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SOX7基因慢病毒载体的构建及其在缺氧条件下对HUVECs增殖与迁移功能的影响
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作者 吴逸卓 黄俊鑫 +1 位作者 丁晓维 于昱 《新疆医科大学学报》 CAS 2024年第4期494-499,505,共7页
目的构建过表达SRY-box transcription factor 7(SOX7)基因的慢病毒载体,建立SOX7基因过表达的人脐静脉内皮细胞株(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),并在常氧和缺氧条件下探究过表达SOX7对HUVECs迁移和增殖能力的影响... 目的构建过表达SRY-box transcription factor 7(SOX7)基因的慢病毒载体,建立SOX7基因过表达的人脐静脉内皮细胞株(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),并在常氧和缺氧条件下探究过表达SOX7对HUVECs迁移和增殖能力的影响。方法使用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)技术扩增SOX7基因,通过同源重组法构建以pHAGE-CMV-MCS-IRES-ZsGreen为载体的SOX7-pHAGE重组质粒。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)和免疫印迹(Western blot)法检测目的基因的mRNA和蛋白表达。将SOX7-pHAGE重组质粒和包装质粒共转染293T细胞,获得含有SOX7-pHAGE慢病毒悬液,经浓缩后感染HUVECs,构建SOX7稳定感染细胞株。应用qPCR和Western blot技术检测SOX7基因的mRNA和蛋白的表达。在常氧及缺氧条件下,通过细胞划痕实验和CCK-8法检测过表达SOX7对HUVECs迁移和增殖能力的影响。结果SOX7-pHAGE重组质粒经测序后,序列比对正确。qPCR和Western blot法成功检测出SOX7-pHAGE重组质粒转染的293T细胞在mRNA水平过表达约111.4倍(P=0.0028),在蛋白质水平上出现过表达条带;qPCR和Western blot技术成功检测到SOX7-pHAGE慢病毒感染的HUVECs在mRNA水平上显著升高约68.2倍(P=0.0030),在蛋白水平上显著升高约1.7倍(P=0.0043),SOX7-pHAGE重组质粒及SOX7稳定感染细胞株构建成功。在常氧条件下,SOX7稳定感染细胞株的迁移能力没有发生改变(P>0.9999),而在缺氧条件下其迁移能力增强约1.2倍(P=0.0044)。在常氧条件下,SOX7稳定感染细胞株的增殖能力增强约1.3倍(P=0.0087),在缺氧条件下其增殖能力也显著增强约1.4倍(P=0.0228)。结论SOX7稳定感染细胞株可促进HUVECs的增殖能力。在缺氧条件下,SOX7稳定感染细胞株可回补HUVECs被抑制的迁移和增殖能力。 展开更多
关键词 SOX7 重组慢病毒载体 人脐静脉内皮细胞 增殖 迁移
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甲基转移酶SETDB1和SOX7甲基化在口腔癌中的相关性研究 被引量:2
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作者 郝妍 白相宇 +1 位作者 霍峰 陈喜波 《河北医药》 CAS 2023年第16期2435-2439,共5页
目的检测口腔癌中SETDB1表达与SOX7甲基化水平,分析二者相关性及临床意义。方法收集口腔癌和癌旁组织,焦磷酸测序法检测SOX7基因甲基化水平,RT-qPCR检测SOX7和SETDB1 mRNA的表达,免疫组化及Western blot检测蛋白表达。统计分析SOX7甲基... 目的检测口腔癌中SETDB1表达与SOX7甲基化水平,分析二者相关性及临床意义。方法收集口腔癌和癌旁组织,焦磷酸测序法检测SOX7基因甲基化水平,RT-qPCR检测SOX7和SETDB1 mRNA的表达,免疫组化及Western blot检测蛋白表达。统计分析SOX7甲基化水平与SETDB1相关性及其与临床病例特征的相关性。构建SETDB1下调siRNA转染口腔癌KB细胞,设siRNA-SETDB1为实验组(si-SET)、siRNA空载体为阴性对照组(si-N)和未转染KB细胞为空白对照组(NC)。检测3组SETDB1 mRNA和蛋白水平及SOX7甲基化。结果口腔癌组织SOX7基因甲基化率高于癌旁组织,SOX7 mRNA相对表达量低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。癌组织中SETDB1 mRNA相对表达量高于癌旁组织(P<0.05);免疫组化结果显示癌组织SOX7蛋白表达阳性率SETDB1蛋白表达阳性率高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western Blot结果显示SETDB1在癌组织中表达高于癌旁组织,SOX7在癌组织中表达低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05);口腔癌组织中SOX7甲基化和SETDB1具有相关性(r=0.324,P<0.05);SOX7甲基化和SETDB1与肿瘤TNM分期、组织分化和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。体外实验显示,RNA干扰SETDB1后si-RNA组中SETDB1 mRNA和蛋白表达量最低(P<0.05),SOX7基因甲基化率显著下降(P<0.05)。结论在口腔癌病变过程中SETDB1与SOX7基因甲基化具有相关性,SETDB1可能是催化SOX7发生甲基化修饰的重要甲基化转移酶,在口腔早期病变诊治中具潜在价值。 展开更多
关键词 甲基转移酶 SETDB1 SOX7 甲基化 口腔癌
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Paired box proteins as diagnostic biomarkers for endocervical adenocarcinoma
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作者 Jia-Hui Zhou Xiang-Ning Zhang 《World Journal of Clinical Cases》 SCIE 2024年第26期5854-5858,共5页
