小鼠肌肉损伤修复不同时间内miR-206及其靶基因PAX7的变化规律

为研究小鼠肌肉损伤修复不同时间内miR-206及其靶基因PAX7的变化规律,以雄性8周龄昆明鼠为实验对象,利用盐酸布比卡因注射小鼠胫骨前肌制备肌肉损伤及修复模型,通过qRT-PCR技术检测肌肉组织中PAX7 mRNA和miR-206表达,利用Western-blot技术检测PAX7蛋白质表达变化水平.结果表明,与对照组相比,注射盐酸布比卡因后,在修复4~8 h小鼠肌肉组织中,miR-206表达逐渐降低.随着时间的延长,在修复24~72 h范围内,miR-206表达量逐渐增高.生物信息学预测发现,PAX7是miR-206调控的靶基因.检测小鼠肌肉损伤修复过程中PAX7表达发现,在肌肉修复4~8 h PAX7基因表达水平逐渐升高;而在修复24~72 h范围内其表达水平显著下降.由此可见,在小鼠肌肉修复过程中,PAX7基因表达先升高,可以满足损伤修复时骨骼肌卫星细胞的激活及增殖所需,随着修复时间的延长,miR-206的高表达可加快肌肉修复进程.研究结果可为miR-206和PAX7在肌肉损伤修复中的作用提供实验基础.

钝挫伤及力竭运动对大鼠骨骼肌卫星细胞激活及Pax7/CBF1/DAPT含量的影响

目的:研究钝挫伤及力竭运动对大鼠骨骼肌卫星细胞激活及Pax7/CBF1/DAPT含量的影响,探索损伤修复的机制。方法:取7周龄雄性SD大鼠24只,分为4组,每组6只:安静对照组(C组);力竭运动即刻组(E0组);力竭运动后24 h组(E24组);力竭运动后48 h组(E48组)。另取18只SD大鼠,分为3组,每组6只:钝挫伤即刻组(Do组);钝挫伤后24 h组(D24组);钝挫伤后48 h组(D48组)。各组分别于安静状态、力竭运动后和钝挫伤后不同时间点,宰杀取血,分离血清。并取下右侧腓肠肌,将腓肠肌分为二份,一份立即进行细胞培养实验,另一份和血清一起在-80℃冰箱保存,用ELISA法检测Pax7、CBF1、DAPT的含量变化。另取新生3日龄鼠3只,宰杀后同样取右侧腓肠肌进行细胞培养实验。结果:(1)体外培养结果显示:新生鼠1天后即可见到梭形卫星细胞,其它各组的肌卫星细胞增长速度较慢,到第3天、第5天时各组开始大量增殖梭形细胞,且一直保持增殖良好并传代,第7天仍有较好的长势,且出现部分融合和微管。各组比较显示,安静对照组未见卫星细胞增殖;新生鼠卫星细胞数量最高,增殖速度也最快;而钝挫伤组的肌卫星细胞数量及增殖速度显著高于力竭运动组。(2)ELISA结果显示:力竭运动组和钝挫伤组各组骨骼肌、血清中CBF1和Pax7的含量与安静对照组相比均显著上调(P<0.05),其中D0组的CBF1含量差异极显著(P<0.01),明显高于其他各组(P<0.05);D24、D48两组的Pax7含量亦明显高于其他各组(P<0.05)。而DAPT在各组骨骼肌、血清中的含量与安静对照组相比均显著下调(P<0.05),其中D0组DAPT差异极显著(P<0.01)且明显低于其他各组(P<0.05)。但力竭运动各组(E0、E24、E48)之间无显著性差异。结论:(1)钝挫伤及力竭运动可使肌卫星细胞激活、增殖分化,并且钝挫伤导致的肌卫星细胞的激活数量明显高于力竭运动组,可能由于钝挫伤的刺激更强所致。(2)钝挫伤和力竭运动可以使大鼠骨骼肌和血清Pax7和CBF1的含量上升,但下调DAPT的含量。Pax7和CBF1可能在骨骼肌卫星细胞激活及骨骼肌损伤修复中起着正向调节的作用,而DAPT可能起着负向调节作用。

