Electrospun Nanofibers Containing p-Nitrophenol Imprinted Nanoparticles for the Hydrolysis of Paraoxon

p-Nitrophenol imprinted nanoparticles with a size range of 150-300 nm in diameter were prepared through miniemulsion polymerization. The imprinted polymer exhibited higher adsorption capacity for p-nitrophenol than the nonimprinted polymer. The hydrolysis of paraoxon in aqueous phase can be accelerated in the presence of the p-nitrophenol imprinted nanoparticles. The hydrolysis rate of paraoxon incorporated with the imprinted nanoparticles was 2.83×10-7 mol/（L·min）, which was about 3.7 times higher compared to the non-imprinted nanoparticles, 12.7 times higher to the spontaneous hydrolysis. The nanoparticles have been mixed with polyacrylonitrile solution and electrospun into nanofibers, which can also be used to accelerate the hydrolysis of paraoxon and conveniently separated from liquid phase for further processing.

对氧磷单克隆抗体的研制及鉴定

重氮化法使对氧磷（Ｅ６００）与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）、血蓝蛋白偶合合成人工抗原。用人工抗原Ｅ６００－ ＢＳＡ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，然后将ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞和Ｅ６００－ ＢＳＡ免疫的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠脾脏细胞融合，成功的建立了能分泌抗对氧磷单克隆抗体的杂交瘤细胞株。并分析了该细胞株的染色体及对其产生的单克隆抗体的类型、特异性、亲和力进行了鉴定和检测。上述杂交瘤细胞连续传代或冻存１０周。

胶体金免疫层析法参数的优化

研究胶体金免疫层析法中几种重要影响因素的参数优化,并以甲基对氧磷为对象进行实验。首先对现有的抗体纯化方法进行优化选择,根据SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果确定最佳抗体纯化方法,并用该法对目标抗体甲基对氧磷进行纯化。将纯化后的多克隆抗体与30nm的胶体金溶液进行标记,并对金标记抗体进行纯化。对反应溶液系统进行筛选,确定最合适的重悬液、抗原稀释液以及样品垫处理液。最终对试纸条的灵敏度,样品基质对试纸条的影响进行评测,对于目标检测物的裸眼检测限达到5μg/ml,样品的基质效应对试纸条的性能没有影响。

有机磷电化学生物传感器的研究

目的:研制有机磷农药电化学传感器,建立测定有机磷农药的高灵敏度的分析方法。为了降低电化学传感器对有机磷农药检测的高过电位和提高检测的灵敏度,用纳米金溶胶与溶胶-凝胶壳聚糖/二氧化硅杂化复合膜构成复合固酶基质,将乙酰胆碱酯酶(AChE)固定于普鲁士蓝修饰的玻碳电极表面,制备了有机磷生物传感器。方法:在1 mmol·L^(-1)氯化乙酰巯基胆碱,0.1 mol·L^(-1)磷酸盐(pH 7.5)溶液中,研究有机磷电化学传感器与有机磷农药中的对氧磷反应前后响应电流的变化,建立电化学测定有机磷农药的分析方法。结果:该传感器在电位为+0.20 V(vs.SCE)条件下对对氧磷进行检测的线性响应范围为5.0×10^(-8)～5.0×10^(-5)g·L^(-1)检出限为2.0×10^(-8)g·L^(-1)。结论:建立了快速,灵敏的测定有机磷农药的电化学分析方法。

疏肝利胆法结合西医疗法对有机磷农药中毒后毒物经胆道排泄的量化规律的研究

目的 :研究有机磷农药中毒毒物经胆道排泄的量化规律 ;疏肝利胆中药结合胆汁引流疗法对胆道排泄有机磷的影响及对血浆和门静脉血浆有机磷浓度与胆碱酯酶浓度的影响。方法 :将染毒动物分为传统治疗组(B组 )、胆汁引流组 (C组 )和疏肝利胆法结合胆汁引流组 (D组 ) ,染毒后按时动态测定对硫磷、对氧磷浓度 ,胆碱酯酶浓度 ;同时测定 C、D组动物胆汁对硫磷、对氧磷浓度 ;染毒 48小时测定门静脉血浆对硫磷、对氧磷浓度。结果 :有机磷农药中毒后确实存在胆道排毒过程 ,经疏肝利胆中药结合胆汁引流治疗组胆道排泄有机磷总量明显高于单纯胆汁引流组 ,前者血浆和门静脉对硫磷、对氧磷浓度明显低于后者 ,前者胆碱酯酶浓度明显高于后者 ,C、D组的治疗效果明显优于传统治疗组。结论 :疏肝利胆法结合胆汁引流可明显增加有机磷经胆道排泄 ,本治法为抢救有机磷农药中毒提供了一个新的治疗理论。