In this editorial,we commented on the article by Akers et al published in the recent issue of the World Journal of Clinical Cases.We focused specifically on the role of the transcription factor paired box protein 8(PA... In this editorial,we commented on the article by Akers et al published in the recent issue of the World Journal of Clinical Cases.We focused specifically on the role of the transcription factor paired box protein 8(PAX8)belonging to the family PAX in the carcinogenesis of a gynecologic tumor,endocervical adenocarcinoma,arising from the tissue of mesonephric origin,and the potential diagnostic value for the same type of neoplasms.The global vaccination program of human papillomavirus(HPV)has dramatically reduced the incidence of cervical cancer,including cases of adenocarcinoma.The type of adenoid epithelial origin has a lower frequency of HPV detection but tends to be more aggressive and fatal.Cases of endocervical adenocarcinoma occurring in females of menopause age have been described in the 2023 volume of the World Journal of Clinical Cases and in our study recently published in Oncol Lett.The histopathological findings and immunohistochemical assays showed that the lesions had glandular morphology,and the specimens in these two reports were immunohistochemically positive for the transcription factor PAX8,albeit that they had opposing expression profiles of tumor suppressor p16 and estrogen receptor and the presence of the HPV genome.The presence of a mucin protein,MUC 5AC,as revealed in both studies suggested target molecules for the diagnosis of mucinous adenoid type of uterine tumor and other histological origins.The clinical outcome was unfavorable due to metastasis and recurrence.This prompted the improvement of the antitumor modality,with the introduction of precise targeting therapy.Mucin has now been reported to be the therapeutic target for adenocarcinomas. 展开更多
关键词 Cervical adenocarcinoma Diagnostic biomarker paired box protein 8 Embryogenesis transcription factor
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促甲状腺激素受体与TTF-1、Pax-8在甲状腺乳头状癌中的表达及意义 被引量:3
4
作者 柳林 王丽哲 +2 位作者 张永庆 李如江 庄宝祥 《中国医院统计》 2020年第4期322-325,共4页
目的探讨促甲状腺激素受体(TSHR)、甲状腺特异性转录因子-1(TTF-1)、成框基因8编码的转录因子(Pax-8)在甲状腺乳头状癌(PTC)、桥本氏病(HT)合并甲状腺乳头状癌、结节性甲状腺肿(NG)与正常甲状腺组织中的表达及意义。方法收集2018年9月至... 目的探讨促甲状腺激素受体(TSHR)、甲状腺特异性转录因子-1(TTF-1)、成框基因8编码的转录因子(Pax-8)在甲状腺乳头状癌(PTC)、桥本氏病(HT)合并甲状腺乳头状癌、结节性甲状腺肿(NG)与正常甲状腺组织中的表达及意义。方法收集2018年9月至2019年6月在某院内分泌科确诊并在甲状腺外科行手术治疗的甲状腺组织,包括单纯PTC 16例、HT合并PTC 24例,NG 32例及癌旁正常甲状腺组织40例。将术中获得的甲状腺组织进行脱水、透明、包埋处理,分别行TSHR、TTF-1、Pax-8的免疫组织化学染色,显微镜下观察染色结果。采用χ^2检验进行多组间率的比较,差别有统计学意义时采用χ^2分割做两两比较。结果1)TSHR、TTF-1在甲状腺组织的强阳性表达在4组间的差别均有统计学意义(P<0.001,P=0.004),Pax-8在甲状腺组织的强阳性表达在4组间的差别无统计学意义(P=0.642)。2)调整检验水准α′=0.008,进一步两两比较发现:TSHR在PTC组的强阳性表达低于在NG组与癌旁正常组织(P<0.001,P=0.002),在HT合并PTC组的强阳性表达低于在NG组(P=0.001),TTF-1在HT合并PTC组的强阳性表达低于在NG组(P=0.002);其他组两两比较均无统计学意义(P>0.008)。3)在全部PTC组织中,TSHR、TTF-1的阳性表达与性别、年龄、肿瘤直径、淋巴结转移等均无关;Pax-8的阳性表达在有淋巴结转移者低于无淋巴结转移者(P=0.030),与性别、年龄、肿瘤直径无关。结论TSHR与TTF-1在PTC中的强阳性表达低于NG和癌旁正常甲状腺组织,Pax-8在不同类型甲状腺组织中表达无差别。Pax-8在PTC组织中的低表达易出现淋巴结转移。 展开更多
关键词 甲状腺乳头状癌 自身免疫性甲状腺疾病 促甲状腺激素受体 甲状腺特异性转录因子-1 成框基因8编码的转录因子
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miR-452-5p靶向SOX7促进食管癌KYSE-150细胞增殖、侵袭及EMT 被引量:4
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作者 尹情 韩俊淑 +5 位作者 董稚明 郭炜 沈素朋 梁佳 路军涛 郭艳丽 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期294-300,共7页