湘西黄牛Myf5和Pax7基因的SNPs检测及其与体尺性状的关联分析

本研究旨在检测湘西黄牛Myf5和Pax7基因的单核苷酸多态性(SNP),探讨湘西黄牛多态性位点的群体遗传特征,寻找与生长发育相关的分子标记。采用PCR和直接测序技术筛查湘西黄牛Myf5基因第2内含子和Pax7基因第3外显子的SNPs;以217头湘西黄牛为研究对象,采用PCR-RFLP方法对群体进行遗传多态性分析,运用最小二乘线性模型进行基因型与体尺性状的关联分析。结果表明,在湘西黄牛Myf5基因第2内含子中检测到9个SNPs,其中7个是本研究新发现的SNPs;在Pax7基因第3外显子检测到1个SNP。群体遗传多态性分析结果显示,湘西黄牛群体中Myf5基因g.1948A>G位点的AA、AG和GG基因型频率分别为0.046 1、0.235 0和0.718 9;A和G等位基因频率分别为0.163 6和0.836 4。Pax7基因g.31G>A位点只检测到AG和GG 2种基因型,基因型频率分别为0.073 7和0.926 3;A和G等位基因频率分别为0.036 9和0.963 1。这2个位点均处于低度多态,且达到了Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。关联分析结果表明,Myf5基因g.1948A>G位点的AA和AG型个体的体重显著高于GG型个体的体重(P<0.05),A等位基因对体重为正效应;而各基因型间的体高、体长和胸围的差异均不显著(P>0.05)。结果提示,湘西黄牛Myf5基因的SNP位点较多,g.1948A>G位点可能为湘西黄牛体重性状的分子遗传标记位点。

鸡、鹌鹑和杂交种胚胎期生肌调节因子MyoG、Pax7表达规律的研究

为了研究MyoG、Pax7在鸡、鹌鹑和杂交种胚胎期的表达规律,试验采用RT-PCR技术对MyoG、Pax7两个基因在鸡、鹌鹑和杂交种胚胎期不同时间点的表达量进行了检测。结果发现:Pax7在鸡、鹌鹑和杂交种胚胎期的表达特点相似;MyoG在杂交种上的表达特点与鸡和鹌鹑不同,这种不同可能与杂交种胚胎期高死亡率有关。

Pax7基因在C 2C12细胞内的表达及诱导失活(简报)

配对框(Paired box)首先是在果蝇的分节基因中发现的一段DNA保守序列,编码能与DNA特异结合的一个蛋白质结构域。这些序列在进化中有一定的保守性,在许多种生物基因组内存在,其中包括小鼠和人。至今为止,在小鼠中分离到九个含配对框的Pax基因,按基因发现时序,分别定名为Pax 1至Pax 9。Pax 7是其中的一个成员,它不但含有配对框,还含有八肽结构(Octapeptide)

Pax7和Pax3在胎儿咽、食管肌层中的表达

目的：探讨人胎儿咽、食管肌层中Pax7、Pax3表达及其空间分布.方法：采用免疫组织化学SABC法及蛋白印迹法对20例胎儿咽、食管的Pax7、Pax3表达进行观察.结果： Pax7定位咽、食管上、中段肌层,并主要表达在外部纵行肌,由上至下逐渐减少,至食管下段消失.而Pax3则在咽、食管阴性表达.结论：胎儿食管骨骼肌的分化沿着由上至食管下端的顺序分化,Pax7存于胎儿食管上、中段,支持了Pax7阳性细胞是食管骨骼肌肌祖细胞的假设.