黄芪多糖组分-A3对对氧磷所致血管内皮功能损伤的保护作用

目的观察黄芪多糖组分-A3(APS-A3)对对氧磷(PARA)所致血管内皮功能损伤的保护作用。方法以大鼠离体胸主动脉血管环(EVAPVR)和培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为实验对象,以PARA为损伤药物,以APS-A3为保护药,检测血管内皮依赖性舒张反应(EDRR)、内皮细胞单层通透性(ECMP)及细胞培养液生化指标。结果 APS-A3剂量依赖性(0.1,1,10 mg/ml)地显著减轻了PARA(3.63μmol/L)对血管EDRR的抑制作用,降低了ECMP的增加,保护了超氧化物歧化酶(SOD)活性、阻滞了丙二醛(MDA)浓度的升高以及一氧化氮(NO)浓度的降低(均P<0.05)。结论 APS-A3对PARA所致的血管内皮功能损伤有明显的保护作用,其机制可能与APS-A3的抗氧化作用有关。

对氧磷降低RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达和胆固醇流出(英文)

三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)是体内胆固醇逆向转运的关键环节.对氧磷是广泛使用的有机磷农药的活性代谢产物.研究发现,对氧磷能增加巨噬细胞中胆固醇的堆积,但具体机制还不清楚.以RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,观察对氧磷对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达和胆固醇流出的影响并探讨其机制.结果显示,对氧磷以时间和剂量依赖的方式增加RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞中总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯水平,降低ABCA1表达和胆固醇流出,同时对氧磷降低细胞中环磷酸腺苷(cAMP)的水平及腺苷酸环化酶(AC)的活性和增加磷酸二酯酶(PDE)的活性,而cAMP的类似物双丁酰环腺苷酸(dBcAMP)能够阻断对氧磷降低ABCA1表达和部分阻断对氧磷降低胆固醇流出,对氧磷导致的cAMP水平的降低也可被AC激动剂福斯高林(Forskolin)和PDE抑制剂3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)所阻断.以上结果表明,对氧磷通过cAMP信号通路下调RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达,降低细胞内胆固醇流出和增加细胞内胆固醇堆积.

人血清对氧磷酶活性测定方法的建立及临床初步应用

目的建立对氧磷酶（ｐａｒａｏｘｏｎａｓｅ，ＰＯＮ）活性测定方法，调查正常人及肝病患者（肝癌与肝硬化）血清ＰＯＮ活性。方法ＰＯＮ活性测定用分光光度法，同时检验批内差异、批间差异、重复性、线性关系及回收率。结果正常人血清ＰＯＮ活性平均值为１５４．３ｋＵ／Ｌ，参考值范围为８２．１～２２０．６ｋＵ／Ｌ，肝病患者ＰＯＮ活性平均值为８１．１ｋＵ／Ｌ。结论肝病患者血清ＰＯＮ活性较正常人明显下降，其差别有显著性（Ｐ＜０．０１）。

对氧磷对血管内皮细胞的损伤作用及机制探讨

目的为探讨有机磷酸酯对血管内皮细胞和血管内皮功能是否有直接的损伤作用。方法用不同浓度的对氧磷分别与大鼠离体血管环和培养的人脐静脉单层内皮细胞共孵不同的时间,以乙酰胆碱引起的血管内皮依赖性舒张反应和单层内皮细胞通透性等为观察指标,检测对氧磷对血管内皮的损伤作用。结果对氧磷(36.3nmol/L^36.3μmol/L)与血管环共孵,呈浓度和时间依赖性地显著抑制乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张反应,而对硝普钠引起的非内皮依赖性舒张反应没有明显的影响。对氧磷与内皮细胞共孵不同的时间,呈浓度和时间依赖性地显著增加单层内皮细胞的通透性。对氧磷在损伤血管内皮的同时也导致了血管组织及细胞培养液中一氧化氮浓度和超氧化物歧化酶活性的降低、脂质过氧化代谢产物丙二醛浓度的升高。加入左旋精氨酸能部分拮抗对氧磷对血管内皮功能的损伤作用,用阿托品预处理则不影响对氧磷的作用。结论该研究提示对氧磷对血管内皮细胞有直接损伤作用,其机制可能与对氧磷诱发氧化应激,进而导致脂质过氧化反应发生和增加内皮细胞的通透性有关。

