欧蓍草花粉主要过敏原Parj1的重组表达及鉴定

目的:克隆、表达和纯化欧蓍草花粉主要过敏原Par j1。方法:根据Parj1.0102在GenBank中的序列号获得其核苷酸和氨基酸序列,确定开放阅读框,采用DNAstar软件优化密码子,合成全基因,并克隆到表达载体pET-44a中,转化表达宿主大肠杆菌Rosetta,优化蛋白表达条件并进行亲和层析纯化和Western blot鉴定。结果:PCR扩增及重组质粒测序结果表明成功地构建了pET-44a+/Par j1.0102原核表达质粒。对表达菌表达条件进行优化,最终确定在30℃,IPTG浓度为1.0 mmol/L,诱导4小时时蛋白表达量最高,重组蛋白经亲和层析纯化,SDS-PAGE分析纯化产物在23 kD处有明显的条带。Western blot表明重组蛋白具有与StrepII标签抗体结合活性。结论:国内首次获得融合StrepII标签的Par j1.0102重组蛋白,为欧蓍草花粉过敏诊断及特异性免疫治疗奠定基础。

干旱区黑果枸杞光合电子传递速率对施氮的响应

为探明干旱区栽培黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)叶片光合电子传递速率(J)对施氮的响应,进一步完善施氮对光合特性的影响机理,本试验设置5个不同施氮(尿素,N,46%)量处理(0、0.05、0.10、0.15和0.20kg·株^(-1)),测定各处理下黑果枸杞在不同光照强度(PAR)和CO_(2)浓度下叶片J,并通过J-PAR和J-CO_(2)的响应曲线拟合得到饱和光强(I_(sat))、饱和CO_(2)浓度(C_(i-sat))、最大电子传递速率(J_(max))和零点电子传递速率(J_(0))等参数。结果表明:1)J-PAR响应下,适当施氮对黑果枸杞叶片J_(max)和I_(sat)有一定的提高作用。当施氮量为0.15~0.20kg·株^(-1)时J_(max)最大,当施氮量为0.10~0.15kg·株^(-1)时I_(sat)最大。2)J-CO_(2)响应下,适当施氮对黑果枸杞叶片J_(0)、J_(max)和C_(i-sat)有一定的提高作用。当施氮量为0.10~0.15kg·株^(-1)时J_(0)最大,但J_(max)和C_(i-sat)受季节影响较大,J_(max)在夏果期当施氮量为0.20kg·株^(-1)时最大,在秋果期当施氮量为0.10kg·株^(-1)时最大,C_(i-sat)在夏果期当施氮量为0.20kg·株^(-1)时最大,在秋果期当施氮量为0.05kg·株^(-1)时最大。因此,适当施氮有利于I_(sat)、C_(i-sat)、J_(max)和J_(0)等参数的提高。