Pax7基因在猪不同组织中的表达特征及其在背最长肌中的发育性表达规律研究

本试验旨在探究Pax7(paired box 7)基因在猪不同组织中的表达特征及其在背最长肌中的发育性表达规律。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术和Western blotting技术检测了Pax7基因在1日龄马身猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、小肠、下丘脑、小脑、背最长肌、腰大肌、股二头肌12种组织中的mRNA和蛋白质表达谱,以及马身猪和大白猪从出生1日龄到180日龄7个发育阶段(1、30、60、90、120、150、180日龄)背最长肌中的发育性表达规律。结果表明,Pax7基因mRNA在背最长肌、腰大肌、股二头肌、下丘脑和小脑组织中表达,而Pax7蛋白仅在背最长肌、腰大肌和股二头肌中表达。背最长肌中Pax7基因mRNA和蛋白质的发育性表达趋势在马身猪和大白猪中基本一致。在mRNA水平上,30日龄的表达量最高,极显著高于其他日龄(P<0.01);1日龄的表达量次之;其他日龄维持低表达的稳定状态。Pax7蛋白表达量在1日龄时最高,极显著高于其他日龄(P<0.01);30日龄次之;其他日龄维持低表达的稳定状态。从出生1日龄到180日龄,马身猪背最长肌中Pax7蛋白的表达量均显著或极显著地高于大白猪(P<0.05;P<0.01)。Pax7基因的表达与组织、日龄及品种的遗传背景有关。

浙东白鹅骨骼肌发育相关因子MRFs,Pax3和Pax7基因的表达规律

生肌调节因子家族(myogenic regulatory factors,MRFs)在胚胎期和出壳早期的骨骼肌分化过程中发挥重要作用;PAX家族中的2个转录因子Pax3和Pax7,被认为在肌纤维的生长发育过程中,指导众多过程的形成。在鹅胚胎发育过程中这些基因的表达变化规律及在肌肉发育过程中的表达变化规律研究甚少。以浙东白鹅Anser cygnoides domestica‘Zhedong’为研究对象,提取RNA合成c DNA并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)研究MRFs,Pax3和Pax7在鹅胚胎期(7,11,15,19,23,27 d胚龄)及出生早期(出雏后7日龄)的表达规律,并分析其表达与胸、腿肌发育的相关性。结果显示:MRFs,Pax3和Pax7基因均和鹅骨骼肌的发育相关,并且存在不同的表达规律。MRFs和Pax7基因在11~15 d胚龄期间出现表达高峰期,而Pax3基因在7 d胚龄即出现高表达,随后表达下降。通过分析表明:这些基因的表达规律均和它们在肌肉发育过程中的作用密切吻合。

草鱼PAX7基因的克隆、序列分析及组织表达

配对盒基因7(Paired box 7 gene,PAX7)在神经嵴发育及原肠胚形成、肌肉自主更新与再生中扮演着重要角色,对细胞更新、分化、凋亡等起着十分重要的调控作用。参照Gen Bank中斑马鱼、线鳍电鳗和虹鳟等物种PAX7序列的保守区域设计简并引物,进行反转录PCR扩增,获得草鱼PAX7基因的部分序列,长645 bp,编码214个氨基酸,包含编码128个氨基酸的PAX7蛋白配对框(PD)。氨基酸序列比对结果发现,草鱼PAX7基因与其他物种具有高度的相似性,与斑马鱼、线鳍电鳗、日本青鳉、金头鲷、虹鳟、大西洋鲑、北极嘉鱼、人、野牦牛、褐家鼠和小鼠的PAX7氨基酸序列同源性可达90%-97%;各物种PAX7部分氨基酸序列的系统进化树结果显示,草鱼与斑马鱼、日本青鳉、北极嘉鱼、大西洋鲑、虹鳟、线鳍电鳗和金头鲷聚为一大支,小鼠、褐家鼠,野牦牛与人类另聚一支,所得结果符合物种传统分类进化地位。运用实时荧光定量PCR检测草鱼PAX7基因在各组织中的差异表达,结果显示PAX7基因在肌肉中表达量最高;其次是前肠和皮肤,在心、脑、肾和肝中仅少量表达,所得结果与该基因的功能相一致。

