A mathematical model for quality evaluation of total saponins of Panax japonicas based on hypolipidemic activity

Objective: The chemical finger printing-based methods for evaluating TCMs quality can report partial of TCMs quality without linking to effective constituents. In this study, a mathematical model was established for the quality evaluation of total saponins of Panax japonicus(TSPJ), a folk medicine in China and Japan for treating diseases, through coupling the dynamic changes of chemical constitutions with corresponding activities.Methods: High-performance liquid chromatography(HPLC) fingerprints were applied to establish the chromatographic database of TSPJ. The associated hypolipidemic activity database was determined by TG assay using Hep G2 cell model. Correlation analyses of two databases were performed by partial least squares(PLS) for calculating regression coefficients, and the interval value of YZL value(the ratio of positive and negative peak-to-peak area coefficient) closely related to hypolipidemic activity was refined by the formula of Norminv function to value the quality of TSPJ.Results: In this study, the chromatographic data of 16 common peaks were obtained from 20 batches of TSPJ. After the estimate by this mathematical evaluation model, seven peaks were positively correlated with hypolipidemic activity, and nine peaks were negatively correlated with hypolipidemic activity.When the YZL value was less than 0.7861, the quality of sample was inferior, while YZL value was more than 6.6992, and the quality of samples was superior. The quality of another ten batches of TSPJ was further assessed to verify this method.Conclusion: These results indicated that the established model could be usefully applied to evaluate the quality of TSPJ in the hypolipidemic activity.

A novel preparation of Panax japonicas with high bioequivalence of ginsenoside Rg3

In the present study,we aimed to prepare Panax japonicus tablets and carry out quality inspection.Panax japonicus tablets were prepared by ultrafine pulverization-wet granulation,and quality inspection was carried out according to Pharmacopoeia regulations.The plasma concentration of animals with self-made Panax japonicus tablets or ginsenoside Rg3 in single-dose intragastric administration was determined by high-performance liquid chromatography(HPLC).The pharmacokinetic parameters and relative bioavailability were calculated by DAS 2.0 software.The quality inspection of self-made Panax japonicus tablets met the requirements of Chinese Pharmacopoeia(2015 edition),and this preparation had high bioequivalence of ginsenoside Rg3.The preparation of Panax japonicus tablets was reasonable and highly qualified.Moreover,this new Panax japonicus preparation showed better profiles in oral absorption and utilization.This study provided evidence for the industrial production and clinical application of Panax japonicus tablets.

珠子参叶皂苷对脂肪酶抑制机制及降血脂研究

珠子参叶是五加科(Araliaca)植物珠子参(Panax japonicas var.major)的干燥带梗叶,为秦巴地区特色中药材。为合理开发利用珠子参叶并阐明其化学成分,该研究利用HPLC方法分析珠子参叶皂苷部位的主要化学成分,测定珠子参叶皂苷部位的脂肪酶抑制活性及抑制类型,通过分子对接及动物实验验证脂肪酶抑制机制及降血脂作用。结果表明:(1)珠子参叶皂苷部位主要成分为20(S)-人参皂苷Rg_(2)、20(R)-人参皂苷Rg_(2)、人参皂苷Rb_(2)、人参皂苷Rb_(3)、人参皂苷Rd、人参皂苷Rh_(2)。(2)珠子参叶皂苷部位、20(R)-人参皂苷Rg_(2)对脂肪酶具有较强的抑制作用,其IC_(50)分别为0.14、2.30μmol·L^(-1)。(3)珠子参叶皂苷部位、20(R)-人参皂苷Rg_(2)、人参皂苷Rb_(3)对脂肪酶的抑制为可逆性抑制,抑制类型为非竞争型抑制。(4)配体与ARG337B、ASP331B、ILE248B残基结合可能有助于提高配体的脂肪酶抑制活性。(5)珠子参叶总皂苷可以显著降低高脂血症小鼠血清中胆固醇和甘油三酯的含量。该研究为珠子参叶在降血脂方面的深入开发和利用提供了理论参考。

竹节参醇提物化学成分研究

目的研究五加科植物竹节参(Panax japonicus C.A.Mey.)干燥根茎的化学成分。方法竹节参醇提物经柱色谱与制备液相等多种方法进行分离纯化,根据化合物的理化性质、核磁共振图谱及质谱数据对其进行结构解析与鉴定。结果从竹节参中共分离鉴定出了11种皂苷类化学成分,分别为:人参皂苷Re(1)、人参皂苷Rg_(1)(2)、竹节参皂苷Ⅴ(3)、24-(R)珠子参苷(4)、竹节参皂苷Ⅳa(5)、竹节参皂苷Ⅳa甲酯(6)、竹节参皂苷Ⅳ(7)、竹节参皂苷Ⅳ甲酯(8)、竹节参皂苷Ⅰ(9)、金盏花苷E(10)、竹节参皂苷Ⅳa乙酯(11)。结论化合物4、10、11位首次从竹节参中分离得到。