目的:检测miR-452-5p在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达,并探讨其异常表达对食管癌KYSE-150细胞增殖、侵袭能力和EMT进程的影响及其分子机制。方法:收集2012年3月至2015年12月在河北医科大学第四医院就诊的86名ESCC患者的癌组织样本和对... 目的:检测miR-452-5p在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达,并探讨其异常表达对食管癌KYSE-150细胞增殖、侵袭能力和EMT进程的影响及其分子机制。方法:收集2012年3月至2015年12月在河北医科大学第四医院就诊的86名ESCC患者的癌组织样本和对应的癌旁组织,用qPCR法检测miR-452-5p及其他相关基因在ESCC组织和细胞中的表达;向KYSE-150细胞中分别转染miR-452-5p mimic或pcDNA3.1-SOX7构建过表达的细胞株。分析miR-452-5p表达与ESCC病理特征和患者5年OS的关系。用MTS、Tanswell法检测miR-452-5p过表达对食管癌KYSE-150细胞增殖、侵袭能力和EMT进程的影响;用双荧光素酶报告基因实验及TOP/FOP报告基因系统检测miR-452-5p与SRY盒转录因子(SOX7)3’UTR区的结合作用及对Wnt/β-catenin通路活化水平的影响。结果:miR-452-5p在ESCC组织中呈明显高表达(P<0.01),并与ESCC患者的淋巴结转移、TNM分期及5年OS密切相关(均P<0.01)。miR-452-5p过表达明显促进食管癌KYSE-150细胞的增殖、侵袭能力及EMT进程(P<0.05或P<0.01)。SOX7是miR-452-5p的直接靶基因,miR-452-5p通过对SOX7的负向调控影响了Wnt通路活化水平(P<0.05或P<0.01),同时,miR-452-5p表达也受Wnt通路活化水平的影响(P<0.05或P<0.01),其可能为Wnt通路下游靶基因。结论:miR-452-5p通过miR-452-5p/SOX7/Wnt/miR-452-5p正反馈环路提高Wnt/β-catenin通路活化水平,进而促进ESCC KYSE-150细胞的增殖、侵袭能力及EMT进程,miR-452-5p有望成为ESCC患者靶向治疗的潜在靶点及预后评估的新型分子标志物。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 KYSE-150细胞 miR-452-5p SRY盒转录因子7 WNT/Β-CATENIN信号通路
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转录因子SOX7调控血管发育的研究进展
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作者 李宝雷 洪楠超 +2 位作者 孙锟 于昱 陈笋 《医学综述》 2018年第19期3750-3755,共6页
血管形成是胚胎发育期间的最早进程之一,其对胚胎的正常生长发育非常重要。血管形成和发育进程受一系列基因、转录因子、信号通路等调控。转录因子SOX7(SRY related high mobility group box 7)在调控心血管系统的发育、内皮细胞向造血... 血管形成是胚胎发育期间的最早进程之一,其对胚胎的正常生长发育非常重要。血管形成和发育进程受一系列基因、转录因子、信号通路等调控。转录因子SOX7(SRY related high mobility group box 7)在调控心血管系统的发育、内皮细胞向造血细胞转化、动静脉分化等进程中发挥重要作用。其特异性高水平地表达于胚胎的心血管组织,提示其参与调控心血管的形成与发育。SOX7与众多参与调控血管内皮细胞的转录因子存在调节关系,其可通过抑制RUNX1的转录活性,抑制内皮细胞向造血细胞转化。Notch信号通路是调控血管发育和动静脉血管分化的关键通路,SOX7很可能作用于Notch信号通路上游,参与调控动脉和静脉血管的分化。但其调控血管发育的确切分子机制未来需进一步研究。 展开更多
关键词 SOX7 血管发育 表达模式 转录因子 NOTCH信号通路
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宫颈癌组织中Pax1、LMX1A表达及其与临床病理特征和预后的关系 被引量:4
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作者 刘皓 杨雯 +2 位作者 谭学贤 孙斌 熊汉真 《山东医药》 CAS 2023年第4期6-10,共5页
目的探讨宫颈癌组织配对盒基因1(Pax1)、LIM同源框转录因子1A(LMX1A)蛋白表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法选择103例均行宫颈癌根治术治疗的宫颈癌患者作为研究对象,收集宫颈癌根治术中切除的宫颈癌组织及相应癌旁组织,采用免... 目的探讨宫颈癌组织配对盒基因1(Pax1)、LIM同源框转录因子1A(LMX1A)蛋白表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法选择103例均行宫颈癌根治术治疗的宫颈癌患者作为研究对象,收集宫颈癌根治术中切除的宫颈癌组织及相应癌旁组织,采用免疫组化法检测宫颈癌组织和癌旁组织中Pax1、LMX1A蛋白表达。分析Pax1、LMX1A蛋白表达与患者临床病理特征及预后的关系,采用单因素及多因素Cox比例风险回归分析影响宫颈癌患者预后的因素。结果宫颈癌组织中Pax1、LMX1A表达阳性率低于癌旁组织(P均<0.05)。Pax1和LMX1A蛋白表达与TNM分期和淋巴结转移有关(P均<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,Pax1和LMX1A表达阴性患者的5年生存率下降(P均<0.05)。TNM分期Ⅲ期、Pax1表达阳性和LMX1A表达阳性及有淋巴结转移是影响宫颈癌患者预后的因素(P均<0.05)。结论宫颈癌组织中Pax1和LMX1A表达下降,且Pax1和LMX1A表达与患者临床病理分期、淋巴结转移及预后有关。 展开更多
关键词 宫颈癌 配对盒基因1 LIM同源框转录因子1A 生存 预后 TNM分期 淋巴结转移
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针刺对穴“迎香-合谷”对变应性鼻炎大鼠Th1、Th2细胞因子及转录因子T-bet/GATA-3的影响 被引量:3
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作者 胡情 苏嘉琪 +6 位作者 楼金成 苗镡允 尹浩 吉美奇 翟春涛 郝重耀 吕玉娥 《海南医学院学报》 2023年第15期1135-1143,共9页
