTOR的表达;免疫组织化学检测乳腺癌组织和癌旁组织中PTPN12表达;免疫共沉淀检测PTPN12和p-AKT是否有直接相互作用;蛋白质印迹法检测转染LV5-PTPN12后,E-Cadherin、Vimentin、Fibronectin、PI3K、p-AKT和mTOR蛋白的表达情况;裸鼠皮下成瘤检测PTPN12对乳腺癌成瘤大小以及体积的影响。结果 NC组和TGF-β1组Vimentin蛋白表达量分别为(17.2±2.3)%和(79.7±8.3)%,t=12.5,P=0.008;Fibronectin蛋白表达量分别(17.4±2.3)%和(77.4±7.5)%,t=12.1,P=0.016。PTPN12在乳腺癌组织中表达明显降低,PTPN12与乳腺癌病理分期分级以及腋窝淋巴结受累数目有关,NC组和TGF-β1组PI3K蛋白表达量分别为(18.6±1.9)%和(76.3±5.9)%,t=12.1,P=0.029;p-AKT蛋白表达量分别为(27.6±3.2)%和(54.1±6.2)%,t=11.7,P=0.013;mTOR蛋白表达量分别为(35.2±3.2)%和(72.2±5.3)%,t=18.3,P=0.031;PTPN12和p-AKT有直接相互作用;PTPN12可以抑制TGF-β1诱导的EMT,LV5-PTPN12组和LV5-NC组Vimentin蛋白表达量分别为(17.2±2.3)%和(79.7±8.3)%,t=11.9,P<0.018;Fibronectin蛋白表达量分别为(17.4±2.3)%和(77.4±7.5)%,t=10.2,P=0.019;E-Cadherin蛋白表达量分别为(82.1±8.4)%和(0.22±0.02)%,t=13.7,P<0.001。PTPN12可以通过PI3K/AKT信号通路起作用,LV5-PTPN12组和LV5-NC组PI3K蛋白表达量分别为(13.2±1.2)%和(56.2±5.1)%,t=7.1,P=0.021;p-AKT蛋白表达量分别为(23.5±2.5)%和(77.1±6.3)%,t=9.2,P=0.008;mTOR蛋白表达量分别为(28.2±3.1)%和(71.7±6.1)%,t=12.8,P=0.032。体内实验表明,与对照组相比,LV5-PTPN12组荷瘤小鼠肿瘤体积和体质量都明显变小,LV5-PTPN12组和LV5-NC组肿瘤体积分别为(2.8±0.2)和(0.4±0.02)cm^3,t’=13.8,P<0.001;体质量分别为(3.1±0.3)和(0.4±0.02)g,t’=18.6,P<0.001。结论 PTPN12在TGF-β1作用下通过PI3K/AKT信号通路诱导乳腺癌的EMT中起抑制作用。