榆苋方对大肠湿热型溃疡性结肠炎大鼠Pxr、NF-κB及炎症因子水平影响和黏膜修复作用研究

目的探究榆苋方保留灌肠对大肠湿热型溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型Pxr、NF-κB及炎症因子和结肠黏膜的影响。方法选取Wista大鼠(SPF级)成年大鼠53只,体质量200~220 g,扬州大学动物实验中心提供,雌雄各半,适应性饲养1周后建立UC大鼠模型,随机分为6组:模型组、空白对照组、低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组、阳性对照组等,空白对照组8只,余每组9只。空白对照组不建模,其余组别建立溃疡性结肠炎模型,模型组不使用干预治疗药物,低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组分别使用榆苋方不同剂量药物保留灌肠,阳性对照组使用柳氮磺吡啶灌肠。治疗14 d后观察结肠黏膜损伤情况,结肠黏膜中白细胞介素(IL)-10、干扰素(INF)-γ水平变化,以及Pxr mRNA、NF-κB p65 mRNA、IκB-αmRNA表达情况。结果与空白对照组相比,UC大鼠模型组、SASP组、榆苋方各剂量组INF-γ水平显著升高,IL-10水平明显降低(P<0.05);经榆苋方治疗后,随着给药剂量逐渐增高,INF-γ水平明显降低(P<0.05),IL-10水平明显升高(P<0.05);高剂量榆苋方组IL-10、INF-γ水平与SASP组阳性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。模型组与正常对照组比较,Pxr和IκB-αmRNA表达水平显著降低,SASP阳性对照组和榆苋方各剂量组给药干预治疗后,Pxr和IκB-αmRNA表达明显增加;模型组与空白对照组进行比较,模型组NF-κB p65 mRNA表达明显增加,经给药干预治疗后,其表达水平有显著下降,高剂量榆苋方组Pxr mRNA、NF-κB p65 mRNA、IκB-αmRNA水平与SASP组阳性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论榆苋方保留灌肠对大肠湿热型溃疡性结肠炎大鼠具有肠黏膜损伤修复及炎症因子调控作用。

PXR、MDR1、CYP3A5和CYP2B6在高级别浆液性卵巢癌组织中的表达及其意义

目的探讨孕烷X受体(PXR)、多药耐药蛋白1(MDR1)、细胞色素P4503A5(CYP3A5)和细胞色素P4502B6(CYP2B6)在高级别浆液性卵巢癌(high grade serous ovarian cancer,HGSOC)组织中的表达及其意义。方法选取2019年9月-2021年12月青岛市市立医院妇科收治的56例HGSOC患者作为试验组,据其对铂类药物的耐药情况分为耐药组(24例)和敏感组(32例),另外选取妇科同期收治的16例子宫肌瘤患者作为对照组。采用免疫组织化学、实时定量荧光PCR及蛋白印迹法对试验组患者HGSOC组织和对照组患者正常输卵管组织中PXR、MDR1、CYP3A5和CYP2B6的表达情况进行检测。结果与对照组相比较,试验组患者PXR、MDR1、CYP3A5、CYP2B6阳性表达率显著升高(χ^(2)=12.879~17.174,P<0.05),mRNA相对表达量显著升高(t=9.746~17.640,P<0.05),蛋白表达量显著升高(t=13.312~60.448,P<0.05);与敏感组相比,耐药组患者PXR、MDR1、CYP3A5、CYP2B6阳性表达率显著升高(χ^(2)=4.371~8.549,P<0.05),mRNA相对表达量显著升高(t=6.859~19.000,P<0.05),蛋白表达量显著升高(t=8.693~27.670,P<0.05)。HGSOC患者PXR与CYP3A5、CYP2B6的表达呈正相关(r=0.332、0.308,P<0.05),与MDR1的表达无明显相关性(P>0.05)。结论PXR、MDR1、CYP3A5、CYP2B6在HGSOC患者的肿瘤组织中呈高表达,其可能参与HGSOC的发生发展过程。PXR、MDR1、CYP3A5和CYP2B6的表达检测可用于判断HGSOC对化疗的敏感性,有助于为术后化疗提供指导意见。