目的:探讨“迎香-合谷”对穴对过敏性鼻炎大鼠Th1、Th2相关细胞因子及转录因子T-bet、GATA-3的影响。方法:大鼠随机分成空白组、模型组、对穴组3组。建立卵清蛋白(OVA)AR大鼠模型,观察大鼠一般情况并进行行为学评分,造模成功后第2天开... 目的:探讨“迎香-合谷”对穴对过敏性鼻炎大鼠Th1、Th2相关细胞因子及转录因子T-bet、GATA-3的影响。方法:大鼠随机分成空白组、模型组、对穴组3组。建立卵清蛋白(OVA)AR大鼠模型,观察大鼠一般情况并进行行为学评分,造模成功后第2天开始对对穴组行针刺干预,1次/d,20 min/次,共10 d。干预结束后观察大鼠一般行为、行为学评分及鼻黏膜组织形态学改变,鼻腔灌洗液涂片染色后镜检计数嗜酸性粒细胞(EOS),ELISA检测大鼠血清总IgE、IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-5含量,Western blot法和免疫组化法(IHC)检测大鼠鼻黏膜组织特异性转录因子T-bet、GATA-3蛋白水平和阳性蛋白的表达情况。结果:造模后,除空白组外,模型组、对穴组大鼠行为学观察评分均大于5分,提示造模成功。针刺对穴“迎香-合谷”干预后,对穴组、西药组大鼠行为学评分较模型组明显下降(P<0.05)。镜检示模型组鼻黏膜结构明显破坏,纤毛排列不连续,参差不齐,局部充血肿胀,上皮细胞大量脱落坏死,杯状细胞增生,有明显炎症细胞浸润。对穴组鼻黏膜病理程度较模型组明显减轻。与模型组比较,经对穴针刺干预后大鼠血清中的IFN-γ、IL-2、IL-12明显升高(P<0.05),而IgE、IL-4、IL-5、IL-6明显降低(P<0.05),鼻黏膜GATA-3蛋白及阳性表达明显降低,T-bet明显升高(P<0.05)。结论:针刺对穴“迎香-合谷”能有效改善AR大鼠鼻部敏感症状、达到控制鼻部炎症的目的,其机制可能是针刺对穴干预后上调了T-bet的表达,降低GATA-3水平,并促进Th1型细胞因子的生成,抑制Th2细胞的合成与分泌,从而使Th1、Th2恢复免疫平衡状态。 展开更多
关键词 变应性鼻炎 对穴 “迎香”穴 “合谷”穴 辅助性T细胞 细胞因子 GATA结合蛋白3 T盒子转录因子
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PAX基因与子宫内膜癌的相关性研究
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作者 王琳 孙琳 +2 位作者 董燕 陈亚慧 王亚楠 《中国医药科学》 2023年第3期51-54,86,共5页
子宫内膜癌是妇科常见的恶性肿瘤之一,虽然病死率在妇科恶性肿瘤中较低,但部分复发或晚期肿瘤(Ⅲ、Ⅳ期)患者预后仍较差,威胁女性患者的生命。Paired box(PAX)基因在正常表达的组织中扮演着细胞系特异性调控者的角色,其通过参与调节肿... 子宫内膜癌是妇科常见的恶性肿瘤之一,虽然病死率在妇科恶性肿瘤中较低,但部分复发或晚期肿瘤(Ⅲ、Ⅳ期)患者预后仍较差,威胁女性患者的生命。Paired box(PAX)基因在正常表达的组织中扮演着细胞系特异性调控者的角色,其通过参与调节肿瘤细胞增殖、分化、迁移、凋亡等过程影响肿瘤的发生、发展。随着对肿瘤研究的深入,越来越多的研究开始探索PAX基因在癌症发展中的作用机制,本文就PAX基因与子宫内膜癌的相关性研究予以综述。 展开更多
关键词 paired box基因 转录因子 肿瘤 子宫内膜癌
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Effect of acupuncture on acupoint "Yingxiang-Hegu" on Th1, Th2 cytokines and T-bet/GATA-3 of allergic rhinitis rats
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作者 Hu Qing Su Jia-qi +6 位作者 Lou Jin-cheng Miao Tan-yun Yin Hao Ji Mei-qi Zhai Chun-tao Hao Zhong-yao Lu Yu-e 《Journal of Hainan Medical University》 CAS 2023年第15期14-22,共9页
Objective:To explore the effect of"Yingxiang-Hegu"on Th1,Th2-related cytokines and[2]transcription factors T-bet and GATA-3 in rats with allergic rhinitis.Methods:Rats were randomly divided into three groups... Objective:To explore the effect of"Yingxiang-Hegu"on Th1,Th2-related cytokines and[2]transcription factors T-bet and GATA-3 in rats with allergic rhinitis.Methods:Rats were randomly divided into three groups:blank group,model group and acupoint group.The rat model of ovalbumin(OVA)AR was established,and the general condition of the rats was observed and scored.Acupuncture intervention was performed on the acupoint group on the second day after successful modeling,once per day for 20 min for 10 d.After intervention,the general behavior,behavioral score and histomorphological changes of nasal mucosa were observed.Eosinophils(EOS)were counted under microscope after nasal lavage smear staining,and the contents of total IgE,IFN-γ,IL-12,IL-4 and IL-5 in serum were detected by ELISA.Westernblot and IHC were used to detect the protein level and positive protein expression of specific transcription factors T-bet and GATA-3 in rat nasal mucosa.Results:After the establishment of the model,except for the blank group,the behavioral observation scores of rats in the model group and acupoint group were more than 5 points,indicating that the model was successful.After acupuncture intervention on acupoint"Yingxiang-Hegu",the behavioral score of rats in the acupoint group and western medicine group was significantly lower than that in the model group(P<0.05).Microscopic examination showed that