竹节参化学成分研究

从竹节参的乙醇提取物分离得到了12个化合物,通过MS和NMR等方法鉴定为:竹节参皂苷Ⅳa(1),楤木皂苷A(2),竹节参皂苷Ⅰb(3),竹节参皂苷Ⅴ(4),尿嘧啶(5),胸嘧啶(6),尿苷(7),鸟苷(8),胸苷(9),腺苷(10),肌苷(11),胞苷(12),其中5～12为首次从该植物中分离。

竹节参总皂苷对冠脉结扎致心力衰竭大鼠的保护作用

目的观察竹节参总皂苷对冠脉结扎致心力衰竭大鼠的保护作用,并探讨其可能机制。方法采用结扎左冠状动脉前降支法建立大鼠心力衰竭模型,用竹节参总皂苷(50和100 mg/kg)灌胃给药,1次/d,连续8 w。8 w后检测大鼠心功能,然后取血进行血液超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量分析;取心脏,计算大鼠心脏重量指数,分别进行HE、Masson和苦味酸-天狼星红染色并用显微镜、电子显微镜观察,计算心肌梗死面积、心室扩张程度、心肌间质胶原容积分数、观察心肌组织形态学。结果模型组大鼠心功能明显受损,心脏重量指数、心肌梗死面积、心室扩张程度、心肌间质胶原容积分数明显升高(P<0.05或P<0.01);血液中SOD、GSHPx、CAT活性显著下降,MDA含量显著升高;形态学观察发现,心肌细胞变性坏死、胶原纤维大量增生,与假手术组比较具有显著性差异(P<0.01);用竹节参总皂苷(50和100 mg/kg)治疗后,上述异常改变得到了有效改善。结论竹节参总皂苷对冠脉结扎致心力衰竭大鼠的心肌损伤有较好保护作用,其机制可能与清除自由基、抗脂质过氧化,提高机体的抗氧化能力有关。

竹节参总皂苷通过调节miR-199/SIRT1/MFN2干预小鼠脂肪性肝炎

目的研究竹节参总皂苷(total saponins of Panax japonicas,TSPJ)通过调节miR-199/SIRT1/MFN2信号通路改善非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)的作用及相关机制。方法45只BALB/c小鼠随机分为正常组、高脂饮食(high fat diet,HFD)组、TSPJ低剂量组、TSPJ高剂量组,正常组给予普通维持饲料,HFD组、TSPJ低、高剂量组给予高脂饲料。TSPJ低、高剂量组小鼠分别每天灌胃给予15、45 mg·kg^(-1)的TSPJ(溶于生理盐水),其他组每天灌胃等量的生理盐水。持续7个月后处死小鼠,进行血清收集及肝脏取材。结果HE染色显示,HFD组小鼠肝脏脂质变性明显,炎症反应明显,TSPJ组小鼠肝组织脂质变性缓解,炎症减轻。TSPJ明显上调MFN2、SIRT1表达水平,下调TNF-α、IL-1β、SREBP、ChREBP表达水平。同时在mRNA水平,miR-199与SIRT1显示良好的负调控关系,生物信息学提示miR-199靶向SIRT1。结论TSPJ可通过miR-199/SIRT1/MFN2信号通路改善高脂饮食所致的NASH的发生发展。

糖智宁胶囊定性定量方法研究

目的建立糖智宁胶囊的定性定量方法。方法采用TLC法对糖智宁方中黄连进行定性鉴别,采用HPLC法测定糖智宁胶囊中葛根素和竹节参皂苷Ⅳa的含量。色谱柱为Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);柱温30℃;以0.2%磷酸溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱;流速1 mL min-1;检测波长203 nm。结果薄层色谱鉴别中,特征斑点清晰、分离度好、专属性强、阴性样品无干扰;在HPLC法中,葛根素和竹节参皂苷Ⅳa线性范围分别是:0.122 4～1.836μg(r=0.999 9)、0.249 6～3.744μg(r=0.999 9);平均加样回收率分别为98.3%、97.1%;RSD分别为1.0%、0.7%。结论所建方法专属性强,重复性好,可用于糖智宁胶囊的质量控制。