沙棘经PXR/NF-κB通路减缓免疫性肝损伤小鼠肝脏CYP2C下调

目的探讨沙棘(sea-buckthorn)是否通过PXR/NF-κB通路,减缓卡介苗(BCG)诱导的免疫性肝损伤小鼠肝脏细胞色素P4502C(CYP2C)下调。方法采用单次尾静脉注射BCG 125 mg·kg-1复制免疫性肝损伤小鼠模型用于乙型肝炎相关研究,将小鼠随机分为control组、BCG组、BCG+沙棘颗粒(sea-buckthorn granule,SG)(分别灌胃50、100、200 mg·kg-1,每日2次)组和BCG+PCN(腹腔注射100 mg·kg-1,每日1次)组。ELISA法检测血清转氨酶和肝组织中TNF-α、IL-1β的表达,Western blot检测肝脏NF-κB p65核蛋白和孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、CYP2C总蛋白表达,HE染色观察小鼠肝脏的病理变化。结果沙棘抑制TNF-α、IL-1β、NF-κB p65的过表达,且缓解CYP2C、PXR蛋白表达下调,肝脏病理和血清转氨酶均有所改善,且呈剂量依赖性;用PXR的小鼠特异性激动剂PCN干预后与SG高剂量组相似。结论沙棘可以经PXR/NF-κB通路,减缓免疫性肝损伤小鼠CYP2C的下调。

HepG2和Huh7细胞CYP3A4、CYP3A5和PXR基因非编码单核苷酸多态性分析

目的:对HepG2和Huh7细胞中CYP3A4、CYP3A5和PXR基因的重要非编码单核苷酸多态性(SNP)进行分析。方法:提取HepG2和Huh7细胞基因组DNA,PCR后进行测序分析。结果:在HepG2细胞中CYP3A4 rs2242480、rs3735451、rs2246709、rs4646440、rs12333983都为突变杂合子;而在Huh7细胞中上述前4个SNP为野生纯合子,最后1个为突变纯合子。在这两种细胞中,CYP3A4 rs35599367、rs4646437、rs35564277都为野生纯合子,rs2740574为突变纯合子。在HepG2和Huh7细胞中CYP3A5 rs776746分别为突变杂合子和突变纯合子。在两种细胞中,PXR rs3814055、rs2276706、rs6785049为突变杂合子,rs13059232为突变纯合子。上述14个SNP中,HepG2细胞突变杂合子较多,而Huh7细胞野生纯合子及突变纯合子较多。结论:HepG2和Huh7细胞中CYP3A4、CYP3A5 SNP基因型不完全相同,而PXR SNP基因型相同。

榆苋方保留灌肠对大肠湿热型溃疡性结肠炎大鼠PXR/NF-κB信号通路及炎症因子的调控作用研究

目的观察榆苋方保留灌肠对大肠湿热型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠结肠组织孕烷X受体(PXR)、核因子κB p65(NF-κBp65)蛋白表达以及白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及转化生长因子-β(TGF-β)水平的影响。方法将53只大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组及榆苋方低剂量、中剂量、高剂量组,空白对照组8只,其余各组均9只。除空白对照组外,其余各组建立UC模型。造模成功后开始给药,阳性对照组给予0.02 g/mL柳氮磺胺吡啶(SASP)3 mL灌肠,榆苋方低、中、高剂量组分别给予0.09、0.18、0.36 g/mL榆苋方水煎剂3 mL灌肠,空白对照组、模型组给予等体积生理盐水灌肠。1次/d,连续给药14 d。实验结束后,收集结肠组织,对比各组组织学损伤评分、结肠黏膜损伤评分,Western blotting法检测结肠组织中PXR蛋白、NF-κB p65蛋白表达,ELISA法检测结肠组织IL-10、TNF-α、TGF-β水平。结果空白对照组结肠黏膜正常;模型组结肠黏膜糜烂严重,有大片状表浅溃疡;各治疗组与模型组相比结肠溃疡数量减少、面积缩小,黏膜损伤减轻。与空白对照组比较,模型组结肠黏膜损伤评分、组织学损伤评分、NF-κB p65蛋白表达、TNF-α、TGF-β水平高,结肠组织PXR蛋白表达、IL-10水平低(P<0.01);与模型组比较,各治疗组以上评分、NF-κB p65蛋白表达、TNF-α、TGF-β、TNF-α、TGF-β水平均低,PXR蛋白表达、IL-10水平高(P<0.05,P<0.01);榆苋方高剂量组以上评分、NF-κB p65蛋白表达均低于榆苋方低、中剂量组,PXR蛋白表达、IL-10水平高于榆苋方低、中剂量组(P<0.05,P<0.01)。榆苋方高剂量组以上指标与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论榆苋方保留灌肠可修复大肠湿热型UC大鼠肠黏膜损伤,并对PXR/NF-κB信号通路及炎症因子有调控作用。