委中、肾俞穴不同电针顺序对布比卡因致大鼠多裂肌损伤后形态学及Pax7、成肌分化抗原表达的影响

目的:观察委中、肾俞穴不同电针顺序对布比卡因(bupivacaine, BPVC)致大鼠腰多裂肌损伤后组织形态学及Pax-7、成肌分化抗原(Myogenic Differentiation Antigen, Myod)表达的影响。方法:将32只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、委中-肾俞组和肾俞-委中组,每组8只。模型组、委中-肾俞组和肾俞-委中组采用0.5%BPVC肌内注射复制大鼠多裂肌损伤模型;对照组予等量0.9%生理盐水注射。对照组与模型组不进行针刺干预,委中-肾俞组和肾俞-委中组分别依次针刺委中、肾俞和肾俞、委中穴,针刺后连接电针,波形选用疏密波,电针频率采用2 Hz/10 Hz,电流强度选择1 mA,持续治疗20 min,每天治疗1次,共治疗7 d。电针干预7 d后,通过苏木精-伊红(HE)染色观察损伤部位多裂肌形态学变化,并分别采用Western-blot和RT-PCR法检测多裂肌中Pax7和Myod蛋白及基因的表达。结果:HE显示,治疗结束后,对照组可见部分肌纤维修复,但巨噬细胞数量仍较多;委中-肾俞组和肾俞-委中组可出现较多新生的肌纤维,巨噬细胞明显减少,肌纤维破坏程度较模型组低。治疗后,针刺组与模型组相比在肌纤维横截面积(Cross Sectional Area, CSA)有统计学差异(P<0.05),肾俞-委中组与委中-肾俞组两组间无明显统计学差异(P>0.05),但肾俞-委中组有高于委中-肾俞组的趋势。模型组Pax-7和Myod蛋白及mRNA表达与对照组相比均有统计学差异(P<0.05),针刺组Pax-7和Myod蛋白及mRNA表达与模型组相比均有统计学差异(P<0.01或P<0.05),肾俞-委中组Pax-7和Myod蛋白表达优于委中-肾俞组(P<0.05或P<0.01),而在mRNA表达方面无明显统计学差异(P>0.05)。结论:在应用委中穴和肾俞穴治疗腰痛时,先取肾俞后取委中可能疗效较好,但仍需要进一步临床验证,且其确切机制也有待揭示。

绵羊Pax7基因慢病毒示踪载体的构建与表达检测

为了探讨是否可以利用Pax7基因诱导绵羊间充质细胞为成肌细胞,试验采用RT-PCR技术从绵羊肌肉中成功克隆Pax7基因的编码区序列(CDS)后,将其连接到酶切后的空表达载体pTetOn3-DsRed上,构建诱导型慢病毒示踪载体pTetOn3-DsRed-Pax7。通过脂质体法将诱导型慢病毒示踪载体pTetOn3-DsRed-Pax7与辅助包装载体VSV-G、px和pMD共转染到293T细胞中,获得病毒上清液后侵染293T细胞,利用Western-blot技术检测侵染后细胞中Pax7基因的表达情况,验证所构建载体的有效性及Pax7基因的表达活性。结果表明:试验成功克隆得到绵羊Pax7基因的CDS及构建出诱导型慢病毒示踪载体pTetOn3-DsRed-Pax7;病毒侵染后,靶细胞经绿光(532 nm)照射可表达红色荧光;与空白对照细胞中Pax7基因的表达量相比,侵染诱导型慢病毒示踪载体pTetOn3-DsRed-Pax7的293T细胞中Pax7基因的表达量明显上升,且加入诱导物强力霉素后Pax7基因表达量显著高于未添加强力霉素的细胞。说明试验已成功构建出特异性表达绵羊Pax7基因的诱导型慢病毒示踪载体pTetOn3-DsRed-Pax7。

