Pam3Csk4预处理增强巨噬细胞对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌杀菌作用

目的:初步探讨TLR2激动剂Pam3Csk4预处理后,小鼠腹腔巨噬细胞对耐甲氧西林金葡菌(Methicillin-resistant S.aureus,MRSA)的免疫反应性。方法:1μg/ml Pam3Csk4作用于鼠腹腔巨噬细胞,12 h后以热灭活耐甲氧西林金葡菌刺激细胞,ELISA和荧光定量PCR(Q-PCR)法分别检测培养细胞中TNF-α、IL-6和IL-1及mRNA含量,流式检测小鼠腹腔巨噬细胞对热灭活金葡菌的吞噬能力,平板计数法检测Pam3Csk4预处理巨噬细胞对金葡菌杀菌能力;Q-PCR法检测Pam3Csk4预处理巨噬细胞6 h和12 h后吞噬相关受体与补体受体、一氧化氮诱导合成酶(i NOS)及抗菌肽LL37基因表达。结果:金葡菌刺激后,Pam3Csk4预处理组TNF-α、IL-6、IL-1蛋白和基因水平均显著低于未处理组(P<0.05),但Pam3Csk4预处理组细胞对金葡菌吞噬和杀菌能力均显著增强(P<0.05),对于MRSA菌株,增强的杀菌能力在补体和抗体参与。进一步Q-PCR结果显示Pam3Csk4预处理巨噬细胞6 h和12 h后调理吞噬相关受体FCγRⅠ/Ⅲ与补体受体CR1/3表达均显著增强,i NOS和LL37基因表达也显著增加。结论:Pam3Csk4预处理小鼠腹腔巨噬细胞能增强其对金黄色葡萄球菌甲氧西林敏感和耐药菌株杀菌或抑菌能力,并降低其相应炎症反应,该现象可能与Pam3Csk4激活巨噬细胞吞噬相关受体以及i NOS和抗菌肽表达有关。

低剂量Pam3Csk4预处理诱导鼠腹腔巨噬细胞对肺炎克雷伯菌的低反应性

目的:初步探讨TLR2激动剂Pam3Csk4预处理后,小鼠腹腔巨噬细胞对肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,K.p)的免疫反应性。方法:1μg/ml Pam3CSK4于0小时作用鼠腹腔巨噬细胞,24小时后以不同剂量热灭活肺炎克雷伯菌刺激细胞,ELISA检测细胞培养上清中TNF-α、IL-6含量,比色法检测NO含量,流式检测小鼠腹腔巨噬细胞对热灭活K.p的吞噬能力;RT-PCR和流式检测细胞表面TLR2表达。结果:肺炎克雷伯菌刺激后,Pam3Csk4预处理组TNF-α、IL-6、NO分泌量显著低于未处理组(P<0.05),Pam3Csk4预处理组细胞对K.p吞噬能力显著降低(P<0.05),巨噬细胞表面TLR2及其基因水平表达量均降低。结论:Pam3Csk4预处理小鼠腹腔巨噬细胞能降低其对肺炎克雷伯菌的免疫反应。

Toll样受体2(TLR2)激动剂Pam3Csk4预处理对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌攻击小鼠的保护作用

目的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染日趋严重,免疫防治被寄予厚望。本研究旨在探索Toll样受体2(TLR2)激动剂Pam3Csk4预处理小鼠对MRSA攻击的保护作用。方法每只昆明小鼠用(25、50、100)μg Pam3Csk4尾静脉预处理12、24 h,小鼠尾静脉注射7×1010集落形成单位(CFU)/kg的MRSA(ATCC43300)。小鼠生存率按前24 h每2 h观察1次,后续每6 h记录小鼠存活情况,共观察1周。感染MRSA(3×108CFU/只)6 h后,菌落计数法观察肝、脾和肾等器官对MRSA的清除能力;3×108CFU/只MRSA攻击6、12、24 h后,ELISA检测小鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)和IL-10含量,实时荧光定量PCR(q PCR)检测MRSA攻击后小鼠脾脏TNF-α、IL-6、IFN-γ和IL-10的mRNA水平,以及Pam3Csk4预处理小鼠24 h后,CXC趋化因子配体1(CXCL1)和Fcγ受体Ⅲ(FcγRⅢ)表达量。结果 100μg Pam3Csk4预处理能显著提高MRSA攻击小鼠的生存率,与Pam3Csk4预处理时间呈时间依赖关系;MRSA攻击小鼠的生存时间与Pam3Csk4预处理剂量相关,50μg以上剂量Pam3Csk4预处理能显著提高MRSA攻击小鼠生存率至70%以上;与对照组比较,Pam3Csk4预处理小鼠血清中TNF-α在6 h和12 h均显著降低,24 h后2组间无显著差别;IL-6在处理6 h内显著降低,12 h和24 h后无显著差异,IFN-γ在24 h内均显著降低,而IL-10则无显著变化;Pam3Csk4预处理24 h后,脾脏中CXCL1和FcγRⅢ表达量均显著高于生理盐水组。结论 Pam3Csk4预处理对MRSA攻击小鼠具有保护作用。