兔血清中对氧磷酶的提取和纯化

目的从兔血清中提纯对氧磷酶并纯化。方法采用液相色谱的方法,从兔血清中提取对氧磷酶并进行部分纯化。比色法检测待测样品中对氧磷酶的活性,垂直板电泳的方法检测纯化的对氧磷酶的纯度。采用体外解毒的方法,以1.5倍的LD50的敌敌畏(75 mg/kg)同对氧磷酶粗酶(10 U/kg)混合后,给予小鼠腹腔注射,初步验证对氧磷酶的解毒活性。结果纯化后的对氧磷酶比活性为11.54 IU/mg,较纯化前的比活性(0.058 IU/mg)提高了近200倍,产出率约为10%。部分纯化的对氧磷酶对于有机磷类农药有较好的催化水解作用。染毒大鼠的死亡率为0。结论采用液相色谱的方法,可以从兔血清中部分提取并纯化对氧磷酶。

卡托普利对对氧磷所致血管内皮损伤的保护作用及机制探讨

目的探讨卡托普利对对氧磷(paraoxon)所致血管内皮功能损伤的保护作用及其机制。方法用大鼠离体血管环和培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为实验模型,以血管内皮依赖性舒张(EDR)反应、HUVEC的通透性、内皮细胞活力、内皮细胞的形态学改变及生化参数为指标,用对氧磷作为损伤因子,用血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)卡托普利(captopril)作为保护药,观察了对氧磷对内皮的损伤作用及卡托普利的保护作用。用非巯基类ACEI(依那普利拉,enalaprilat)和抗氧化酶为对照,探讨了卡托普利对对氧磷所致血管内皮损伤的保护作用的机制。结果对氧磷(3.63μmol.L-1)与血管环或内皮细胞共孵30 min,显著性地抑制了血管EDR反应和增加了单层内皮细胞的通透性。卡托普利与血管环共孵30 min,剂量依赖性(0.1、1.0、10μmol.L-1)地显减轻了对氧磷(3.63μmol.L-1)对血管EDR的抑制作用、保护了培养的HUVEC中NO的释放。对氧磷和卡托普利对硝普钠(SNP)诱导的非内皮依赖性舒张反应没有影响。卡托普利(10μmol.L-1)显著性地阻滞了对氧磷所致的单层HU-VEC通透性的增加以及内皮细胞活力的降低、保护了超氧化物歧化酶(SOD)活性、阻滞了丙二醛(MDA)浓度的升高。超氧化物歧化酶、过氧化物酶(catalase)有与卡托普利相似的抗对氧磷损伤作用,但依那普利拉对对氧磷所致损伤无明显保护作用,巯基抑制剂(4-羟基汞苯甲酸普罗比妥钠,cystain)能显著性拮抗卡托普利的保护作用。结论对氧磷能直接损伤血管内皮细胞,卡托普利对氧磷所致的血管内皮细胞损伤有显著性保护作用,其机制可能主要依赖于其所含的巯基的抗氧化作用,而非依赖于抑制血管紧张素转化酶。

便携式检测仪检测呋喃丹和对氧磷的研究

基于胆碱酯酶被抑制前后反应速率不同的原理,研制了便携式荧光探针农药残留检测仪,并对检测条件进行了优化,获得呋喃丹和对氧磷的检出限分别为3.0和12 μg/L,线性范围分别为3.0～37.8μg/L和12～350 μg/L.该检测仪具有操作简便,检测快速,可用于现场检测等优点,在对蔬菜和水果样品检测中,获得呋喃丹的回收率在87%～114%之间.

对氧磷酶1与2型糖尿病合并冠心病的关系

目的 :探讨对氧磷酶 -1(PON -1)在2型糖尿病 (T2DM )合并冠心病 (CAD)中的作用。方法 :应用聚合酶链式反应 -限制性片段长度多态性 (PCR -RFLP)方法鉴定天津地区汉族人的PON -1Q/R基因多态性的基因型 ,并测定血清PON -1活性。结果 :单纯T2DM组、单纯CAD组、T2DM合并CAD组和正常对照组PON -1Q/R基因多态性的基因型分布及等位基因频率差别无统计学意义(χ2分别为4 95和5 27,P>0.05)。前3组血清的PON -1活性均显著低于正常对照组(P<0.05) ,其中T2DM合并CAD组血清PON -1活性亦显著低于单纯CAD组和T2DM组(P<0.05)。结论 :PON_1Q/R基因多态性与T2DM并发CAD无相关性 ,而高血压病史和血清PON -1活性降低与T2DM并发CAD有关。提高血清PON