复方竹节参片对佐剂性关节炎小鼠的抗炎作用

目的:探讨复方竹节参片治疗实验性关节炎的效果与作用机制。方法:建立弗氏完全佐剂诱导小鼠关节炎病理模型,以复方竹节参片为实验组,雷公藤多苷片为对照组,通过测定右后足肿胀、耳肿胀、血清细胞因子进行效果对比。结果:复方竹节参片能明显抑制弗氏完全佐剂性关节炎小鼠关节肿胀及病理学改变,降低关节炎指数,降低关节炎病理模型小鼠血清中异常增高的白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子(TNF)水平优于雷公藤多苷片组(P<0.05)。结论:复方竹节参片能显著抑制促炎细胞因子的病理性升高,有效抑制小鼠关节炎病情进展。

金银花、三七和蛹虫草提取物对即食海参品质变化影响的研究

目的比较金银花、三七和蛹虫草3种不同来源提取物对即食海参贮藏稳定性的影响。方法以新鲜海参为原料,以金银花、三七和蛹虫草提取物对海参体壁进行预处理后制成即食海参并在37℃条件下贮藏28 d,监测海参体壁的质构特性、挥发性盐基氮、挥发性成分、胶原蛋白热变性温度及游离氨基酸等指标的变化。结果三七提取物处理后的即食海参硬度最大,为(487.75±52.05)g,样品中无机硫化物和有机硫化物的含量随贮藏时间延长而逐渐下降。各组即食海参在贮藏期内,游离氨基酸总量虽略有增加,但总体稳定在较低水平。除了三七组在贮藏28 d时挥发性盐基氮含量达到34.74 mg/100 g外,其他样品均在15~25 mg/100 g范围内。3个处理组即食海参的热变性温度随贮藏时间的延长普遍呈下降的趋势,但均高于对照组。结论三七提取物处理能够显著提高即食海参样品的硬度;蛹虫草提取物能够使海参在贮藏期间保持较好的弹性;金银花提取物对即食海参蛋白质的降解有一定的抑制作用。

竹节参对MC3T3-E1成骨样细胞增殖与分化的影响

目的:研究竹节参不同提取物对体外培养成骨样细胞(MC3T3-E1)增殖、分化作用的影响。方法:采用MC3T3-E1细胞为体外药物筛选的细胞模型,用MTT法测定药物对成骨细胞的增殖作用,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒测定ALP的活性,考察竹节参不同提取物对MC3T3-E1细胞增殖、分化作用的影响。结果:10-1 mg/mL的竹节参水提物和10-4 mg/mL的95%乙醇提取物能显著促进MC3T3-E1细胞的增殖和分化(P<0.05)。结论:一定浓度的竹节参水提物和95%乙醇提取物能显著促进MC3T3-E1细胞的增殖和分化,该药物具有开发抗骨质疏松药物的潜力。

槐米人参抗疲劳实验研究

本论文研究了槐米人参对昆明小白鼠的抗疲劳作用,分别采用对照、低浓度、中浓度、高浓度4组不同浓度(生理盐水、0.2 mg/kg、0.6 mg/kg、1.0 mg/kg)溶液对小鼠进行负重游泳实验。结果表明:槐米人参对昆明小白鼠游泳时间延长有一定影响,其影响程度达到了极显著水平(P<0.01)。说明槐米人参有较好的抗疲劳功能,其延长时间以高浓度组最长。

竹节参总皂苷对不同时间段脑出血模型大鼠脑损伤的保护作用

目的研究竹节参总皂苷(TSPJ)对脑出血大鼠脑损伤不同时间段的影响。方法采用胶原酶法制备脑出血动物模型,将48只大鼠随机分为假手术组、模型组、TSPJ低、高剂量组共4组,每组12只;造模后6h灌胃给药,每12h 1次,于造模后12、72h测各组大鼠脑组织含水量,超氧化物歧化酶、丙二醛含量,IL-6、TNF-α水平。结果与模型组比较,72h高剂量TSPJ组脑组织含水量减少,超氧化物歧化酶活性增高,丙二醛含量下降,IL-6、TNF-α水平下降,12h时TSPJ高剂量组超氧化物歧化酶活性增高,TNF-α下降;丙二醛、IL-6含量变化不明显。结论 TSPJ能减轻出血性脑损伤,对受损脑组织发挥保护作用,且有时间依赖性。

槐米人参抗疲劳实验研究

本文研究了槐米人参对昆明小白鼠的抗疲劳作用,分别采用对照、低浓度、中浓度、高浓度4组不同浓度(生理盐水、0.2 mg/kg、0.6 mg/kg、1.0 mg/kg)溶液对小鼠进行负重游泳实验。结果表明:槐米人参对昆明小白鼠游泳时间延长有一定影响,其影响程度达到了极显著水平(P<0.01)。说明槐米人参有较好的抗疲劳功能,其延长时间以高浓度组最长。

