光度法测定杜仲藤中总黄酮

石油醚索氏提取除杂,甲醇索氏提取杜仲藤中各部位的总黄酮含量,所得提取液用甲醇定量稀释至100 mL,分取1.0 mL于10 mL容量瓶中,并在碱性溶液中与铝(Ⅲ)反应后在510 nm波长处测定所生成络合物的吸光度。用芦丁作标准制作校准曲线,其回归方程为C=0.09669A-0.000 763,相关系数为0.9993。按此方法分析了杜仲藤样品,测得茎中总黄酮量为93.0 mg.g-1(n=6,相对标准偏差为1.62%),叶中为96.4 mg.g-1(n=6,相对标准偏差为0.44%)。

红杜仲不同乙醇浓度提取物对HaCaT细胞抗氧化作用的比较及其抗氧化机制的研究

目的本研究对红杜仲不同乙醇浓度提取物抑制H_2O_2诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤作用进行筛选。方法以不同浓度乙醇进行回流提取分别获得了30%、50%、70%及95%乙醇提取的四种红杜仲醇提取物(Parabarium micranthum ethanol extract,PEE),利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-Diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl,DPPH)法测定其体外清除自由基的能力。以人永生化表皮细胞HaCaT为研究对象,通过不同浓度H_2O_2处理细胞并筛选以200μmol/L作为建立H_2O_2诱导的氧化应激损伤模型的最适浓度。设立对照组、H_2O_2损伤组和红杜仲-H_2O_2组。通过微板法和比色法测定内源性抗氧化酶活力及细胞存活率,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针检测细胞内氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平,逆转录PCR测定Nrf2 mRNA表达量。结果不同乙醇浓度提取的PEE在体外均具有清除DPPH自由基的作用,效果最强的70%乙醇提取的PEE的IC(50)为7.6 mg/L;在细胞水平上,H_2O_2诱导使得HaCaT细胞内抗氧化酶SOD及CAT活力降低,50%、70%及95%乙醇提取的PEE能够显著提高细胞内抗氧化酶活力。其中70%乙醇提取的PEE的作用最为显著,抗氧化酶活力的提高表现出剂量依赖性,并且能显著提高细胞存活率、降低细胞内ROS的水平(与氧化应激组比,P<0.05或P<0.01)。同时,70%乙醇提取的PEE能够显著诱导抗氧化相关信号通路基因Nrf2 mRNA的表达。结论 70%乙醇提取的PEE可能通过激活Nrf2抗氧化信号通路,提高抗氧化酶活性,降低ROS水平,从而具有保护HaCaT细胞免受H_2O_2诱导的氧化损伤作用。