纳米氧化镁的制备及降解性能

以六水氯化镁和氨水为主要原料制备纳米氧化镁,通过正交试验考察了Mg2+浓度、分散剂PEG-400用量、反应温度、陈化时间和缓冲剂冰醋酸的用量5个因素对晶粒粒径的影响,确定了纳米氧化镁的最佳工艺参数:缓冲剂冰醋酸用量为0.015 mol,Mg2+浓度为0.4 mol/L,分散剂用量为5 mL,反应温度为60℃,反应时间为0 h,煅烧温度为550℃,煅烧时间为2 h。分析了单因素对纳米氧化镁晶粒的影响。选用对氧磷测试纳米氧化镁的吸附降解性,1μL的对氧磷在5 min内被0.4 g氧化镁降解吸附了99.19%。1 g纳米氧化镁可降解吸附对氧磷194.9 mg。

基于SERS与PCA-SLR实现乙基对氧磷定量检测

利用表面增强拉曼光谱(SERS),结合主成分分析(PCA)与分段线性回归(SLR)算法实现乙基对氧磷的定量检测。首先采集820～1 630cm-1乙基对氧磷溶液SERS,并对820～1 630cm-1(全范围)与845～875cm-1(特征范围)光谱分别进行标准正态变换(SNV)、多元散射校正(MSC)、一阶导数绝对值、二阶导数等预处理;然后经PCA降维后利用SLR建立乙基对氧磷溶液浓度预测模型。通过对比不同模型的预测准确度,发现特征范围光谱采用MSC预处理后所建立的模型为最优,总体预测均方误差值(RMSEP)为0.33,满足乙基对氧磷定量检测的需要。

纳米氧化镁催化降解对氧磷实验研究

利用醇盐水解法制备了纳米氧化镁,并通过XRD、TEM、BET等手段对其基本结构性能进行了检测;以对氧磷为研究对象,对纳米氧化镁的催化降解性能进行了评价,考察了纳米氧化镁投加量、粒径、反应时间、反应温度以及光照等条件对其催化降解性能的影响。结果表明,所制备的纳米氧化镁为细长针状晶体,粒径为8.5nm,BET比表面积为163.23m^2/g;纳米氧化镁对对氧磷的催化降解效果较好,为非光敏催化剂;温度升高有利于提高纳米氧化镁的催化降解效率;50mL浓度为20μg/L的对氧磷甲苯溶液,投加0.5g、8.5nm的纳米氧化镁,反应时间5min时,降解率可达到77.9%,60min时降解率达到99.6%。

染料木素对对氧磷损伤大鼠胸主动脉内皮依赖性舒张功能的保护作用

目的:探讨染料木素(genistein,GST)对对氧磷(paraoxon,PO)损伤血管功能的保护作用。方法:取雄性SD大鼠胸主动脉制备离体血管环,测量并记录血管环张力。实验分组如下:1)溶媒对照组,用0.1%的二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)预孵育血管环30 min后,检测大鼠胸主动脉环对乙酰胆碱(acetylcholine,Ach;1×10-9～1×10-5 mol/L)诱导的内皮依赖性舒张(endothelium-dependent relaxation,EDR)功能及硝普钠(sodiumnitroprusside,SN P;1×10-6 mol/L)诱导的非内皮依赖性舒张功能的反应;2)各浓度PO处理组,分别用不同浓度的PO(4.05×10-9～4.05×10-5 mol/L)预孵育血管环30 min后,检测大鼠胸主动脉环对Ach及SN P诱导的血管舒张功能的反应;3)PO+GST处理组,分别用PO(4.05×10-6 mol/L)与不同浓度的GST(1,3,10,30或100μmol/L)共同孵育血管环30 min后,检测大鼠胸主动脉环对Ach及SN P诱导的血管舒张功能的反应及对苯肾上腺素(phenyllphrine,PE;1×10-6 mol/L)诱导的血管收缩功能的反应。结果:PO(4.05×10-9～4.05×10-5 mol/L)可浓度依赖性地抑制Ach诱导的EDR反应,对SNP诱导的非内皮依赖性舒张功能没有影响。GST(10,30或100μmol/L)可减轻PO(4.05×10-6 mol/L)对EDR的抑制作用,且GST浓度为10～30μmol/L时,该作用具有剂量效应;但GST对SNP诱导的非内皮依赖性舒张反应没有影响。各浓度GST与PO共同孵育血管环,可浓度依赖性地抑制PE诱导的血管收缩。结论:GST可抑制PO诱导的EDR受损,并抑制PE诱导的血管收缩效应。