Pax3和Pax7在胚胎发育早期及神经嵴形成中的作用

配对盒(Paired box,Pax)基因是一个高度保守的转录因子基因家族,在胚胎模式化和器官发生中起关键作用。Pax3和Pax7具有相似的蛋白质结构和生物学功能,同属于Pax基因第三亚家族,在中枢神经系统、神经嵴和骨骼肌的发育过程中表达。研究表明,Pax3和Pax7通过整合来自Wnts、骨形成蛋白(BMPs)和成纤维细胞生长因子(FGFs)的信号联合调控神经嵴的发生发育。对不同的脊椎动物发育模型的研究共同阐明了神经嵴基因调控网络(NC-GRN)中涉及Pax3和Pax7基因的分子机制。针对Pax3和Pax7基因的生物学特性及其在胚胎发育早期的功能,特别是二者对神经嵴发生发育的调控机制的最新研究进展作简要概述,为Pax3和Pax7相关研究提供理论基础,也为神经嵴异常相关疾病提供新的研究方向。

肉牛miR-133a通过抑制PAX7促进成肌细胞分化研究

旨在探究bta-miR-133a参与肉牛调控背最长肌发育的分子机制。通过采集布莱凯特黑牛和鲁西黄牛的背最长肌进行sRNA建库,数据筛选与肉牛骨骼肌发育相关的bta-miR-133a,采用生物信息学分析软件鉴定其保守性并预测其靶基因,对其靶基因进行GO富集分析和KEGG通路富集分析,并通过双荧光素酶报告试验对预测的潜在靶基因进行验证;选取C2C12细胞进行功能验证,过表达和敲除bta-miR-133a,48 h后2%马血清诱导观察肌管分化过程,CCK-8检测细胞增殖率,实时荧光定量PCR检测细胞增殖分化标记基因PCNA、CCND1、Myh1、Myod1以及靶基因的表达量。结果表明,bta-miR-133a的成熟序列在各物种间高度保守,靶基因预测为PAX7,经双荧光素酶报告试验验证,bta-miR-133a与PAX7存在靶标关系。GO富集和KEGG通路分析结果显示,预测靶基因显著富集于肌动蛋白细胞骨架组织的调节、经典Wnt信号通路的负调控、肌动蛋白丝结合等GO条目中和MAPK、Ras、FoxO等与肌肉发育相关的信号通路中。过表达bta-miR-133a促进肌管分化(P<0.01),在72 h,降低细胞的增殖率(P<0.01),抑制靶基因PAX7的表达(P<0.01);敲除bta-miR-133a则抑制肌管分化(P<0.01),在72 h时,增加细胞的增殖率(P<0.05),促进靶基因PAX7表达(P<0.01)。在细胞增殖方面,过表达bta-miR-133a降低其标记基因PCNA、CCND1的表达量(P<0.05),敲除组则相反;在细胞分化方面,过表达bta-miR-133a增加其标记基因Myh1、Myod1的表达量(P<0.01),敲除组则相反。综上表明,bta-miR-133a可能通过靶向负调控PAX7的表达抑制成肌细胞增殖、促进其分化而参与背最长肌的发育过程。

bta-miR-1通过调控PAX7参与骨骼肌发育的功能研究

本研究旨在探究牛miR-1(bta-miR-1)参与调控肉牛骨骼肌发育的分子机制。通过采集布莱凯特黑牛和鲁西黄牛的背最长肌进行sRNA建库,筛选与肉牛骨骼肌发育相关的bta-miR-1,采用生物信息学方法鉴定其保守性和预测其靶基因PAX7;为验证bta-miR-1的功能:在成肌细胞中转染bta-miR-1模拟剂/阴性对照(bta-miR-1 mimic/NC)和bta-miR-1抑制剂/阴性对照(bta-miR-1 inhibitor/NC),48 h后用2%马血清诱导观察肌管分化过程,CCK-8检测细胞增殖率,qRT-PCR检测细胞增殖分化标记基因PCNA、CDK2、Myog、Myod1以及靶基因PAX7的表达量。结果表明,转染bta-miR-1mimic促进肌管分化,降低细胞的增殖率(P<0.01),抑制靶基因PAX7的表达(P<0.01),转染bta-miR-1 inhibitor则抑制肌管分化,增加细胞的增殖率(P<0.05),促进靶基因PAX7表达(P<0.01);在细胞增殖方面,转染bta-miR-1 mimic降低其标记基因PCNA、CDK2的表达量(P<0.01),抑制组则相反;在细胞分化方面,转染bta-miR-1 mimic增加其标记基因Myog、Myod1的表达量(P<0.01),抑制组则相反。综上,bta-miR-1可能通过负调控靶基因PAX7促进成肌细胞分化、抑制成肌细胞增殖而参与骨骼肌的发育过程。