二甲双胍对D-氨基半乳糖联合Pam3CSK4诱导的SD大鼠的急性肝损伤及炎症反应的作用及机制

目的研究二甲双胍在D-氨基半乳糖联合Pam3CSK4(以下简称DP)诱导的SD大鼠急性肝损伤动物模型中的抗损伤及抗炎作用。方法选取18只雄性SD大鼠腹腔注射D-氨基半乳糖(350mg/kg)和Pam3CSK4(50μg/kg)混合液构建急性肝损伤大鼠模型,干预组大鼠分别给予PBS与二甲双胍。分别称量大鼠肝重、体质量并评估肝/体质量比变化;通过HE染色观察大鼠肝脏病理改变;收集大鼠空腹血清用于检测血清转氨酶(ALT、AST)水平;同时通过ELISA与RT-qPCR检测肝组织中促炎因子(IL-6与TNF-α)的表达水平;最后通过Western blotting检测大鼠肝脏中MAPK信号通路的活化情况。结果与对照组相比,两干预组的肝重比、血清转氨酶以及促炎因子IL-6与TNF-α的表达水平均显著升高;同时肝细胞水样变性与肝间质渗出表明DP成功构建了SD大鼠急性肝损伤模型。与PBS干预组相比,二甲双胍干预组肝重比降低,肝细胞损伤明显减轻;血清转氨酶与促炎因子的表达水平均显著下降;同时肝组织中p-ERK1/2、p-SAPK/JNK、p-P38MAPK的蛋白表达降低,提示二甲双胍可能通过抑制MAPK信号通路发挥抗炎作用。结论二甲双胍在DP成功诱导的SD大鼠急性肝损伤动物模型中减轻了炎症反应。

ABCA1敲低对小鼠巨噬细胞中Pam3CSK4引起的炎症反应的双向调节作用

目的检测ABCA1敲低对巨噬细胞中Pam3CSK4引起的炎症应答的影响。方法构建小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的ABCA1敲低的稳定细胞系,以TLR2配体Pam3CSK4刺激该细胞系建立炎症反应细胞模型,在该细胞模型上检测相关促炎和抗炎细胞因子转录水平的表达变化。结果 ABCA1敲低的RAW264.7稳定细胞株在Pam3CSK4刺激后,IL-1β,TNF-α和IL-6表达发生显著上调(P<0.01),而转录抑制因子cAMP依赖性转录因子3(ATF3)也发生显著上调(P<0.01);与此同时,ATF蛋白家族中其它因子ATF1,ATF2,ATF4和ATF5转录水平没有发生显著变化。结论在巨噬细胞RAW264.7中,ABCA1敲低显著上调Pam3CSK4引起的促炎因子IL-1β,TNF-α和IL-6的表达的同时,也显著上调了具有抗炎效应的ATF3的表达,其对炎症反应的影响可能并非是单向的促炎作用,而是发生双向的调节,而ABCA1参与上调ATF3表达的机制可能也与其ATF蛋白家族其他成员的上游调节机制不同。

在MRSA系统性感染模型中Pam3CSK4预处理降低小鼠肾组织的炎症反应

目的:在耐甲氧西林金葡菌(MRSA)系统性感染模型中,观察低剂量TLR2激动剂Pam3CSK4预处理对小鼠肾组织中炎症反应的影响并初步探讨其机制。方法:于感染前48 h、24 h对BALB/c小鼠行尾静脉注射Pam3CSK4(10μg/100μl/只);2×10~7CFU/只MRSA经静脉感染小鼠,ELISA和荧光实时定量PCR(Q-PCR)检测细胞因子水平,Q-PCR检测TLR2、IRAKs等相对表达量,Western blot检测NF-κB p65磷酸化、IRAK-M及A20表达。结果:与对照组相比,预处理组在感染6 h后肾组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、CCL3和IFN-γ含量显著减少,i NOS表达量降低,IL-10和TGF-β表达量增高,TLR2表达下降;处理组肾组织在感染12 h后IRAK-1表达无明显增加,而IRAK-M表达量显著增加;Western blot结果显示Pam3CSK4预处理组NF-κBp65磷酸化降低,IRAK-M表达明显增高。结论:Pam3CSK4预处理降低MRSA系统性感染小鼠肾组织的炎症反应,这可能与诱导IRAK-M表达相关。