竹节人参提取物对急性低氧大鼠脂质过氧化和微血管反应性的影响

目的:观察竹节人参提取物对急性低氧条件下大鼠脂质过氧化和微血管反应性的影响。方法:SD大鼠随机分为三组:对照组、模型组和竹节人参提取物组。对照组和模型组用生理盐水灌胃处理,竹节人参提取物组用竹节人参提取物灌胃处理30min后,急性低氧模型采用给予大鼠吸入含氧量为12.5%的氮氧混合气体,观察低氧10、15、20、25min时肠系膜微动脉血管口径、血流速度和25min时血中谷光甘肽过氧化物酶(GSH-px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和活性氧(ROS)含量的变化。结果:模型组与对照组比较,肠系膜微动脉血管口径增大(P<0.01,P<0.05),而血液流速却减慢(P<0.01,P<0.05),ROS明显增加(P<0.01),SOD、CAT和GSH-px活力明显下降(P<0.01);竹节人参提取物组能明显改善由于急性低氧而引起的上述多数指标(除血管口径外)的变化。结论:急性低氧可使肠系膜微动脉管径变大和血细胞流速减慢,同时体内抗氧化酶活性减弱;而竹节人参提取物能增加血细胞流速,提高抗氧化能力。

竹节参培养细胞提取的竹节参总皂苷对大鼠佐剂性关节炎的抑制作用

为了探讨竹节参培养细胞所提取的竹节参总皂苷对大鼠佐剂性炎症的治疗效果,利用雄性AA大鼠构建病理模型,通过致炎前和致炎后口服给药,研究了竹节参总皂苷对于大鼠原发性以及继发性佐剂性关节炎的预防和治疗效果。实验结果表明,从竹节参培养细胞中分离到的竹节参总皂苷能够预防和显著减轻AA大鼠佐剂性关节炎的原发性病变;竹节参总皂苷也能够很好地减轻和治疗AA大鼠佐剂性关节炎的继发性病变。竹节参总皂苷的有效剂量为35～140 mg/kg。实验证明,从竹节参培养细胞中提取的竹节参总皂苷与天然竹节参提取物一样均具有良好的抗炎作用。

竹节参总皂苷通过激活自噬抑制衰老大鼠心肌细胞凋亡

观察竹节参总皂苷(total saponins of Panax japonica,TSPJ)对自然衰老大鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并从自噬角度探讨其作用机制。取18月龄SD雄性大鼠随机分为模型组、TSPJ低、高剂量组,每组10只;TSPJ低、高剂量组分别投食给予TSPJ 10、30 mg/kg,模型组每天投食等量正常饲料,持续给药至24月龄;同时取10只6月龄大鼠作为对照组。与青年对照组相比,自然衰老组心肌细胞排列紊乱,肌纤维断裂,心肌细胞凋亡指数增加3倍。TSPJ能有效改善衰老大鼠心脏组织的形态结构和心肌细胞凋亡下降55%;衰老模型组Bax、Caspase-3、Caspase-9、p62蛋白表达分别升高了9.5,1.8,4.1,3.4倍,Bcl-2、Bcl-2/Bax及、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1分别下降了98%,99%,70%,48%;TSPJ组中Bax,Caspase-3,Caspase-9和p62分别下调87%、65%,70%和65%,Bcl-2,Bcl-2/Bax比值,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1表达分别升高了12.75,138.5,5.68和2.6倍。结果表明,竹节参总皂苷能有效地改善衰老大鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与TSPJ激活衰老大鼠心肌细胞自噬相关。

竹节参总皂苷改善高脂饮食诱导的小鼠睾丸生殖功能障碍

目的探讨竹节参总皂苷(saponins of Panax Japonicus,SPJ)改善高脂饮食诱导的小鼠睾丸生殖功能障碍的作用及机制。方法采用血球计数板于光镜下进行精子计数,伊红Y染色法检测精子存活率;苏木精伊红(HE)染色法检测小鼠睾丸组织形态;TUNEL法检测睾丸生精细胞的凋亡;Westernblot法检测睾丸组织内p-NF-κB及其下游炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的蛋白表达水平;免疫荧光法检测睾丸巨噬细胞数量。结果SPJ可减轻高脂饮食小鼠的体质量,提高睾丸和附睾的质量及其指数,提高精子存活率和精子数量,改善生精小管形态并减轻生精细胞的凋亡,明显下调p-NF-κB、TNF-α和IL-1β的蛋白表达水平,减少睾丸巨噬细胞的数量。结论SPJ对高脂饮食小鼠睾丸生殖功能障碍有明显改善作用,其机制可能与减轻巨噬细胞浸润,抑制NF-κB通路介导的睾丸炎症有关。