中国东北地区人群非综合征唇腭裂与PAX7基因的相关性

目的探讨rs742071、rs7632427和rs12543318 3个单核苷酸多态(SNP)位点与非综合征唇腭裂(NSCL/P)发生的相关性。方法收集东北地区NSCL/P患者258例,患者父亲164例,患者母亲195例,共134个完整核心家系和300例正常对照样品,用PCR-RFLP方法进行基因分型,对分型结果用SPSS统计学软件进行统计分析。结果 PAX7基因的rs742071的GT基因型和T等位基因在病例对照组中分布有统计学差异,并且FBAT分析结果显示T等位基因在核心家系中发生了过渡传递。rs7632427和rs12543318的基因分型结果无统计学差异。结论 rs742071与中国东北地区人群NSCL/P的发生相关。

失神经萎缩肌组织中卫星细胞池的耗竭与Pax7的相关性研究

目的探讨长期失神经骨骼肌在反复增殖分化过程中,肌卫星细胞池耗竭可能的信号通路。方法选用2月龄SD雄性大鼠9只,体重180～200g。以大鼠右侧为实验侧,制备腓肠肌失神经支配模型;左侧为对照侧,分离显示坐骨神经后缝合肌肉皮肤。观察大鼠一般情况,于术后3、7、21d各取3只大鼠,切取两侧腓肠肌进行大体观察后,行Pax7和MyoD免疫荧光染色观察及mRNA表达检测。结果9只大鼠术后均存活。实验侧后肢僵直,活动受限;对照侧肢体活动自如。术后各时间点实验侧腓肠肌均出现不同程度萎缩;对照侧腓肠肌较饱满有光泽。荧光染色观察显示,随失神经时间延长,实验侧MyoD阳性细胞数逐渐增多,21d达高峰,与对照侧比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验侧Pax7阳性细胞逐渐降低,3、7d与对照侧比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验侧MyoDmRNA表达逐渐升高,21d达高峰,各时间点实验侧均显著高于对照侧(P<0.05);实验侧Pax7mRNA表达逐渐降低,仅出现于3、7d,与对照侧比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论长期失神经肌萎缩引发的Pax7短暂上调提示卫星细胞池耗竭的原因之一在于细胞难以返回静止状态。

横纹肌肉瘤中PAX3-FKHR和PAX7-FKHR融合基因的表达

目的 运用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测石蜡包埋横纹肌肉瘤中PAX3 FKHR和PAX7 FKHR融合基因mRNA的表达并探讨其在横纹肌肉瘤病理诊断中的价值。方法 用一步法RT PCR技术对 15例石蜡包埋横纹肌肉瘤和 15例非横纹肌源性小圆细胞肿瘤 (对照组 )的PAX3 FKHR和PAX7 FKHR融合基因mRNA的表达进行了检测。结果 6例腺泡型横纹肌肉瘤中4例有PAX3 FKHR或PAX7 FKHR融合基因mRNA的表达 (3例表达PAX3 FKHR融合基因 ,1例表达PAX7 FKHR融合基因 ) ,8例胚胎型横纹肌肉瘤、1例多形型横纹肌肉瘤及 15例对照组肿瘤组织中无PAX3 FKHR和PAX7 FKHR融合基因表达。结论 检测横纹肌肉瘤组织中PAX3 FKHR和PAX7 FKHR融合基因mRNA的表达有助于横纹肌肉瘤的诊断和分型。