Pam3Csk4预处理对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染小鼠肾脓肿影响研究

目的研究TLR2激动剂Pam3Csk4预处理后耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)攻击小鼠肾脏的保护作用。方法将雌性SPF级昆明小鼠共分为未处理正常小鼠组、生理盐水组和Pam3Csk4处理组3组,每组4只。Pam3Csk4处理组用Pam3Csk4尾静脉注射预处理小鼠24h,每只50μg,分别于MRSA感染3、7d后观察肾脏脓肿的形成情况;流式法检测MRSA攻击12h后肾脏中性粒细胞的浸润;Q-PCR法检测MRSA攻击6、12h后小鼠肾脏肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1和IL-10的基因表达,以及高迁移蛋白B1(HGMP1)、热休克蛋白70(HSP70)、FcγⅢ受体(FcγRⅢ)、补体受体3(CR3)及趋化因子CXCL1/2受体的表达情况。结果与生理盐水组比较,Pam3Csk4预处理能抑制MRSA攻击小鼠后肾脓肿的形成,减少肾脏中性粒细胞的浸润(P<0.01),降低趋化因子受体CXCL1/2基因的表达(P<0.05);Pam3Csk4预处理小鼠肾脏TNF-α、IL-6和IL-1表达水平降低,而IL-10则增加(P<0.05);HSP70和HGMP1基因在MRSA感染6h内两组比较差异无统计学意义(P>0.05),但12h后HSP70和HGMP1基因均降低(P<0.01);Pam3Csk4预处理小鼠肾脏CR3和FCγⅢ受体表达水平均高于生理盐水组(P<0.05)。结论 Pam3Csk4预处理降低MRSA导致的炎性反应并对MRSA所致肾脓肿具有抑制作用。

Toll样受体2激动剂Pam3CSK4对人牙髓细胞表达细胞因子的影响

目的研究Toll样受体2（TLR2）激动剂Pam3CSK4对体外培养人牙髓细胞（hDPC）表达细胞因子的影响。方法特异性配体Pam3CSK4体外活化hDPC表面TLR2，实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测不同时间处理后hDPC内白细胞介素6（IL-6）、IL-8、IL-1β及半胱氨酸-X-半胱氨酸趋化因子配体10（CXCLl0）mRNA的表达水平；双抗体夹心ELISA法检测上述细胞上清液中IL-6、IL-8蛋白的表达水平；激光共聚焦观察TLR2-核因子κB（NF-κB）信号通路关键蛋白p65的胞内分布情况。结果1μg／mlPam3CSK4处理hDPC0、4、8、12h，荧光定量PCR结果显示，除IL-6mRNA表达水平最先于4h达峰值外（P=0．006），IL-8、IL-1β及CXCLl0mRNA表达水平均于4h开始升高．8h达峰值（P〈0．001）：双抗体夹心ELISA法显示，hDPC上清液中IL-6及IL-8的蛋白表达于4h开始升高．8～12h趋于平稳。激光共聚焦显微镜发现，表达绿色荧光的NF-κBp65蛋白主要位于对照组细胞质．经1μg／mlPam3CSK4刺激75min后转移至胞核。结论特异性配体Pam3CSK4通过结合hDPC表面TLR2启动细胞内NF-κB信号通路进而激活其转录作用．诱导hDPC表达多种细胞因子．从而参与牙髓炎的早期免疫调控。

Toll样受体2配体对刀豆蛋白A诱导小鼠肝脏损伤的保护作用

目的:研究Toll样受体2配体(Pam3CSK4)对刀豆蛋白A(Con A)诱导小鼠免疫性肝损伤的干预效果及机制。方法:尾静脉注射Con A(15 mg/kg)诱导小鼠肝损伤模型,在Con A注射前24 h腹腔注射Pam3CSK4。检测血清谷丙转氨酶(ALT)和γ-干扰素水平,并观察肝组织的病理改变。结果:与Con A模型组比,Pam3CSK4预处理组血清ALT水平明显降低(P<0.01),肝脏病理损伤明显减轻,血清γ-干扰素水平明显下降(P<0.01)。结论:Pam3CSK4对Con A诱导小鼠肝损伤具有保护作用,该作用可能与γ-干扰素水平的下调有关。