TNF-α调节NF-κB/PXR炎症途径对肺癌细胞生物行为的影响及作用机制

目的分析TNF-α调节NF-κB/PXR炎症途径对肺癌细胞生物行为的影响及作用机制。方法将A549细胞分为对照组和干预组,对照组正常培养不做任何干预处理,干预组使用人TNF-α以10 ng/ml浓度共培养12 h;检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、细胞侵袭活性;并采用PCR及WB法检测细胞中NF-κB、PXR蛋白和mRNA表达水平。结果在TNF-α干预24 h、48 h和72 h时,干预组细胞检测的吸光度值明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);采用TNF-α干预24 h后干预组A549细胞的凋亡率明显低于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);干预24 h后采用TNF-α处理的干预组细胞的S期比例明显高于对照组,而G_(2)+M期和G_(0)+G_(1)期细胞比例明显低于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);干预24 h后采用TNF-α处理的干预组细胞侵袭数明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);干预24 h后采用TNF-α处理的干预组NF-κB、PXR蛋白表达水平均明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);干预24 h后采用TNF-α处理的干预组细胞NF-κB及PXR mRNA表达均明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05)。结论TNF-α可通过调控NF-κB/PXR炎症途径实现对肺癌细胞增殖、凋亡和侵袭的调控。

PXR/CAR-代谢酶/转运体解毒系统的功能及研究进展

目的综述孕烷X受体(PXR)和组成型雄甾烷受体(CAR)-代谢酶/转运体解毒系统的功能和研究进展。方法从肝脏代谢酶、肝肾转运体、PXR/CAR介导的药物解毒等多方面对PXR/CAR-代谢酶/转运体解毒系统及其在药物解毒方面的研究进展进行论述。结果与结论药物作为人体外源性物质,可能存在一定毒副作用,使用不当或毒性较强的药物易造成机体损伤。药物代谢酶和转运体是决定药物体内过程及暴露量的两大核心因素,在药物毒性与解毒方面扮演重要角色。随着对PXR和CAR研究的不断深入,发现其对药物解毒相关的代谢酶和转运体发挥核心调控作用,共同构成了机体最重要的防御解毒系统—PXR/CAR-代谢酶/转运体解毒系统。

中药莪术激活PXR及对大鼠肝细胞色素P450 3A的影响

目的考察莪术能否通过体外激活PXR调节细胞色素P4503A4(CYP3A4)的转录表达及对大鼠肝脏CYP3A在酶活性及mRNA表达的诱导作用。方法在HepG2细胞中,采用瞬时共转染报告基因实验研究莪术对PXR介导的CYP3A4的转录调节作用;在大鼠体内,采用紫外分光光度法和RT-PCR技术检测莪术对大鼠肝脏CYP450含量及CYP3A同工酶红霉素N-脱甲基酶(ERD)的活性和CYP3A基因mRNA表达的影响。结果在体外报告基因实验研究中,莪术提取物及其有效成分能不同程度的诱导CYP3A4的表达;在大鼠体内实验中,莪术提取物能够增加CYP450蛋白含量和CYP3A酶活性;在mRNA水平上,莪术提取物能够明显诱导CYP3A1及CYP3A2的基因表达。结论莪术提取物及其有效成分能够明显激活PXR并诱导CYP3A4的转录表达;莪术提取物对大鼠体内CYP3A的酶活性及mRNA表达均有明显诱导作用。

芒果苷上调HepG2细胞膜蛋白MRP3和核受体PXR、CPF表达

目的体外HepG2细胞培养观察芒果苷(mangiferin)对多耐药相关蛋白3(multidrug resistance-associate protein 3,MRP3)和核受体孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、CYP7A启动子结合因子(CYP7A promoter-binding factor,CPF)表达的影响。方法用芒果苷刺激HepG2细胞72 h后,分别抽提细胞RNA、膜蛋白及核蛋白,采用半定量RT-PCR和蛋白免疫印迹检测膜转运蛋白MRP3和核受体PXR、CPF在转录与蛋白水平的表达变化。熊脱氧胆酸(ursode-oxycholic acid,UDCA)处理的HepG2细胞作为阳性对照、DMSO处理细胞为阴性对照。结果芒果苷可显著刺激HepG2细胞膜转运蛋白MRP3的mRNA(比阴性对照组高3.0倍,P<0.05)和蛋白(比阴性对照组高3.3倍,P<0.05)表达,其作用强于UDCA。芒果苷也可明显上调核受体PXR[mRNA水平增高1.7倍(P<0.05),蛋白水平增高3.7倍(P<0.01)]、CPF[mRNA水平增高2.1倍(P<0.05),蛋白水平增高4.9倍(P<0.05)]的表达。结论芒果苷刺激肝癌细胞HepG2细胞膜转运蛋白MRP3的表达上调可能与核受体PXR、CPF途径相关。