四种人参属药用植物的核型分析

以四种人参属药用植物组培材料为试材,采用常规压片法对人参、西洋参、三七和日本竹节参的染色体核型进行分析。结果表明:三七染色体数目为24条,其余三种均为48条,人参、西洋参、三七、日本竹节参核型公式依次为:2n=4x=48=38m+8sm+2T、2n=4x=48=20m+26sm+2st、2n=2x=24=18m+6sm、2n=4x=48=22m+22sm+2st+2T。臂比均值:1.42、1.91、1.54、1.75,臂比>2比率(%):16.67、33.33、16.67、50.00。核型不对称系数(%):58.93、63.83、58.32、64.57。染色体长度比:2.15、1.67、1.70、1.78。核型分类:2B、2A、2A、2A。核型似近系数聚类分析表明,人参、西洋参、日本竹节参三者亲缘关系较近,与三七亲缘关系较远。

陕产珠子参地上部分挥发油的GC-MS分析

目的:研究陕产珠子参地上部分的挥发油组成;方法:利用水蒸气蒸馏法提取陕产珠子参地上部分的挥发油,采用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)分析挥发油中的化学成分;结果:三个产地的珠子参地上部分挥发油中共鉴别化学成分20个。凤县产珠子参地上部分挥发油含量约为0.20%,鉴定11种成分,主要成分为植酮(30.92%)、1,1,7-trimethyl-4-methylenedecahydro-1H-cyclopropa[e]azulen-7-ol(19.59%)、α-芹子烯(15.82%)、5a-(hydroxymethyl)-5,7-dimethyl-2,3,4,5,5a,6,7,9a-octahydrospiro[2,5-methanobenzo[b]oxepine-10,2-oxiran]-3-ol(6.33%)、2-[(Z)-十八碳-9-烯氧基]乙醇(6.12%);眉县产珠子参地上部分挥发油含量约为0.22%,鉴定9种成分,主要成分为植酮(26.03%)、叶绿醇(19.50%)、α-芹子烯(13.57%)、1,1,7-trimethyl-4-methylenedecahydro-1H-cyclopropa[e]azulen-7-ol(11.51%)、natural verticillol(9.88%);太白县产珠子参地上部分挥发油含量约为0.20%,鉴定10种成分,主要成分为植酮(37.68%)、α-himachalene(26.56%)、T-杜松醇(8.29%)、1-hydroxy-1,2-dihydrolycopene(6.22%),1,1,7-trimethyl-4-methylenedecahydro-1H-cyclopropa[e]azulen-7-ol(4.90%)。其中:5-8,11-dihydroxy-10a,12a-dimethylhexadecahydro-1H-naphtho[1,2-h]chromen-1-yran-2-one(2.24%)、5a-(hydroxymethyl)-5,7-dimethyl-2,3,4,5,5a,6,7,9a-octahydrospiro[2,5-methanobenzo[b]oxepine-10,2-oxiran]-3-ol(6.33%)、β-愈创木烯(4.69%)、7,7,8,8-tetramethyloctahydro-2,3b-methanocyclopena[1,3]cyclopropa[1,2]benzene-4-ol(5.51%)、虾青素(2.35%)、2-[(Z)-十八碳-9-烯氧基]乙醇(6.12%)为凤县产珠子参的地上部分挥发油中的特有成分,natural verticillol(9.88%)、(2E,4E,6E,8E,10E)-8a-acetoxy-3a,6b-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)-1,1,5,7-tetramethyl-4-oxo-1,1a,1b,3a,4,6a,6b,7,8,8a-decahydrocyclopenta[a]cyclopropa[f]naphthalen-8-yl tetradeca-2,4,6,8,10-pentaenoate(3.09%)、叶绿醇(19.50%)为眉县产珠子参地上部分挥发油中的特有成分,石竹素(3.58%)、视黄醛(3.54%)、α-himachalene(26.56%)、T-杜松醇(8.29%)、3α-Aethyl-5α-androstanol-(3β)-on-(17)(1.32%)为太白县产珠子参地上部分挥发油中的特有成分。结论:陕产珠子参地上部分挥发油含量均较低,三个产地的挥发油种类存在差异,且各地挥发油中均含有其特有成分,本研究为珠子参地上部分进一步开发研究提供参考。