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Tet-on系统诱导esp1基因表达对A_(549)细胞染色体的影响
被引量:
1
1
作者
刘丽莎
刘昕
程英
《重庆医学》
CAS
CSCD
2006年第20期1862-1864,共3页
目的观察肺腺癌Am细胞经Tet-on系统诱导表达espl基因后其染色体数目的改变。方法利用PTet—on基因表达调控系统,先后将调控质粒Ptet-on和反应质粒PTK-Hyg与PTRE-EGFP-espl以合适的比例用FuGENE6脂质体共转染入A-细胞,经G418和潮霉素...
目的观察肺腺癌Am细胞经Tet-on系统诱导表达espl基因后其染色体数目的改变。方法利用PTet—on基因表达调控系统,先后将调控质粒Ptet-on和反应质粒PTK-Hyg与PTRE-EGFP-espl以合适的比例用FuGENE6脂质体共转染入A-细胞,经G418和潮霉素筛选成活并带有绿色荧光的细胞为转染成功细胞,挑选8个单细胞克隆并扩增培养,加入强力霉素诱导espl表达。用RT-PCR检测不同浓度强力霉素诱导以及强力霉素诱导不同时间的espl的表达量,并采用传统秋水仙素方法以及流式细胞技术检测诱导不同时间段A549/Ptet-on/TK-Hyg/PTRE-EGFP-espl细胞克隆染色体数目的改变。结果100~200ng/ml浓度范围的强力霉素诱导espl表达量最高,诱导1h即可有espl基因的表达,至48h表达量到达高峰之后逐步减少。在诱导24h后逐步出现染色体数目减少。结论上调espl基因对肿瘤细胞异常染色体有一定的抑制作用,对肿瘤治疗有潜在的应用价值。
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关键词
A549细胞
espl
ptet-on
强力霉素
染色体
下载PDF
职称材料
esp1基因Tet-on载体的构建及在Hela中的可调控性表达
2
作者
张天
《医学信息(医学与计算机应用)》
2014年第15期228-229,共2页
目的构建esp1-pTRE-d2EGFP可调控真核表达载体,检测其在Hela细胞内的表达情况。方法将esp1导入pTRE-d2EGFP载体中。用脂质体将pTet-on、PTK-Hyg和esp1-pTRE-d2EGFP共转染入Hela细胞,以不同浓度的DOX诱导,用Real-time PCR、Western blot...
目的构建esp1-pTRE-d2EGFP可调控真核表达载体,检测其在Hela细胞内的表达情况。方法将esp1导入pTRE-d2EGFP载体中。用脂质体将pTet-on、PTK-Hyg和esp1-pTRE-d2EGFP共转染入Hela细胞,以不同浓度的DOX诱导,用Real-time PCR、Western blot检测esp1表达水平。结果我们构建的可调控性表达载体能在Hela细胞内表达,不同浓度药物诱导的esp1表达水平明显不同。结论成功构建了esp1-pTRE-d2EGFP真核表达载体,并可在Hela细胞内表达。为进一步观察esp1与肿瘤发生、发展的关系奠定了基础。
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关键词
esp1
HELA
ptet-on
PTK-Hyg
esp1-pTRE-d2EGFP
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职称材料
题名
Tet-on系统诱导esp1基因表达对A_(549)细胞染色体的影响
被引量:
1
1
作者
刘丽莎
刘昕
程英
机构
第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室
出处
《重庆医学》
CAS
CSCD
2006年第20期1862-1864,共3页
文摘
目的观察肺腺癌Am细胞经Tet-on系统诱导表达espl基因后其染色体数目的改变。方法利用PTet—on基因表达调控系统,先后将调控质粒Ptet-on和反应质粒PTK-Hyg与PTRE-EGFP-espl以合适的比例用FuGENE6脂质体共转染入A-细胞,经G418和潮霉素筛选成活并带有绿色荧光的细胞为转染成功细胞,挑选8个单细胞克隆并扩增培养,加入强力霉素诱导espl表达。用RT-PCR检测不同浓度强力霉素诱导以及强力霉素诱导不同时间的espl的表达量,并采用传统秋水仙素方法以及流式细胞技术检测诱导不同时间段A549/Ptet-on/TK-Hyg/PTRE-EGFP-espl细胞克隆染色体数目的改变。结果100~200ng/ml浓度范围的强力霉素诱导espl表达量最高,诱导1h即可有espl基因的表达,至48h表达量到达高峰之后逐步减少。在诱导24h后逐步出现染色体数目减少。结论上调espl基因对肿瘤细胞异常染色体有一定的抑制作用,对肿瘤治疗有潜在的应用价值。
关键词
A549细胞
espl
ptet-on
强力霉素
染色体
Keywords
A549 cell
espl
ptet-on
doxycycline
chromosome
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
esp1基因Tet-on载体的构建及在Hela中的可调控性表达
2
作者
张天
机构
遵义医学院免疫学教研室
出处
《医学信息(医学与计算机应用)》
2014年第15期228-229,共2页
文摘
目的构建esp1-pTRE-d2EGFP可调控真核表达载体,检测其在Hela细胞内的表达情况。方法将esp1导入pTRE-d2EGFP载体中。用脂质体将pTet-on、PTK-Hyg和esp1-pTRE-d2EGFP共转染入Hela细胞,以不同浓度的DOX诱导,用Real-time PCR、Western blot检测esp1表达水平。结果我们构建的可调控性表达载体能在Hela细胞内表达,不同浓度药物诱导的esp1表达水平明显不同。结论成功构建了esp1-pTRE-d2EGFP真核表达载体,并可在Hela细胞内表达。为进一步观察esp1与肿瘤发生、发展的关系奠定了基础。
关键词
esp1
HELA
ptet-on
PTK-Hyg
esp1-pTRE-d2EGFP
分类号
R392.12 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Tet-on系统诱导esp1基因表达对A_(549)细胞染色体的影响
刘丽莎
刘昕
程英
《重庆医学》
CAS
CSCD
2006
1
下载PDF
职称材料
2
esp1基因Tet-on载体的构建及在Hela中的可调控性表达
张天
《医学信息(医学与计算机应用)》
2014
0
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职称材料
已选择
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