结肠癌细胞核受体PXR表达对CPT-11化疗效果的影响

目的:探讨结肠癌细胞核受体PXR表达的变化对CPT-11化疗效果的影响。方法:用Western blot方法检测PXR蛋白在人结肠癌细胞株LS174T、HT29和HCT116中的表达。通过莱菔硫烷、利福平分别敲低或上调PXR受体的表达,利用MMT或流式细胞术研究其表达下调或上调对细胞增殖和凋亡的影响。结果:3株结肠癌细胞株LS174T、HT29、HCT116中,LS174T细胞的PXR表达水平最高(P=0.000)。莱菔硫烷处理后,LS174T细胞中PXR表达明显减弱(P=0.000),CPT-11作用后,细胞增殖明显受到抑制(P=0.013),对CPT-11敏感性增强;同时利用利福平处理后,LS174T细胞中PXR表达增强(P=0.000),CPT-11作用后,细胞增殖明显加速(P=0.019),对CPT-11敏感性降低。结论:结肠癌细胞核受体PXR表达的变化对于CPT-11化疗敏感性具有十分重要的影响,其可能在结肠癌耐药机制中具有重要作用。

榆苋方对大肠湿热型溃疡性结肠炎大鼠Pxr、NF-κB及炎症因子水平影响和黏膜修复作用研究

目的探究榆苋方保留灌肠对大肠湿热型溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型Pxr、NF-κB及炎症因子和结肠黏膜的影响。方法选取Wista大鼠(SPF级)成年大鼠53只,体质量200~220 g,扬州大学动物实验中心提供,雌雄各半,适应性饲养1周后建立UC大鼠模型,随机分为6组:模型组、空白对照组、低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组、阳性对照组等,空白对照组8只,余每组9只。空白对照组不建模,其余组别建立溃疡性结肠炎模型,模型组不使用干预治疗药物,低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组分别使用榆苋方不同剂量药物保留灌肠,阳性对照组使用柳氮磺吡啶灌肠。治疗14 d后观察结肠黏膜损伤情况,结肠黏膜中白细胞介素(IL)-10、干扰素(INF)-γ水平变化,以及Pxr mRNA、NF-κB p65 mRNA、IκB-αmRNA表达情况。结果与空白对照组相比,UC大鼠模型组、SASP组、榆苋方各剂量组INF-γ水平显著升高,IL-10水平明显降低(P<0.05);经榆苋方治疗后,随着给药剂量逐渐增高,INF-γ水平明显降低(P<0.05),IL-10水平明显升高(P<0.05);高剂量榆苋方组IL-10、INF-γ水平与SASP组阳性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。模型组与正常对照组比较,Pxr和IκB-αmRNA表达水平显著降低,SASP阳性对照组和榆苋方各剂量组给药干预治疗后,Pxr和IκB-αmRNA表达明显增加;模型组与空白对照组进行比较,模型组NF-κB p65 mRNA表达明显增加,经给药干预治疗后,其表达水平有显著下降,高剂量榆苋方组Pxr mRNA、NF-κB p65 mRNA、IκB-αmRNA水平与SASP组阳性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论榆苋方保留灌肠对大肠湿热型溃疡性结肠炎大鼠具有肠黏膜损伤修复及炎症因子调控作用。

PXR基因多态性的研究现状及其对环孢素A的药物相互作用的预测意义

环孢素A作为广泛应用于器官移植术后的免疫抑制剂,狭窄的治疗窗、显著的药动学个体差异,尤其是药物联用情况下的初始剂量选择是众多学者关注的问题.CYP3A4显著的表型差异是造成环孢素A药动学差异的主要原因.核受体PXR作为CYP3A4以及P糖蛋白编码基因的上游调控关键因子,其自身基因序列的突变可能是导致下游基因转录活性发生改变的分子机制.因此,从PXR的基因入手,探索环孢素A的最佳初始剂量,将为器官移植患者提供更加准确的治疗方案.