中药莪术激活PXR及对大鼠肝细胞色素P450 3A的影响

目的考察莪术能否通过体外激活PXR调节细胞色素P4503A4(CYP3A4)的转录表达及对大鼠肝脏CYP3A在酶活性及mRNA表达的诱导作用。方法在HepG2细胞中,采用瞬时共转染报告基因实验研究莪术对PXR介导的CYP3A4的转录调节作用;在大鼠体内,采用紫外分光光度法和RT-PCR技术检测莪术对大鼠肝脏CYP450含量及CYP3A同工酶红霉素N-脱甲基酶(ERD)的活性和CYP3A基因mRNA表达的影响。结果在体外报告基因实验研究中,莪术提取物及其有效成分能不同程度的诱导CYP3A4的表达;在大鼠体内实验中,莪术提取物能够增加CYP450蛋白含量和CYP3A酶活性;在mRNA水平上,莪术提取物能够明显诱导CYP3A1及CYP3A2的基因表达。结论莪术提取物及其有效成分能够明显激活PXR并诱导CYP3A4的转录表达;莪术提取物对大鼠体内CYP3A的酶活性及mRNA表达均有明显诱导作用。

芒果苷上调HepG2细胞膜蛋白MRP3和核受体PXR、CPF表达

目的体外HepG2细胞培养观察芒果苷(mangiferin)对多耐药相关蛋白3(multidrug resistance-associate protein 3,MRP3)和核受体孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、CYP7A启动子结合因子(CYP7A promoter-binding factor,CPF)表达的影响。方法用芒果苷刺激HepG2细胞72 h后,分别抽提细胞RNA、膜蛋白及核蛋白,采用半定量RT-PCR和蛋白免疫印迹检测膜转运蛋白MRP3和核受体PXR、CPF在转录与蛋白水平的表达变化。熊脱氧胆酸(ursode-oxycholic acid,UDCA)处理的HepG2细胞作为阳性对照、DMSO处理细胞为阴性对照。结果芒果苷可显著刺激HepG2细胞膜转运蛋白MRP3的mRNA(比阴性对照组高3.0倍,P<0.05)和蛋白(比阴性对照组高3.3倍,P<0.05)表达,其作用强于UDCA。芒果苷也可明显上调核受体PXR[mRNA水平增高1.7倍(P<0.05),蛋白水平增高3.7倍(P<0.01)]、CPF[mRNA水平增高2.1倍(P<0.05),蛋白水平增高4.9倍(P<0.05)]的表达。结论芒果苷刺激肝癌细胞HepG2细胞膜转运蛋白MRP3的表达上调可能与核受体PXR、CPF途径相关。

结肠癌细胞核受体PXR表达对CPT-11化疗效果的影响

目的:探讨结肠癌细胞核受体PXR表达的变化对CPT-11化疗效果的影响。方法:用Western blot方法检测PXR蛋白在人结肠癌细胞株LS174T、HT29和HCT116中的表达。通过莱菔硫烷、利福平分别敲低或上调PXR受体的表达,利用MMT或流式细胞术研究其表达下调或上调对细胞增殖和凋亡的影响。结果:3株结肠癌细胞株LS174T、HT29、HCT116中,LS174T细胞的PXR表达水平最高(P=0.000)。莱菔硫烷处理后,LS174T细胞中PXR表达明显减弱(P=0.000),CPT-11作用后,细胞增殖明显受到抑制(P=0.013),对CPT-11敏感性增强;同时利用利福平处理后,LS174T细胞中PXR表达增强(P=0.000),CPT-11作用后,细胞增殖明显加速(P=0.019),对CPT-11敏感性降低。结论:结肠癌细胞核受体PXR表达的变化对于CPT-11化疗敏感性具有十分重要的影响,其可能在结肠癌耐药机制中具有重要作用。

PXR基因多态性的研究现状及其对环孢素A的药物相互作用的预测意义

环孢素A作为广泛应用于器官移植术后的免疫抑制剂,狭窄的治疗窗、显著的药动学个体差异,尤其是药物联用情况下的初始剂量选择是众多学者关注的问题.CYP3A4显著的表型差异是造成环孢素A药动学差异的主要原因.核受体PXR作为CYP3A4以及P糖蛋白编码基因的上游调控关键因子,其自身基因序列的突变可能是导致下游基因转录活性发生改变的分子机制.因此,从PXR的基因入手,探索环孢素A的最佳初始剂量,将为器官移植患者提供更加准确的治疗方案.

