SD大鼠、小鼠创面新生皮肤组织石蜡切片的制备方法

目的:探索有效的SD大鼠、小鼠创面新生皮肤组织石蜡切片的制备方法。方法:取21只雄性SD大鼠、21只雄性SD小鼠制作创伤模型,在不同愈合时间取创面新生皮肤组织制作石蜡切片,对石蜡切片制作过程中的关键步骤进行控制,包括固定、脱水、浸蜡、包埋、切片、脱蜡、复水、染色、脱水、封藏等。比较不同愈合时间皮肤组织石蜡切片的差异。结果:实验制得组织切片染色均匀,细胞排列紧密,无裂缝,细胞核染色清晰,呈暗红色,成纤维细胞、毛囊、毛细血管和肌肉组织结构均清晰可见。随着愈合时间的延长,皮肤表皮层增厚,毛囊越来越多且分化程度提高,成纤维细胞数量增加。结论:该制备方法可以有效保证石蜡切片的质量并判定皮肤愈合程度。

银杏叶提取物对大鼠高脂性脂肪肝的实验观察

目的通过对大鼠高脂酒精脂肪肝的肝组织学观察及血清学检测,为银杏叶提取物防治脂肪肝提供科学的理论依据。方法用高脂饲料加低浓度酒精喂食SD雄性大鼠复制成脂肪肝模型。分为6组:正常组:普通饲料+生理盐水;模型组:高脂饲料+38%酒精;阳性药物对照组:高脂饲料+38%酒精+绞股蓝总苷胶囊;治疗组:高脂饲料+38%酒精+银杏叶片(高,中,低剂量)。结果6周后观察肝组织病理切片及血清学指标,可见肝组织及胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶等各组治疗后均与模型组有差别(P<0.05),与正常对照组无差别(P>0.05);银杏叶高、中、低剂量组间比较无差别(P>0.05)。结论通过建立符合人们饮食习惯的脂肪肝模型,说明银杏叶提取物治疗脂肪肝效果好。

动脉粥样硬化大鼠实验模型的建立与评价

目的建立动脉粥样硬化大鼠模型,通过4项相关指标评价该模型的特征与临床应用价值。方法将72只雄性SD大鼠随机分成对照组(n=15)和高脂组(n=57)。高脂组在喂食开始时一次性腹腔注射维生素D3 60万IU/kg,喂食高脂饲料8周;对照组给予腹腔注射等体积生理氯化钠注射液,喂食基础饲料8周,通过体质量、血清生化指标、不同部位脂肪质量、主动脉及脏器病理变化来评价模型。结果给予高脂饲料5周、8周后,大鼠体质量明显下降;总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇明显升高,高密度脂蛋白胆固醇明显下降;炎症因子TNF-α升高,主动脉周围脂肪、脏器周围脂肪质量减少,高脂组大鼠造模5周病理改变不明显,造模8周后大鼠主动脉出现硬化斑块、脂质浸润,心肌组织有少量脂质沉积;肝脏、肾脏冰冻切片油红O染色呈强阳性。结论该法制备动脉粥样硬化大鼠模型简便、快速,具备模型特征,适于动脉粥样硬化的相关研究。

一种制作大鼠膝关节和椎间盘石蜡组织切片的方法

改良一种制作大鼠完整膝关节和椎间盘的石蜡切片的方法,为观察骨关节透明软骨和椎间盘纤维软骨的结构提供实验基础。取正常大鼠完整膝关节和胸椎(T3-T4),10%中性福尔马林溶液固定24h,流水冲洗后分别采用3%硝酸脱钙液、混合脱钙液及EDTA脱钙液3种不同的脱钙液配合不同脱钙条件进行脱钙,制作石蜡切片,苏木精-伊红和番红O/固绿染色方法染色,显微镜下观察并评价其效果。结果表明,采用混合脱钙液4℃搅拌脱钙条件下制作的切片颜色鲜艳,细胞和细胞核清晰,组织破坏程度小,且耗时短,全部过程仅需一周即可完成。采用混合脱钙液方法制作的大鼠膝关节和椎间盘石蜡组织切片,骨和软骨组织结构完整,细胞形态清晰,能够满足组织学评价骨关节和椎间盘的要求。