有机膦半抗原诱导的抗神经性毒剂单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :制备新化合物 1 羟基 1 对胺基苯基甲磷酸单频哪基醇酯 (P4 )的单克隆抗体 (mAb)。方法 :以P4为半抗原 ,与血蓝蛋白 (LPH)化学偶联制备人工抗原 (P4 LPH) ,并以其免疫BALB/c小鼠 ,制备抗P4的mAb。用竞争抑制酶免疫分析法 ,测定mAb对梭曼等 7种配体的结合活性 ,结果以mAb与P4 BSA的结合被抑制 5 0 %时的配体浓度 (IC50 ) ,表示mAb的交叉反应性。结果 :建立了 9株对P4 BSA阳性反应的mAb ,它们分属 3种Ig亚类 ;6株 (2B2、3A10、3D5、4F1、6C9和 6H4 )为IgG1,1株 (3B9)为IgG2b ,2株 (1B3和 6H5 )为IgM。 9株mAb中 ,8株具有与半抗原P4的结合的特异性。4株 (1B3、2B2、3D5和 4F1)具有梭曼结合活性 ,其IC50 值分别为 10 -3 、10 -3 、10 -5和 10 -6mol/L ;1株 (4F1)具有与对氧磷结合的特异性 ,其IC50 值为 10 -5mol/L。 4株腹水的mAb鼠滴度高 ,分别达 10 -6(1B3和 2B2 )和 10 -8(3D5和 4F1)。结论 :用新的半抗原P4成功地制得抗梭曼和抗对氧磷的mAb ,可用于梭曼抗体酶。

OX-LDL和PON-1与老年动脉粥样硬化性脑梗死的关系

目的:研究氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)水平和对氧磷酯酶-1(PON-1)活性对动脉粥样硬化性血栓性脑梗死(ATCI)的致病和保护意义。方法:对146例ATCI患者(ATCI组)应用ELISA双抗体夹心法测定血清OX-LDL水平,紫外分光光度法测定血清PON-1活性,同时测定其他血脂项目和血糖水平,并与105例健康体检者(对照组)比较。结果:ATCI组血清OX-LDL水平高于对照组(P<0.01),PON-1活性低于对照组(P<0.01),且ATCI组血清OX-LDL水平与TG、脂蛋白a犤Lp(a)犦、PON-1活性水平、年龄相关,且与梗死面积、部位有关;其PON-1活性亦与OX-LDL水平、年龄相关,且与梗死面积、部位有关。结论:血清OX-LDL水平的升高和PON-1活性的下降与ATCI有关,对此两者水平的监测和早期干预可能有助于预防ATCI的发生。

经皮冠状动脉介入术术后病人CYP2C19*2、CYP2C19*3和PON1基因多态性与氯吡格雷血药浓度及疗效的相关性分析

目的探讨经皮冠状动脉介入术(PCI)术后病人CYP2C19*2、CYP2C19*3及PON1基因多态性与氯吡格雷血药浓度及疗效的相关性。方法采用定时定量焦磷酸测序技术检测CYP2C19*2、CYP2C19*3及PON1基因型。使用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)法,以艾司唑仑为内标,测定氯吡格雷、羧酸氯吡格雷(SR26334)血药浓度。结果共纳入51例PCI术后病人,结果显示CYP2C19快代谢型血药浓度(1.09±0.61)μg/mL与慢代谢型SR26334血药浓度(1.54±0.48)μg/mL之间差异有统计学意义(P=0.038 9),PON1(126C>G)野生型(CC型)病人SR26334血药浓度(1.45±0.63)μg/mL与突变型(CG+GG型)病人SR26334血药浓度(1.09±0.32)μg/mL差异有统计学意义(P=0.0408)。SR26334峰浓度与终点事件相关性分析中可见,正常组病人血药浓度(1.51±0.48)μg/mL VS心血管事件组病人血药浓度(1.06±0.65)μg/mL差异有统计学意义(P=0.0481),CYP2C19基因型与终点事件的发生无明显相关。结论基因检测和血药浓度检测可为ACS病人PCI术后个体化抗血小板治疗方案的制订提供依据,可作为临床药师开展药学服务的切入点之一。