the structure of nasal mucosa in the model group was obviously damaged,cilia were arranged discontinuously,uneven,local congestion and swelling,a large number of epithelial cells exfoliated and necrotic,goblet cell proliferation,obvious inflammatory cell infiltration.The pathological degree of nasal mucosa in the pair point group was significantly less than that in the model group.Compared with the model group,the levels of IFN-γ,IL-2 and IL-12 in serum were significantly increased,while IgE,IL-4,IL-5 and IL-6 were significantly decreased,GATA-3 protein and positive expression in nasal mucosa were significantly decreased and T-bet was significantly increased after acupuncture.Conclusion:Acupuncture at"Yingxiang-Hegu"can effectively improve the nasal sensitive symptoms and control nasal inflammation in AR rats.The mechanism may be that acupuncture at Yingxiang-Hegu can up-regulate the expression of T-bet,decrease the level of GATA-3,promote the production of Th1 cytokines and inhibit the synthesis and secretion of Th2 cells,thus restoring the immune balance of Th1 and Th2. 展开更多
关键词 Allergic rhinitis paired points "Yingxiang"acupoint "Hegu"acupoint Helper T cells CYTOKINES GATA binding protein 3 T box transcription factor
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PAX3基因沉默对P19细胞向心肌样细胞分化的影响及其机制
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作者 万朝辉 曾良 +1 位作者 李晶 雷长城 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期647-655,共9页
目的:探讨配对盒转录因子3(PAX3)基因沉默对P19细胞向心肌样细胞分化的影响,并阐明其可能作用机制。方法:采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌样细胞分化,观察诱导分化过程中细胞形态表现,并收集诱导分化第0天(0d组)和第10天(10 d组... 目的:探讨配对盒转录因子3(PAX3)基因沉默对P19细胞向心肌样细胞分化的影响,并阐明其可能作用机制。方法:采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌样细胞分化,观察诱导分化过程中细胞形态表现,并收集诱导分化第0天(0d组)和第10天(10 d组)的细胞。采用shPAX3慢病毒感染P19细胞,将细胞分为对照组、sh-NC组(阴性对照)和sh-PAX3组(PAX3干扰),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测PAX3基因沉默的P19细胞构建情况。采用Notch信号激动剂Jagged1处理慢病毒感染后的P19细胞,并采用DMSO诱导分化10 d,将细胞分为DMSO组、DMSO+sh-NC组、DMSO+sh-PAX3组、DMSO+Jagged1组和DMSO+sh-PAX3+Jagged1组。RT-qPCR法检测各组细胞中GATA结合蛋白4(GATA4)、心房利钠尿多肽(ANP)、心肌肌钙蛋白(cTn)T、PAX3、Notch1、Notch胞内结构域(NICD)及Hes家族bHLH转录因子1(Hes1)mRNA表达水平。Western blotting法检测各组细胞中PAX3、Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平。免疫荧光染色法检测各组细胞中cTnI阳性表达情况和心肌样细胞分化率。结果:诱导分化第10天,可观察到自发性节律收缩的心肌样细胞簇。RT-qPCR和Western blotting法检测,慢病毒感染后,与对照组和sh-NC组比较,sh-PAX3组P19细胞中PAX3 mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05),表明PAX3基因沉默的P19细胞构建成功。RT-qPCR法检测,与0d组比较,10 d组细胞中GATA4、ANP和cTnT mRNA表达水平均升高(P<0.05),PAX3、Notch1、NICD和Hes1 mRNA表达水平均升高(P<0.05);与DMSO组和DMSO+sh-NC组比较,DMSO+sh-PAX3组细胞中GATA4、ANP和cTnT mRNA表达水平均降低(P<0.05),DMSO+Jagged1组细胞中GATA4、ANP和cTnT mRNA表达水平均升高(P<0.05);与DMSO+sh-PAX3组比较,DMSO+shPAX3+Jagged1组细胞中GATA4、ANP和cTnT mRNA表达水平均升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与0d组比较,10 d组细胞中PAX3、Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平均升高(P<0.05);与DMSO组和DMSO+sh-NC组比较,DMSO+sh-PAX3组细胞中Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平均降低(P<0.05),DMSO+Jagged1组细胞中Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平均升高(P<0.05);与DMSO+sh-PAX3组比较,DMSO+sh-PAX3+Jagged1组细胞中Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平均升高(P<0.05)。免疫荧光法检测,慢病毒感染后,各组细胞中均有cTnI蛋白阳性表达,与DMSO组和DMSO+sh-NC组比较,DMSO+sh-PAX3组细胞中cTnI蛋白阳性表达减少,心肌样细胞分化率降低(P<0.05);与DMSO组和DMSO+sh-NC组比较,DMSO+Jagged1组细胞中cTnI蛋白阳性表达增加,心肌样细胞分化率升高(P<0.05);与DMSO+sh-PAX3组比较,DMSO+sh-PAX3+Jagged1组细胞中cTnI蛋白阳性表达增加,心肌样细胞分化率升高(P<0.05)。结论:PAX3基因沉默可抑制P19细胞向心肌样细胞分化,其机制可能是通过降低PAX3基因表达抑制Notch信号通路活化实现的。 展开更多