复方三草滴丸防治大鼠肾性贫血实验研究

目的观察复方三草滴丸对大鼠肾性贫血的防治作用及作用机制,为复方三草滴丸的剂型改造和临床应用提供依据。方法连续15d给大鼠皮下注射庆大霉素造模,同时给予复方三草滴丸溶解后灌胃治疗,观察各组大鼠血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、外周血红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)和促红细胞生成素(EPO)水平,并作肾组织病理切片。结果复方三草滴丸能降低肾性贫血模型大鼠血BUN水平(P<0.01),提高外周血RBC及Hb水平(P<0.05),血SCr有下降,外周血EPO有提升,但均无明显差异(P>0.05),减少肾单位坏死,并减轻肾组织炎性浸润。结论复方三草滴丸对庆大霉素所致肾性贫血有一定治疗作用,其作用机制可能与延缓肾坏死、改善肾功能和增加EPO水平有关。

SD大鼠皮肤组织教学石蜡切片的改进

目的:探讨一种改善皮肤组织教学切片质量的方法。方法:取大鼠的皮肤,用Bouin液固定、脱水﹑氯仿透明﹑浸蜡﹑包埋﹑切片﹑HE染色和封片,最后在光镜下观察。结果:新方法制作的皮肤组织切片结构完整,厚薄均匀,染色恰当,形态清晰无断裂破碎现象。结论:用Bouin固定液软化,降低组织硬度,氯仿透明不引起组织收缩变形及过度硬脆。这种改进的实验方法可切实提高皮肤组织石蜡切片效果,是可行的。

一种用于宽场荧光显微镜下成像的皮肤厚片免疫荧光染色方法

目的通过改良免疫荧光染色方案,使皮肤厚切片能在宽场荧光显微镜下荧光成像。方法选择成年雄性SD大鼠5只,经Zamboni固定液灌注固定后取后肢足底皮肤,冷冻切片,片厚40μm,行神经纤维标志物PGP9.5免疫荧光染色。首先比较染色后用梯度甘油溶液透明与不经甘油透明对皮肤厚片成像深度的影响;继之在染色后甘油透明的基础上,检测染色前二甲基亚砜(DMSO)处理不同时间(10min、15min和30min)对皮肤背景信号的影响。此外,采用体视显微镜检测梯度甘油透明对切片形态的影响。最后,用上述DMSO-甘油改良染色法进一步对神经纤维其他标志物NF 200和外周蛋白分别进行染色。结果经染色后甘油透明的切片其成像深度显著大于常规染色的切片(P<0.01);在甘油透明的基础上,先用DMSO处理能有效降低皮肤背景着色,时间以15min为佳;梯度甘油处理并不会造成皮肤厚片的形态改变;DMSO-甘油改良染色法也能有效显示皮肤NF200和外周蛋白免疫反应阳性的神经纤维。结论经本改良方法染色的皮肤厚片能在宽场荧光显微镜下良好成像。

大鼠脑组织冰冻切片BrdU/DCX免疫荧光双染优化条件探讨

目的:探讨在脑组织冰冻切片上进行溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)和双皮质素(DCX)免疫荧光双染的方法,并在此基础上进一步优化。方法:选取雄性SD大鼠脑组织的冰冻切片,通过漂片法,利用大鼠抗BrdU抗体和兔抗DCX抗体两种不同种属来源的一抗在混合孵育和分开孵育的条件下分别进行免疫荧光双染,采集图像并观察实验结果。结果:混合孵育法BrdU阳性标记定位准确,但与之双标的DCX未能正常显色;先孵育抗BrdU抗体后孵育抗DCX抗体:BrdU阳性标记定位准确,但与之双标的DCX仍未能正常显色;先孵育抗DCX抗体后孵育抗BrdU抗体:BrdU和DCX均可正常显色,DCX荧光亮度偏暗,在此基础上提高抗DCX抗体的比例,荧光亮度适中,效果较理想。结论:结果表明,抗BrdU抗体和抗DCX抗体混合孵育后,DCX未能正常显色,可能与两种一抗产生拮抗有关,先孵育抗DCX抗体后孵育抗BrdU抗体是BrdU/DCX荧光双染一种较理想的方法。