PXR、CAR和PPAR对UGT基因转录的调节

UGT是生物体内重要的Ⅱ相药物代谢酶。孤儿核受体PXR、CAR和PPAR对UGT基因转录起上调作用 ,它们的分布浓度和活性的差异可导致UGT表达和分布的差异。化合物通过核受体调节UGT的表达可能是影响化合物体内代谢的一条重要途径。研究核受体PXR、CAR、PPAR对Ⅱ相代谢酶UGT的调节作用对于新药设计、指导临床合理用药、预测药物相互作用、减少药物不良反应、预防人类疾病都具有重要意义。

核受体PXR和CAR与药物代谢酶及临床疾病的研究进展

孕烷X受体（PXR）和组成型雄甾烷受体（CAR）是核受体超家族的成员。这些核受体因参与多种内源性和外源性物质代谢而被熟知，同时又与多种临床疾病的转归紧密联系，例如癌症、肝脏疾病、炎症性疾病、内分泌性疾病、代谢性疾病。而且目前许多临床疾病所使用的处方药的治疗靶点已被确定为核受体。

核受体PXR在宫颈鳞癌组织及SiHa细胞中的表达及临床意义

目的:探讨核受体孕烷X受体(PXR)在宫颈鳞癌组织的表达及与宫颈鳞癌发生的关系。方法:采用免疫组织化学及细胞免疫化学检测核受体PXR在41例宫颈癌组织及宫颈鳞癌细胞株SiHa中的表达。结果:PXR在宫颈鳞癌细胞株SiHa中有表达;正常宫颈组织有PXR表达,41例宫颈鳞癌组织中PXR的阳性率为59.5%,且宫颈癌组织中明显低表达。结论:PXR的表达水平与宫颈癌的发生有一定的相关性,可能成为今后判断宫颈癌预后有价值的标志物。

基于报告基因检测的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型的建立

目的建立基于报告基因法的高通量筛选细胞模型,用来发现PXR、FXR和LXRα受体激动剂。方法利用Real-time定量PCR方法比较HEK293、Hep G2和LS174T细胞中内源性核受体PXR、FXR和LXRα的表达量,将p SG5-h PXR和p GL3-XREM-CYP3A4、p EGFP-N3-h FXR和EcRETK-Luc、p CMX-FLAG-h LXRα和p GL3-XREM-CYP3A4等质粒分别共转染到工具细胞中,优化共转染比例,并考察阳性药与萤光素酶报告基因表达强度的量效关系、模型特异性和稳定性。结果 1根据Real-time定量PCR结果,模型选用低表达PXR、FXR和LXRα的HEK293细胞作为工具细胞;2根据不同共转染比例对报告基因活性的结果,PXR、FXR和LXRα报告基因药物筛选模型的报告基因和过表达质粒比例,最终分别选择1∶1、2∶1和2∶1;3模型中,报告基因活性均与相应阳性药物(PXR/Rif、FXR/CDCA和LXRα/T0901317)呈剂量依赖性增长;4仅PXR激动剂Rif、FXR激动剂CDCA和LXRα激动剂T0901317可分别明显增加相应筛选模型的报告基因活性,分别重复5次试验后,计算得Z'值分别为0.58、0.66和0.63。结论该研究建立的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型,具有良好的特异性和稳定性,适用于对PXR、FXR和LXRα受体激动剂的筛选,进而开发以核受体作为药物靶点的药物。

基于PKC／NF-κKB／PXR调控网络对卜糖蛋白基因表达的影响及其机制研究

P-糖蛋白（P—gP；ABCB1）是ABC转运体家族重要成员，也是药物在机体内转运的重要载体，参与了药物代谢动力学过程并介导了临床上许多药物相互作用。近年来研究表明P—gP的功能与蛋白激酶C（proteinkinase C，PKC）关系密切。但其分子作用机制尚不明确。

PXR2基因多态性对肾移植术后他克莫司血药浓度和药物服用剂量的影响

目的:探究孕烷受体(pregnane X receptor,PXR)的剪接变体PAR-2(PXR2)启动子区6 bp-deletion基因多态性对肾移植术后他克莫司血药浓度和药物服用剂量(blood concentration and drug dose,C/D)影响,从而指导患者肾移植术后他克莫司的个体化治疗。方法:收集江西省人民医院器官移植科2014年7月至2018年6月73例肾移植患者血液标本,采用Anelic Special-Touch Down PCR法检测PXR2基因多态性分型。记录患者年龄、性别、体重、血红蛋白、总胆红素值及质子泵抑制剂的使用情况。结果:PCR结果显示,73例标本中PXR2纯合子型39例(53.42%),野生型4例(5.48%),杂合子型30例(41.1%)。多元线性回归分析显示,PAR-2启动子区6 bp-deletion基因多态性的基因分型与C/D无明显相关性,差异无统计学意义(P>0.05)。血红蛋白、总胆红素与C/D呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素方差分析显示,纯合子型、野生型、杂合子型3个组别的C/D数值在术后3 d、2周、1个月组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:PXR-2启动子区6 bp-deletion基因多态性对他克莫司C/D无影响,血红蛋白、胆红素水平对他克莫司C/D有影响且呈正相关。