关键词 P19细胞 配对盒转录因子3 NOTCH信号通路 心肌样细胞
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电针血清对多裂肌卫星细胞增殖及Pax-7、成肌分化抗原、磷酸化蛋白激酶B表达的影响 被引量:21
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作者 刘通 于佳妮 +5 位作者 邹德辉 陈玉佩 卢宗孝 晏珺 张莉 霍则军 《针刺研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期402-409,共8页
目的:观察电针血清对大鼠多裂肌卫星细胞增殖及Pax-7、成肌分化抗原(MyoD)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达的影响,从血清学角度探讨电针促进多裂肌损伤修复的部分作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针委中组、电针肾俞... 目的:观察电针血清对大鼠多裂肌卫星细胞增殖及Pax-7、成肌分化抗原(MyoD)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达的影响,从血清学角度探讨电针促进多裂肌损伤修复的部分作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针委中组、电针肾俞组,每组各8只,采用0.5%布比卡因肌肉注射复制多裂肌损伤模型,各电针组分别选取"委中"穴、"肾俞"穴进行电针治疗,每日1次,每次20min,4d后收集血清。原代培养大鼠腰多裂肌卫星细胞并进行鉴定,随机分为正常血清组、模型血清组、电针委中血清组、电针委中血清+LY 294002组、电针肾俞血清组、电针肾俞血清+LY 294002组,分别以各组血清培养24h,CCK-8、EdU法观察肌卫星细胞的增殖,Western blot法检测肌卫星细胞Pax-7、MyoD、p-Akt蛋白表达。结果:与正常血清组相比,模型血清组多裂肌卫星细胞增殖速度明显加快(P<0.01),两电针血清组又高于模型血清组(P<0.01)。与正常血清组相比,模型血清组MyoD、p-Akt表达明显升高(P<0.05),两电针血清组高于模型血清组(P<0.05,P<0.01)。与电针血清组相比,加LY 294002后,细胞增殖速度及MyoD、p-Akt表达均显著下降(P<0.01,P<0.05)。各组之间Pax-7蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:电针"委中"血清和电针"肾俞"血清均可通过磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B通路促进肌卫星细胞的增殖,且有促进成肌分化的趋势。 展开更多
关键词 电针血清 多裂肌卫星细胞 pax-7 成肌分化抗原 蛋白激酶B
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中国一先天性无虹膜家系PAX6基因新致病突变位点的筛查及验证 被引量:1
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作者 刘宇莹 刘琼 +3 位作者 万文苹 杨鸽 夏昆 金学民 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期602-606,共5页
背景先天性无虹膜是临床上罕见的先天性遗传性眼病。研究显示,配对盒转录因子6基因(PAX6)与先天性无虹膜症密切相关,但不同患者中PAX6基因的突变位点不同。目的对中国一常染色体显性遗传先天性无虹膜家系进行PAX6基因突变位点分析... 背景先天性无虹膜是临床上罕见的先天性遗传性眼病。研究显示,配对盒转录因子6基因(PAX6)与先天性无虹膜症密切相关,但不同患者中PAX6基因的突变位点不同。目的对中国一常染色体显性遗传先天性无虹膜家系进行PAX6基因突变位点分析。方法于2014年8月在郑州大学第一附属医院收集一汉族先天性无虹膜家系,采集该家系9名成员及同期100名健康体检者的外周静脉血10ml,采用标准酚一氯仿提取法提取基因组DNA,对PCR扩增产物进行测序、对比及突变分析。采用实时荧光定量PCR法验证和比较该家系中患病者与该家系表型正常者和健康对照者淋巴细胞中PAX6mRNA的相对含量。结果该家系共3代9名成员,遗传方式符合常染色体显性遗传。家系中共5例患病者,成年患病者均表现为虹膜缺失和白内障,儿童患病者表现为无虹膜;其他4名家系成员表型正常。测序结果显示,家系患病者均存在11号染色体PAX6基因10号外显子的移码突变,第796位核糖核苷酸G缺失(C.796delG),产生提前终止密码子,而家系正常成员及100名对照者均无此突变。实时荧光定量PCR结果显示,家系中患病者淋巴细胞中PAX6mRNA表达水平比家系中正常成员约低50%,差异有统计学意义(Z=-2.449,P=0.016)。结论PAX6基因C.796delG为此先天性无虹膜家系的致病突变位点,扩增了PAX6基因突变谱。 展开更多
关键词 先天性无虹膜/遗传性 人类第11号染色体/基因 配对盒转录因子/基因 碱基序列 码突变 家系 中国人/基因
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慢病毒载体Pax6-EGFP构建及转染人骨髓间充质干细胞
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作者 刘静雯 任静 +3 位作者 陈胜 李柏军 刘身文 秦波 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第36期5338-5344,共7页
背景:Pax6基因是影响眼发育、分化的关键基因,获得过表达Pax6基因的稳定细胞株是研究其对骨髓间充质干细胞分化作用的首要任务,也是干细胞替代治疗的研究基础。目的:构建重组慢病毒载体Pax6-EGFP,体外转染人骨髓间充质干细胞,检测Pax6... 背景:Pax6基因是影响眼发育、分化的关键基因,获得过表达Pax6基因的稳定细胞株是研究其对骨髓间充质干细胞分化作用的首要任务,也是干细胞替代治疗的研究基础。目的:构建重组慢病毒载体Pax6-EGFP,体外转染人骨髓间充质干细胞,检测Pax6基因在人骨髓间充质干细胞中的表达情况。方法:利用PCR法从人Pax6 cD NA基因克隆载体p GEM-PAX6上扩增Pax6目的片段,将其与XbaⅠ和BamHⅠ双酶切的慢病毒载体pH IV-EGFP连接,转化感受态细胞DH5α,挑取阳性克隆提取质粒,测序鉴定。经293T细胞包装后,收集含病毒颗粒的上清液,体外转染人骨髓间充质干细胞,同时设立阴性对照组(p HIV-EGFP空载体)。荧光显微镜下观察转染是否成功,Real time PCR检测转染细胞Pax6基因的表达。结果与结论:(1)酶切电泳及基因测序证实携带Pax6基因的慢病毒载体构建成功,包装后获得滴度为3×109 pfu/L的Pax6-EGFP重组载体;(2)转染人骨髓间充质干细胞后,在荧光显微镜下可以发出绿色荧光,且荧光强度不随培养时间延长而衰退;(3)经Real time PCR检测,被转染细胞内有Pax6基因表达,表明慢病毒转染是一种安全高效的基因修饰手段,能够使外源基因整合到宿主细胞基因组中。 展开更多
