金葡菌P-V杀白细胞毒素的原核表达及对人多形核白细胞的杀伤效应(英文)

目的:通过基因工程方法获得重组的杀白细胞毒素,为深入研究其致病机制打下基础。方法:利用PCR方法从产杀白细胞毒素金葡菌临床分离株的基因组DNA中克隆PVL-S和PVL-F基因序列,分别将其克隆到载体pET22b中,构建重组pET22b-LuKS和pET22b-LuKF原核表达载体,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,异丙基硫代β-D半乳糖苷(sopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,将其可溶性表达经镍离子螯合亲和层析纯化后,通过对外周血粒细胞和多形核白细胞的刺激反应鉴定其活性。结果:以PCR方法获得PVL-S和PVL-F基因片段,与克隆载体连接后测序与文献报道的基本一致,成功构建了pET22b-LuKS和pET22b-LuKF原核表达质粒,并高效诱导表达出相对分子质量约34 kD的S蛋白及相对分子质量约35 kD的F蛋白。重组蛋白(rPVS,rPVF)在37℃经IPTG诱导时均以包涵体形式存在,而30℃时部分出现可溶性表达,部分为包涵体。将上清可溶性重组蛋白作用于外周血粒细胞,可导致粒细胞出现凋亡,部分出现坏死。结论:成功构建了表达载体pET22b-LuKS和pET22b-LuKF,对其编码的S片段和F片段进行了原核表达和鉴定,高效表达了杀白细胞毒素的S和F两类蛋白,为进一步对其致病机制和免疫原性的研究奠定基础。

产杀白细胞素金黄色葡萄球菌感染的研究现状

国外多数回顾性研究发现产杀白细胞素(PVL)金黄色葡萄球菌感染有着特有的临床表现,特别是产PVL金黄色葡萄球菌相关性坏死性肺炎可能为一新现的临床疾病,由此PVL在金黄色葡萄球菌感染中的致病研究日益受到重视。本文就目前对产PVL金黄色葡萄球菌感染的致病机制、流行病学、检测和防治等问题研究作一综述。

深圳地区金葡菌杀白细胞毒素基因检测及分子流行病学研究

目的研究深圳市多所医院临床分离金葡菌中杀白细胞毒素(PVL)分布特征及与临床疾病的关系。方法对深圳市14所医院临床分离的724株金葡菌进行PCR检测PVL基因,纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)表型,mec A^fem B双重PCR确证MRSA基因型,并对PVL阳性的MRSA进行葡萄球菌染色体盒子(SCCmec)分型。结果 724株金葡菌中49株(49/724,6.8%)携带PVL基因;PVL阳性门诊菌株7.1%(4/56),住院6.7%(45/668),差异无统计学意义(P>0.05);PVL阳性的MRSA经SCCmec分型,Ⅱ型6.7%(3/45),III型4.2%(9/215),未分型1.9%(2/105),差异无统计学意义(P>0.05)。结论携带PVL的金葡菌可引起严重侵蚀性感染,及时检测并做同源性分析,利于控制医院感染暴发。