清胞衣颗粒对流产后大鼠子宫组织的病理影响

目的研究并观察清胞衣颗粒对流产后大鼠子宫组织的病理影响。方法大鼠交配后至阴道涂片镜检见精子,即为怀孕大鼠;怀孕大鼠用米非司酮和米索前列醇制备SD大鼠流产模型;以正常大鼠作为正常对照组,益母草作为阳性对照药,并将流产模型大鼠分为模型组、清胞衣颗粒高、中、低剂量组,并分组给药。各组于末次给药30 min后取子宫,分析各项子宫系数,并采用HE染色的方法观察各组子宫组织病理学变化。结果通过观察不同实验组别的子宫系数和子宫HE染色切片:与正常对照组比较,模型组的子宫系数差异明显(P<0.01);与模型组比较,清胞衣颗粒组的大鼠子宫系数较小(P<0.01),没有明显的水肿、内膜增厚和中性粒细胞的炎症细胞浸润等症状。结论清胞衣颗粒对大鼠流产后子宫组织的状态有明显的修复作用,可减少子宫出血,促进恶露排出,避免细胞坏死、水肿和子宫炎症等不良反应。

冰冻切片法观察不脱钙骨组织的荧光分布

目的介绍一种不脱钙骨组织的冰冻切片法,通过观察骨和软骨内的荧光分布,探讨该方法的可行性。方法取健康成年雄性绿色荧光蛋白转基因SD大鼠膝关节,经包埋剂包埋,置于冰冻切片机中,将表面涂有合成橡胶的薄膜黏附于包埋块表面,行膝关节组织切片。荧光显微镜及光镜下观察切片组织内荧光表达及结构;并行Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫荧光染色和HE、甲苯胺蓝、茜素红染色,观察软骨及骨的结构及荧光分布特征。结果制备的大鼠膝关节冰冻切片厚度均为6μm,大体观察示关节各结构均完整切割,光镜下能清晰分辨切片软骨各层细胞形态以及软骨下骨、骨小梁排列走行。荧光显微镜下观察,可见关节周围软组织、软骨及骨组织呈绿色荧光,Ⅰ型胶原在骨组织表达,Ⅱ型胶原在软骨组织表达。HE染色及甲苯胺蓝染色能清晰分辨软骨层形态结构。茜素红染色示软骨下骨板、半月板内部组织结构完整,而且胫骨近端的皮质骨连续性存在。结论采用冰冻切片法制备不脱钙骨组织切片,可直接观察骨、软骨组织内荧光物质的分布,缩短骨组织切片的制备周期。

大鼠肠管制片方法的改进与优化

目的探讨大鼠肠管组织结构最佳石蜡制片方法。方法选择SD大鼠,对动物十二指肠、空肠中部、回肠和结肠等分别采用3种固定(直接、灌注、平铺)和2种修切(横切和纵切)相互结合的方法制作组织切片,并对结果进行比较。结果①采用直接固定法制作的小肠切片,其横切和纵切的黏膜层出现明显自溶;而大肠横切和纵切取材的黏膜层自溶均不明显,其横切制片的肠腺排列较好,而纵切制片的肠腺呈斜切面和横断面。灌注法固定小肠和大肠,黏膜层均未出现明显自溶。无论横切还是纵切,二者的肠腺均可见明显受挤压。②采用平铺法固定小肠,其横切和纵切制片均未发现自溶,但横切制片可在小肠的绒毛和肠腺处呈现组织的斜切面和横断面;纵切制片的肠绒毛和肠腺均垂直黏膜下层,排列更整齐;大肠的横切和纵切制片亦未发生组织自溶,而横切制片优于纵切,横切时肠腺均垂直黏膜下层,而纵切时肠腺可出现斜切面和横断面。结论大鼠小肠的肠管制片采用平铺固定和纵切取材制片是保留全层结构的最佳方法;制作大肠切片时,可根据实验要求,直接固定或平铺固定均可采用横切取材制片更适合保留全层结构。