关键词 骨髓 间质干细胞 成对盒转录因子类 慢病毒属 转染 绿色荧光蛋白质类 组织工程 干细胞 骨髓干细胞 骨髓间充质干细胞 过表达 PAX6基因 慢病毒 基因转染 绿色荧光蛋白
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中国一先天性无虹膜家系的遗传分析及PAX6基因突变位点的检测 被引量:4
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作者 张陆希 杨鸽 +3 位作者 贾竞 万文萃 杨鑫 金学民 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期721-725,共5页
背景先天性无虹膜是双眼发病的遗传性疾病,目前的研究表明先天性无虹膜患者配对盒转录因子6(PAX6)基因突变位点具有多样性。目的通过目标序列捕获测序结合一代测序验证技术对1个中国先天性无虹膜家系进行基因突变位点的筛查和遗传分... 背景先天性无虹膜是双眼发病的遗传性疾病,目前的研究表明先天性无虹膜患者配对盒转录因子6(PAX6)基因突变位点具有多样性。目的通过目标序列捕获测序结合一代测序验证技术对1个中国先天性无虹膜家系进行基因突变位点的筛查和遗传分析。方法采用横断面研究方法,本研究组于2016年3月纳入在郑州大学第一附属医院确诊的1个中国汉族先天性无虹膜家系,并对该家系成员进行致病突变基因检测。该家系全体成员均接受神经系统、口服葡萄糖耐量试验等全身体格检查以及眼科相关检查。采集现存家系所有成员前臂静脉血10ml以提取基因组DNA,以先证者基因组DNA为模板行前房角发育异常致病基因的目标基因定点捕获测序分析,经与各基因库比对筛选出候选致病基因位点,采用PCR法对该家系成员行致病基因位点DNA片段扩增,采用Sanger测序技术在该家系除先证者以外的2例患病者和表型正常成员中进行候选致病基因验证。结果该家系共3代9名成员,I1去世,现存8位成员,包括患病者3例(112及其子代Ⅲ1、Ⅲ2)和表型正常者5人,符合常染色体显性遗传模式。所有家系成员未发现神经系统异常,口服葡萄糖耐量试验结果均呈阴性。3例患病者视力均明显下降且不能矫正,眼压平均值为21mmHg(1mmHg=0.133kPa),患者均存在虹膜完全缺如、角膜基质层混浊、眼球水平震颤、黄斑中心凹发育不良症状。此外,Ⅱ2患者存在左眼上睑下垂、右眼先天性白内障表现,Ⅲ2同时存在双眼先天性白内障、双侧晶状体不全脱位。先证者目标序列捕获测序分析及数据库比对显示,所有患病者PAX6基因第6号外显子上碱基替换e.183C〉A,经Sanger测序验证后证实突变基因与表型共分离。结论PAX6基因c.183C〉A突变是该先天性无虹膜家系的致病突变位点。 展开更多
关键词 无虹膜/遗传性 人类第11号染色体/基因 配对盒转录因子6/基因 家系谱 中国人 目标序列捕获测序 无义突变
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配对盒基因家族——发育过程中重要的转录因子 被引量:4
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作者 管昊然 李梦琪 韩英伦 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期449-457,共9页
在大量的脊椎和无脊椎动物中发现的配对盒转录因子(paired box,PAX)及其同源物,在胚胎发育的许多阶段发挥着关键的作用。该基因家族因其具有保守的成对结构域而得名,除此之外其还具有八肽和同源域。根据结构域的组成和序列的同源性,该... 在大量的脊椎和无脊椎动物中发现的配对盒转录因子(paired box,PAX)及其同源物,在胚胎发育的许多阶段发挥着关键的作用。该基因家族因其具有保守的成对结构域而得名,除此之外其还具有八肽和同源域。根据结构域的组成和序列的同源性,该基因家族主要分为4个亚家族:PAX1/9(PAX1、PAX9),PAX2/5/8(PAX2、PAX5、PAX8),PAX3/7(PAX3、PAX7),PAX4/6(PAX4、PAX6)。各亚家族具有不同的特征结构,例如PAX1/9亚家族的PD-OP、PAX2/5/8亚家族的PD-OP-PTHD、PAX3/7亚家族的PD-OP-PTHD以及PAX4/6亚家族的PD和PTHD。其中,PAX家族的3个成员PAX2、PAX4和PAX6在胰腺发育和分化的多个阶段中发挥了重要作用,在调节胰岛激素的合成和分泌中也发挥了关键作用,揭示这些转录因子及其在胰腺中的原始和分化作用,为糖尿病的研究和治疗提供帮助。PAX1/9亚家族与肿瘤细胞的相互作用在癌症诊断和检测中具有重要作用,例如在肿瘤中PAX1的甲基化和PAX9表达程度等,而且PAX基因发挥作用具有时间性和空间性。在多种肿瘤中,发现PAX基因功能和结构异常。PAX3/7是作为骨骼肌发育的肌原性转录因子,PAX基因发挥作用具有时间性和空间性。在多种肿瘤中,发现PAX基因功能和结构异常。本文就上述内容进行综述。 展开更多
关键词 配对盒转录因子 胰腺 胚胎发育 骨骼肌发育 肿瘤
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TSHR,ki-67,TTF-1,Pax-8在甲状腺乳头状癌中的表达和意义 被引量:1
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作者 王丽哲 柳林 +2 位作者 李如江 张永庆 庄宝祥 《潍坊医学院学报》 2020年第3期197-200,239,共5页
目的观察促甲状腺激素受体(TSHR)、增殖细胞相关核抗原指数(ki-67)、甲状腺特异性转录因子-1(TTF-1)、成框基因8编码的转录因子(Pax-8)在单纯甲状腺乳头状癌(PTC)、桥本氏病(HT)合并甲状腺乳头状癌、结节性甲状腺肿(NG)以及正常甲状腺... 目的观察促甲状腺激素受体(TSHR)、增殖细胞相关核抗原指数(ki-67)、甲状腺特异性转录因子-1(TTF-1)、成框基因8编码的转录因子(Pax-8)在单纯甲状腺乳头状癌(PTC)、桥本氏病(HT)合并甲状腺乳头状癌、结节性甲状腺肿(NG)以及正常甲状腺组织中的表达及意义。方法选取2018年9月~2019年6月在我院内分泌科确诊并在甲状腺外科行手术治疗的患者,包括单纯甲状腺乳头状癌16例、桥本氏病合并甲状腺乳头状癌24例,结节性甲状腺肿32例及癌旁正常甲状腺组织40例。将甲状腺组织进行脱水、透明、包埋处理,分别行TSHR,TTF-1,Pax-8,ki-67的免疫组织化学染色。显微镜下观察染色结果,TSHR判读采用Tanaka定量积分法,ki-67,TTF-1,Pax-8判读方法参见文献。应用SPSS21.0软件对数据进行统计学分析,有序多分类变量采用Wilcoxon秩和检验。结果 TSHR与TTF-1在PTC组中的表达低于在NG组(P=0.000,P=0.002)中的表达,且与是否同时患有HT无关(P=0.537,P=0.556);ki-67在PTC组中的表达显著高于在NG组中的表达(P=0.000),且有淋巴结转移的PTC中,ki-67的表达更高(P=0.004),与是否患有HT无关(P=0.285);Pax-8的表达在各组中无显著差异。结论 TSHR与TTF-1在PTC中的表达低于NG和癌旁正常甲状腺组织,ki-67在PTC中的表达高于NG和癌旁正常甲状腺组织,Pax-8在不同类型甲状腺组织中表达无显著差异。 展开更多