PXR、CAR和PPAR对UGT基因转录的调节

UGT是生物体内重要的Ⅱ相药物代谢酶。孤儿核受体PXR、CAR和PPAR对UGT基因转录起上调作用 ,它们的分布浓度和活性的差异可导致UGT表达和分布的差异。化合物通过核受体调节UGT的表达可能是影响化合物体内代谢的一条重要途径。研究核受体PXR、CAR、PPAR对Ⅱ相代谢酶UGT的调节作用对于新药设计、指导临床合理用药、预测药物相互作用、减少药物不良反应、预防人类疾病都具有重要意义。

核受体PXR和CAR与药物代谢酶及临床疾病的研究进展

孕烷X受体（PXR）和组成型雄甾烷受体（CAR）是核受体超家族的成员。这些核受体因参与多种内源性和外源性物质代谢而被熟知，同时又与多种临床疾病的转归紧密联系，例如癌症、肝脏疾病、炎症性疾病、内分泌性疾病、代谢性疾病。而且目前许多临床疾病所使用的处方药的治疗靶点已被确定为核受体。

核受体PXR在宫颈鳞癌组织及SiHa细胞中的表达及临床意义

目的:探讨核受体孕烷X受体(PXR)在宫颈鳞癌组织的表达及与宫颈鳞癌发生的关系。方法:采用免疫组织化学及细胞免疫化学检测核受体PXR在41例宫颈癌组织及宫颈鳞癌细胞株SiHa中的表达。结果:PXR在宫颈鳞癌细胞株SiHa中有表达;正常宫颈组织有PXR表达,41例宫颈鳞癌组织中PXR的阳性率为59.5%,且宫颈癌组织中明显低表达。结论:PXR的表达水平与宫颈癌的发生有一定的相关性,可能成为今后判断宫颈癌预后有价值的标志物。

别旁茶苷通过PXR/NF-κB信号通路治疗小鼠溃疡性结肠炎机制研究

目的探讨别旁茶苷Jasminoside(SC)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的治疗作用及其机制。方法将小鼠随机分为正常对照组,模型组,柳氮磺胺吡啶(SASP)组和SC高、中、低剂量组。除正常对照组外,其余各组采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)建立小鼠结肠炎的模型,给药治疗7d后取材,显微镜下观察结肠黏膜损伤情况,采用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法测定结肠中α肿瘤坏死因子(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测结肠组织中细胞色素P4503A4酶(CYP3A4)、孕烷X受体(PXR)、TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA表达;采用Western Blot法检测结肠组织中CYP3A4和核转录因子P65(NF-κBP65)表达。结果与正常对照组相比,模型组有明显的病理变化,小鼠结肠黏膜和粘膜下层的多形核细胞浸润情况较严重,出现溃疡和上皮杯状细胞缺失的情况;与TNBS组相比,SASP组和SC各给药组结肠组织的TNF-α、IL-6、IL-1β和TGF-β1的水平及TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA的表达水平均有显著下降,并呈剂量依赖性,SASP和SC组中CYP3A4和PXR的mRNA水平显着上调;与正常对照组相比,TNBS组NF-κBP65蛋白表达显着增加,而SASP组和SC组中NF-κBP65表达下降。结论SC对溃疡性小鼠结肠炎有显著疗效,其可能通过激活PXR、CYP3A,抑制NF-κB的表达,降低炎症因子TNF-α,IL-6、IL-1β和TGF-β1的水平来发挥保护作用。

PXR、MDR1、CYP3A5和CYP2B6在高级别浆液性卵巢癌组织中的表达及其意义

目的探讨孕烷X受体(PXR)、多药耐药蛋白1(MDR1)、细胞色素P4503A5(CYP3A5)和细胞色素P4502B6(CYP2B6)在高级别浆液性卵巢癌(high grade serous ovarian cancer,HGSOC)组织中的表达及其意义。方法选取2019年9月-2021年12月青岛市市立医院妇科收治的56例HGSOC患者作为试验组,据其对铂类药物的耐药情况分为耐药组(24例)和敏感组(32例),另外选取妇科同期收治的16例子宫肌瘤患者作为对照组。采用免疫组织化学、实时定量荧光PCR及蛋白印迹法对试验组患者HGSOC组织和对照组患者正常输卵管组织中PXR、MDR1、CYP3A5和CYP2B6的表达情况进行检测。结果与对照组相比较,试验组患者PXR、MDR1、CYP3A5、CYP2B6阳性表达率显著升高(χ^(2)=12.879~17.174,P<0.05),mRNA相对表达量显著升高(t=9.746~17.640,P<0.05),蛋白表达量显著升高(t=13.312~60.448,P<0.05);与敏感组相比,耐药组患者PXR、MDR1、CYP3A5、CYP2B6阳性表达率显著升高(χ^(2)=4.371~8.549,P<0.05),mRNA相对表达量显著升高(t=6.859~19.000,P<0.05),蛋白表达量显著升高(t=8.693~27.670,P<0.05)。HGSOC患者PXR与CYP3A5、CYP2B6的表达呈正相关(r=0.332、0.308,P<0.05),与MDR1的表达无明显相关性(P>0.05)。结论PXR、MDR1、CYP3A5、CYP2B6在HGSOC患者的肿瘤组织中呈高表达,其可能参与HGSOC的发生发展过程。PXR、MDR1、CYP3A5和CYP2B6的表达检测可用于判断HGSOC对化疗的敏感性,有助于为术后化疗提供指导意见。