Pax7、MyoD及MyoG基因用于推断损伤时间的初步研究

目的采用免疫荧光染色法研究大鼠挫伤骨骼肌中Pax7、MyoD和MyoG基因相对表达量与损伤时间之间的关系。方法 84只健康成年雄性SD大鼠(200±5g)随机分为14组(n=6):空白对照组、损伤0h、4h、8h、12h、24h、36h、48h、60h、3d、4d、5d、6d、7d组,采用改良自由落体法制作大鼠骨骼肌挫伤模型,分别在各损伤时间点腹腔过量注射戊巴比妥钠(300mg/kg)处死大鼠,取大鼠挫伤部位骨骼肌,对照组大鼠直接处死后相同部位取材。部分检材立即用4%多聚甲醛固定,进行苏木精-伊红(HE)染色;其余检材立即于-80℃保存,进行免疫荧光Pax7、MyoD及MyoG染色,采用TissueFAXS 200仪器对切片进行扫描,随机选取多个不同区域,计数单位面积内阳性细胞的个数。利用SPSS 13.0软件对实验结果进行单因素方差分析。结果①HE染色结果:骨骼肌损伤后,肌纤维坏死及炎性细胞浸润和大量新生纤维组织修复等过程,证明本次实验造模成功;②免疫荧光染色结果:Pax7、MyoD、MyoG的表达呈现时序性变化,单位面积内Pax7与MyoD阳性细胞的数量在损伤3d达到高峰,且与对照组相比具有统计学意义(P<0.05);单位面积内MyoG阳性细胞的数量在损伤3d后开始增加,并一直持续到损伤7d,且与对照组相比具有统计学意义(P<0.05)。结论 Pax7、MyoD、MyoG的表达随时间呈现时序性变化,可以为法医学中损伤时间的推断提供一定的参考依据。

基因家庭Pax7与Ubc9基因编码蛋白相互作用研究

目的了解Pax7的重要生物学功能,筛选并验证与其相互作用的Ubc9基因编码蛋白,并明确Pax7与小泛素相关修饰蛋白(SUMO)的关系,为进一步研究Pax7的作用机制奠定基础。方法酵母双杂交系统筛选出与Pax7相互作用的基因Ubc9;GST-pull down方法验证Pax7与Ubc9在体外相互作用;Western blot方法检测Pax7的SUMO化状态;免疫共沉淀方法验证Pax7与SUMO的关系。结果 Pax7和Ubc9在酵母中存在相互作用;Pax7和Ubc9在体外可特异性结合;在Ubc9存在的条件下,Pax7呈现SUMO化状态,且可与SUMO相互作用;Pax7在鸡胚胎中也呈现SUMO化状态。结论 Pax7可以与Ubc9相互作用,且这种作用与SUMO有关。

长链非编码RNA lncMD通过转录miR-1促进牛肌细胞的分化研究

为探讨lncMD促进牛成肌细胞分化的分子机制,利用UCSC基因组浏览器分析lncMD的基因组结构,通过qPCR技术检测lncMD在牛不同组织中的表达量,采用过表达、干扰技术研究牛成肌细胞中lncMD对miR-1表达的调控作用,并通过双荧光素酶报告基因试验研究miR-1与靶基因Pax7的靶向关系。结果发现,lncMD的第三外显子可以编码miR-1,且两者均在牛的骨骼肌中高表达,lncMD正调控miR-1表达;生物信息学分析发现,Pax7(paired box 7)3'UTR区有4个miR-1的结合位点;双荧光素报告系统结合定点突变试验证实,牛Pax7基因是miR-1的下游靶基因。综上,本研究阐明lncRNA lncMD通过编码miR-1抑制其靶基因Pax7的功能,进而促进成肌细胞分化,这些发现可为肉牛的遗传改良和精准分子设计育种奠定科学基础。