关键词 甲状腺乳头状癌 自身免疫性甲状腺疾病 促甲状腺激素受体 增殖细胞相关核抗原指数 甲状腺特异性转录因子-1 成框基因8编码的转录因子
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认识人类配对盒基因Pax6,一个控制眼和大脑发育的关键基因 被引量:4
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作者 David Wan-ChengLi 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期577-587,共11页
人类配对盒基因6(Pax6)是控制眼和大脑发育的关键基因。Pax6基因突变或表达水平改变导致一系列的眼部疾病。作为转录因子,Pax6在胚胎发育早期多个不同组织原基表达,单独或与其他转录因子共同作用,直接或间接调控不同下游基因的表... 人类配对盒基因6(Pax6)是控制眼和大脑发育的关键基因。Pax6基因突变或表达水平改变导致一系列的眼部疾病。作为转录因子,Pax6在胚胎发育早期多个不同组织原基表达,单独或与其他转录因子共同作用,直接或间接调控不同下游基因的表达来调控眼、大脑、垂体、鼻及胰脏的发育。Pax6存在4种异构体,其功能受多种翻译后修饰的调控。全面认识Pax6的结构与功能及其与各种疾病的关系有助于眼科医师研究其突变或表达改变而引起的相关眼病的病理机制,为相关疾病的防治提供新的思路。 展开更多
关键词 配对盒基因6 转录因子 眼部异常基因 突变 基因表达调控 脑发育 眼发育
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甲状腺刺激抗体对甲状腺细胞TTF-1和PAX-8表达的影响 被引量:2
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作者 李健榕 黄国良 +2 位作者 刘礼斌 杨煜 张翼 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期34-36,共3页
目的探讨甲状腺刺激抗体(TSAb)对甲状腺细胞甲状腺转录因子1(TTF-1)和双链复合蛋白(PAX-8)基因表达影响及其作用机制。方法以RT-PCR检测甲状腺细胞中TTF-1和PAX-8基因表达情况,并应用信号转导激活和抑制剂观察TSAb作用的信号转导途径。... 目的探讨甲状腺刺激抗体(TSAb)对甲状腺细胞甲状腺转录因子1(TTF-1)和双链复合蛋白(PAX-8)基因表达影响及其作用机制。方法以RT-PCR检测甲状腺细胞中TTF-1和PAX-8基因表达情况,并应用信号转导激活和抑制剂观察TSAb作用的信号转导途径。结果TSAb作用24h可使PAX-8基因表达量升高到对照组的198.4%,此效应与蛋白激酶A(PKA)激活剂的作用相似(对照组的204.4%),且可被PKA抑制剂抑制;蛋白激酶C(PKC)激活剂佛波酯(TPA)和抑制剂则无上述效应,TPA抑制TSAb刺激的PAX-8基因的表达,此作用可被PKC抑制剂(Calphostin C)逆转。TSAb对TTF-1基因表达无明显影响。结论TSAb通过cAMP/PKA信号转导途径上调PAX-8基因表达可能是其刺激甲状腺细胞功能亢进的机制之一。 展开更多
关键词 甲状腺刺激抗体 双链复合蛋白 甲状腺转录因子1 信号转导 格雷夫斯病
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电针干预对大鼠腓肠肌适应性肥大及肌卫星细胞增殖分化的影响 被引量:10
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作者 赵丹丹 唐成林 +5 位作者 黄思琴 罗翱 张安宁 郭全虎 曹净 高睿琦 《针刺研究》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期489-495,共7页
目的:观察不同时长电针干预对大鼠腓肠肌适应性肥大及腓肠肌中增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达及配对盒转录因子7(Pax 7)、成肌分化抗原(MyoD 1)、肌细胞生成素(MyoG)、肌球蛋白重链-Ⅰ(Myh 7)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad 3mRNA表... 目的:观察不同时长电针干预对大鼠腓肠肌适应性肥大及腓肠肌中增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达及配对盒转录因子7(Pax 7)、成肌分化抗原(MyoD 1)、肌细胞生成素(MyoG)、肌球蛋白重链-Ⅰ(Myh 7)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad 3mRNA表达的影响,探讨电针诱导骨骼肌适应性肥大的相关机制。方法:SD大鼠随机分为空白对照组、电针2周组、电针4周组和电针8周组,每组6只。除空白对照组,其余3组大鼠予以右侧"足三里"和"环跳"电针干预10min,每日1次,每周6次,分别持续干预2、4和8周。称重后计算各组大鼠腓肠肌湿重比,HE染色后测定腓肠肌肌纤维截面积及直径,免疫荧光标记法观察腓肠肌中PCNA蛋白的表达改变,实时荧光定量PCR法检测腓肠肌中Pax 7、MyoD 1、MyoG、Myh 7、TGF-β1、Smad 3mRNA相对表达量。结果:与空白对照组相比,腓肠肌中PCNA蛋白表达在电针2周组和电针4周组明显增多;大鼠腓肠肌湿重比、肌纤维截面积和直径及腓肠肌Pax 7、MyoD 1、MyoG、Myh 7、TGF-β1mRNA相对表达量随电针干预时间延长呈现先升高后降低的趋势,与空白对照组比较,Pax 7和TGF-β1mRNA相对表达量在干预2周时到达峰值(P<0.01),肌湿重比、肌纤维截面积和直径及MyoD 1、MyoG、Myh 7mRNA相对表达量在干预4周时到达峰值(P<0.01);腓肠肌中Smad 3mRNA相对表达量随电针干预时间延长呈现先下降后上升的趋势,在电针4周组到达低峰(P<0.01)。结论:电针干预"足三里"和"环跳"诱导大鼠腓肠肌产生时序性适应性肥大的改变可能是通过上调腓肠肌中Pax 7、PCNA、TGF-β1、MyoD 1、MyoG、Myh 7的表达,并下调Smad 3的表达,促进肌卫星细胞的增殖、成肌分化和肌管的终末分化,增加电针侧腓肠肌质量、肌纤维面积和直径而实现的。 展开更多
关键词 电针 肌卫星细胞 骨骼肌肥大 配对盒转录因子7 成肌分化抗原
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