基于PKC／NF-κKB／PXR调控网络对卜糖蛋白基因表达的影响及其机制研究

P-糖蛋白（P—gP；ABCB1）是ABC转运体家族重要成员，也是药物在机体内转运的重要载体，参与了药物代谢动力学过程并介导了临床上许多药物相互作用。近年来研究表明P—gP的功能与蛋白激酶C（proteinkinase C，PKC）关系密切。但其分子作用机制尚不明确。

基于报告基因检测的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型的建立

目的建立基于报告基因法的高通量筛选细胞模型,用来发现PXR、FXR和LXRα受体激动剂。方法利用Real-time定量PCR方法比较HEK293、Hep G2和LS174T细胞中内源性核受体PXR、FXR和LXRα的表达量,将p SG5-h PXR和p GL3-XREM-CYP3A4、p EGFP-N3-h FXR和EcRETK-Luc、p CMX-FLAG-h LXRα和p GL3-XREM-CYP3A4等质粒分别共转染到工具细胞中,优化共转染比例,并考察阳性药与萤光素酶报告基因表达强度的量效关系、模型特异性和稳定性。结果 1根据Real-time定量PCR结果,模型选用低表达PXR、FXR和LXRα的HEK293细胞作为工具细胞;2根据不同共转染比例对报告基因活性的结果,PXR、FXR和LXRα报告基因药物筛选模型的报告基因和过表达质粒比例,最终分别选择1∶1、2∶1和2∶1;3模型中,报告基因活性均与相应阳性药物(PXR/Rif、FXR/CDCA和LXRα/T0901317)呈剂量依赖性增长;4仅PXR激动剂Rif、FXR激动剂CDCA和LXRα激动剂T0901317可分别明显增加相应筛选模型的报告基因活性,分别重复5次试验后,计算得Z'值分别为0.58、0.66和0.63。结论该研究建立的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型,具有良好的特异性和稳定性,适用于对PXR、FXR和LXRα受体激动剂的筛选,进而开发以核受体作为药物靶点的药物。

靛玉红衍生物PHⅡ-7通过PXR-CYP3A5/ABCB1信号通路对他克莫司转运及代谢的调节及其作用机制研究

目的探究靛玉红衍生物PHⅡ-7通过激活PXR-CYP3A5/ABCB1信号通路进而影响他克莫司(FK506)转运与代谢的机制。方法本研究以五味子甲素(Sch-A)为阳性对照,大鼠体内实验研究PHⅡ-7对FK506药动学的影响;MTT法检测PHⅡ-7、Sch-A对HepG2和LS174T细胞的IC50值;RT-qPCR和Western blot检测PHⅡ-7、Sch-A对PXR/CYP3A4/3A5/ABCB1信号通路转录和蛋白水平的影响。结果与Sch-A组比较,PHⅡ-7组AUC0-t、CL明显增加(P<0.05);HepG2和LS174T细胞PHⅡ-7的IC50分别为(17.82±1.33)μmol·L^-1和(7.17±0.37)μmol·L^-1,Sch-A的IC50分别为(40.38±4.1)μmol·L^-1和(44.1±1.94)μmol·L^-1;HepG2和LS174T细胞经PHⅡ-7和Sch-A处理后,PXR、CYP3A4/3A5和ABCB1的mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05),且呈剂量与时间依赖性。结论 PHⅡ-7可通过PXR-CYP3A5/ABCB1信号通路调节FK506的转运与代谢,进而增强FK506的体内疗效。