自拟葛花解酒涤脂汤对酒精性脂肪肝小鼠肝脏脂肪沉积及PXR表达的影响

目的了解自拟葛花解酒涤脂汤对酒精性脂肪肝(AFLD)小鼠肝脏脂肪沉积的影响,并观察其对肝组织孕烷受体(PXR)及其调控靶基因CYP3A11、CYP3A25蛋白及mRNA表达的影响。方法将29只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组(5只),模型组(8只),高剂量干预组(8只)、低剂量干预组(8只)。采用美国国立卫生研究院酒精滥用和酒精中毒研究所(NIAAA)方法制备AFLD小鼠模型,分别灌胃给予高、低剂量葛花解酒涤脂汤水煎剂干预,连续9 d。采用酶联免疫吸附法检测血清中谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)水平,组织病理学油红O染色检测肝脏脂肪沉积情况;实时荧光定量PCR及免疫组织化学方法分别检测PXR、CYP3A11、CYP3A25 mRNA及PXR蛋白的表达。结果与模型组比较,干预组小鼠肝脏脂肪沉积显著减轻,呈剂量依赖性,具有比模型组和正常组显著增加的PXR、CYP3A25表达水平(P<0.01);模型组小鼠血清ALT水平显著增加(P<0.01),其余各组相似;各组CYP3A11mRNA转录水平差异无显著性(P≥0.05)。结论自拟葛花解酒涤脂汤对实验小鼠AFLD具有明显的治疗作用,可能与促进PXR及其靶基因CYP3A25表达有关。

CYP3A65及上游核受体基因PXR和AHR2在斑马鱼生长发育阶段的表达

为了选择处于最佳生长阶段的斑马鱼用于药物代谢研究,本实验考察不同生长阶段斑马鱼全鱼、肝脏和肠道组织中CYP3A65及其上游核受体基因(PXR、AHR2)mRNA表达水平的变化规律。实验测定CYP3A65、PXR和AHR2相对表达量,并通过比较核受体基因与代谢酶基因mRNA之间的相关性来证实核受体基因的调控作用。结果显示,144 hpf和75 dpf两个生长阶段的斑马鱼中CYP3A65、PXR和AHR2 mRNA表达量最高;斑马鱼生长阶段中代谢酶基因和核受体基因的表达趋势一致,且受肝脏、肠道组织占全鱼比重的影响。研究表明,幼鱼期144 hpf斑马鱼及稚鱼期75 dpf的斑马鱼最适用于CYP3A65代谢研究;CYP3A65与PXR、CYP3A65与AHR2的mRNA表达之间有显著的相关性,与AHR2的相关性更显著。

核受体PXR与耐药相关基因在结肠癌中的表达及意义

目的检测核受体PXR和耐药相关基因在人结肠癌中表达,初步探讨其相互关系在肿瘤免疫和肿瘤耐药中意义。方法分别用RT-PCR和western blot方法检测PXR、MRP2、MRP3、ABCG2、MDR1和CYP3A4在17例结肠癌组织中的表达,并进行半定量统计分析。结果与相应正常组织相比,结肠癌组织中PXR、MRP2和MRP3 mRNA水平和蛋白水平均显著增强(P<0.05)。而结肠癌组织中ABCG2、MDR1和CYP3A4 mRNA水平与相应正常组织相比没有显著差异。在癌组织和正常组织中,MRP3 mRNA水平与PXR mRNA水平呈正相关性(P<0.05)。结论 PXR、MRP2和MRP3可能在结肠癌耐药中具有重要作用,PXR调控MRP3表达可能涉及其耐药机制。

利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼核受体PXR基因初探

孕烷X受体(Pregnane X receptor,PXR)是核受体超家族(NRs)中NR1I的重要成员之一,在保护机体免于内源性和外源性物质损伤方面具有重要作用。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立PXR基因敲除的斑马鱼模型,为研究环境污染物的毒性机理及代谢过程提供基础模型。根据PXR基因序列,设计gRNA靶位点,体外转录合成gRNA。同时,将设计合成的gRNA与Cas9 mRNA通过显微注射转入斑马鱼受精卵,经孵化、筛选出有效的突变体,并逐代培养杂交筛选出PXR基因敲除突变体。结果表明利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功敲除PXR基因,经测序分析获得稳定的PXR(+4/+4)基因纯合体。