PXR2基因多态性对肾移植术后他克莫司血药浓度和药物服用剂量的影响

目的:探究孕烷受体(pregnane X receptor,PXR)的剪接变体PAR-2(PXR2)启动子区6 bp-deletion基因多态性对肾移植术后他克莫司血药浓度和药物服用剂量(blood concentration and drug dose,C/D)影响,从而指导患者肾移植术后他克莫司的个体化治疗。方法:收集江西省人民医院器官移植科2014年7月至2018年6月73例肾移植患者血液标本,采用Anelic Special-Touch Down PCR法检测PXR2基因多态性分型。记录患者年龄、性别、体重、血红蛋白、总胆红素值及质子泵抑制剂的使用情况。结果:PCR结果显示,73例标本中PXR2纯合子型39例(53.42%),野生型4例(5.48%),杂合子型30例(41.1%)。多元线性回归分析显示,PAR-2启动子区6 bp-deletion基因多态性的基因分型与C/D无明显相关性,差异无统计学意义(P>0.05)。血红蛋白、总胆红素与C/D呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素方差分析显示,纯合子型、野生型、杂合子型3个组别的C/D数值在术后3 d、2周、1个月组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:PXR-2启动子区6 bp-deletion基因多态性对他克莫司C/D无影响,血红蛋白、胆红素水平对他克莫司C/D有影响且呈正相关。

自拟葛花解酒涤脂汤对酒精性脂肪肝小鼠肝脏脂肪沉积及PXR表达的影响

目的了解自拟葛花解酒涤脂汤对酒精性脂肪肝(AFLD)小鼠肝脏脂肪沉积的影响,并观察其对肝组织孕烷受体(PXR)及其调控靶基因CYP3A11、CYP3A25蛋白及mRNA表达的影响。方法将29只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组(5只),模型组(8只),高剂量干预组(8只)、低剂量干预组(8只)。采用美国国立卫生研究院酒精滥用和酒精中毒研究所(NIAAA)方法制备AFLD小鼠模型,分别灌胃给予高、低剂量葛花解酒涤脂汤水煎剂干预,连续9 d。采用酶联免疫吸附法检测血清中谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)水平,组织病理学油红O染色检测肝脏脂肪沉积情况;实时荧光定量PCR及免疫组织化学方法分别检测PXR、CYP3A11、CYP3A25 mRNA及PXR蛋白的表达。结果与模型组比较,干预组小鼠肝脏脂肪沉积显著减轻,呈剂量依赖性,具有比模型组和正常组显著增加的PXR、CYP3A25表达水平(P<0.01);模型组小鼠血清ALT水平显著增加(P<0.01),其余各组相似;各组CYP3A11mRNA转录水平差异无显著性(P≥0.05)。结论自拟葛花解酒涤脂汤对实验小鼠AFLD具有明显的治疗作用,可能与促进PXR及其靶基因CYP3A25表达有关。

CYP3A65及上游核受体基因PXR和AHR2在斑马鱼生长发育阶段的表达

为了选择处于最佳生长阶段的斑马鱼用于药物代谢研究,本实验考察不同生长阶段斑马鱼全鱼、肝脏和肠道组织中CYP3A65及其上游核受体基因(PXR、AHR2)mRNA表达水平的变化规律。实验测定CYP3A65、PXR和AHR2相对表达量,并通过比较核受体基因与代谢酶基因mRNA之间的相关性来证实核受体基因的调控作用。结果显示,144 hpf和75 dpf两个生长阶段的斑马鱼中CYP3A65、PXR和AHR2 mRNA表达量最高;斑马鱼生长阶段中代谢酶基因和核受体基因的表达趋势一致,且受肝脏、肠道组织占全鱼比重的影响。研究表明,幼鱼期144 hpf斑马鱼及稚鱼期75 dpf的斑马鱼最适用于CYP3A65代谢研究;CYP3A65与PXR、CYP3A65与AHR2的mRNA表达之间有显著的相关性,与AHR2的相关性更显著。

核受体PXR与耐药相关基因在结肠癌中的表达及意义

目的检测核受体PXR和耐药相关基因在人结肠癌中表达,初步探讨其相互关系在肿瘤免疫和肿瘤耐药中意义。方法分别用RT-PCR和western blot方法检测PXR、MRP2、MRP3、ABCG2、MDR1和CYP3A4在17例结肠癌组织中的表达,并进行半定量统计分析。结果与相应正常组织相比,结肠癌组织中PXR、MRP2和MRP3 mRNA水平和蛋白水平均显著增强(P<0.05)。而结肠癌组织中ABCG2、MDR1和CYP3A4 mRNA水平与相应正常组织相比没有显著差异。在癌组织和正常组织中,MRP3 mRNA水平与PXR mRNA水平呈正相关性(P<0.05)。结论 PXR、MRP2和MRP3可能在结肠癌耐药中具有重要作用,PXR调控MRP3表达可能涉及其耐药机制。