IL-2／IL-15刺激后脐血NK细胞穿孔蛋白表达及其与细胞毒活性的关系

本研究旨在探讨脐血NK细胞的穿孔蛋白表达水平以及IL-2、IL-15作用下穿孔蛋白表达与NK细胞细胞毒活性的关系。采用CD3阴选后CD56阳选两步免疫磁珠分选法纯化脐血NK细胞,流式细胞术测定NK细胞纯度,通过IL-2、IL-2+IL-15两种细胞因子培养体系培养3天,流式细胞术测定培养前后穿孔蛋白表达水平;LDH释放法检测培养前后脐血NK细胞对白血病细胞株K562的细胞毒活性(效靶比10∶1)。结果表明,纯化后CD3-CD56+细胞含量为(92.39±0.8)%。,以K562为靶细胞,新鲜纯化CB-NK的杀伤活性为(27.76±8.8)%,IL-2组杀伤活性为(61.9±9.1)%,IL-2+IL-15组杀伤活性为(87.62±3.7)%,新鲜纯化CB-NK穿孔蛋白表达率为(67.21±6.14)%,IL-2组CB-NK细胞穿孔蛋白表达率(84.55±3.8)%,IL2-+IL-15组CB-NK细胞穿孔蛋白表达率(87.22±2.2)%。穿孔蛋白表达率与NK细胞毒活性呈正相关(r=88.6,p<0.05)。IL-2组穿孔蛋白表达率与新鲜组差别有统计学意义,IL-2组与IL-2+IL-15组穿孔蛋白表达率差别无统计学意义。结论:促进穿孔蛋白表达是IL-2提高脐血NK细胞细胞毒活性的途径之一。

高性能水泥研究进展与评述

综述了国内近10年来高性能水泥的研究成果,涉及到高性能水泥的定义、技术要求、性能指标的影响因素和检测方法、生产技术、与高性能水泥有关的基础理论以及绿色化生产等内容。已有研究工作基本明确了高性能水泥的核心内涵,即满足制造高性能混凝土的需要;初步在制定高性能水泥的技术要求方面做了尝试;较多地进行了高性能水泥性能指标的影响因素的探讨;主要在理论上或实验室内进行了高性能水泥生产方法讨论,少量地进行了工厂的生产试验。高性能水泥的研究已经对水泥厂的水泥质量产生影响,部分水泥厂水泥性能已经开始出现向高性能水泥靠近的趋势。

抗人CD134单抗对外周血单个核细胞穿孔素mRNA表达的影响

目的:观察不同浓度抗人CD134单抗对外周血单个核细胞穿孔素mRNA表达的影响及时间效应,旨在探讨抗人CD134单抗延长T细胞存活的可能机制。方法:应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测不同浓度(1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L)抗人CD134单抗对外周血单个核细胞穿孔素mRNA表达的影响,同时检测每种浓度作用不同时间(6 h、12 h、24 h、48 h)对外周血单个核细胞穿孔素mRNA表达的影响。结果:不同浓度CD134单抗作用不同时间,对人外周血单个核细胞穿孔素mRNA表达均有不同程度抑制作用,在24 h该作用达高峰。当CD134单抗浓度>5 mg/L时,这种抑制作用不再增强(P>0.05)。结论:抗人CD134单抗可在转录水平抑制穿孔素表达,该效应在24 h达高峰且会饱和,此乃抗人CD134单抗延长T细胞存活的主要机制。

皮肌炎患者T淋巴细胞穿孔素mRNA及其蛋白的表达

目的探讨皮肌炎患者T淋巴细胞穿孔素mRNA及其蛋白的表达水平。方法用实时RT-PCR和免疫印迹法,测定病例组与对照组外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞穿孔素mRNA及其蛋白的表达水平。结果病例组CD4+淋巴细胞穿孔素mRNA及其蛋白的表达水平显著高于正常人对照者,经统计学分析,具有统计学意义(P<0.05)。病例组CD8+T淋巴细胞穿孔素mRNA及其蛋白表达水平与正常人对照组相比,经统计学分析差异无统计学意义(P>0.05)。结论淋巴细胞穿孔素mRNA及其蛋白水平的增高可能是皮肌炎发生的一个重要因素。

慢性乙型肝炎病人外周血单个核细胞穿孔素表达的临床研究

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）病人外周血单个核细胞中穿孔素的表达与临床的关系。方法采集35例CHB病人和12例健康对照的抗凝外周静脉血，分离外周血单个核细胞（PBMCs），用亲和素-生物素-过氧化物酶技术（ABC法）检测PBMCs中穿孔素的表达。同期检测病人的血清ALT、AST，HBVDNA载量和HBV免疫学标志物。结果35例CHB病人PBMCs中穿孔素表达的均值为（7．87±4．60）％，12例健康对照为（0．87±0．44）％，CHB病人显著高于健康对照组（P〈0.01）；病人PBMCs中穿孔素的表达与血清ALT和AST水平呈显著正相关，分别为r=0．482，P〈0.01和，=0．455，P〈0．01；与病人HBeAg是否阳性无关，但与血清HBVDNA载量呈显著负相关，r=-0.372，P〈0．05。结论CHB病人PBMCs中穿孔素的表达与乙肝的发病有关，其水平在一定程度上反映了病人病情的活动性状态和肝脏损害的程度，较高表达的穿孔素可能有助于乙肝病毒的清除。

尼古丁抑制穿孔素/颗粒酶B诱导的A549肺癌细胞凋亡

目的:首次探讨尼古丁对穿孔素/颗粒酶B(perforin/granzyme B)诱导的A549肺癌细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法:以人肺癌细胞株A549为研究对象,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染荧光显微镜下观察细胞凋亡形态学变化,异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)染色后流式细胞术定量检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)及存活素(survivin)mRNA的表达量。结果:(1)不同浓度尼古丁单独作用A549细胞时未见明显诱导凋亡现象,可显著抑制细胞生长(P<0.01),其抑制率与作用时间和剂量呈正相关。(2)0.125 mg/L perforin作用于A549细胞(1×106个)时,PI染核率可达到90%以上。而当加入1μL granzyme B(1 mg/L)孵育6 h时,perforin/granzyme B组细胞可呈现90%以上的凋亡现象。(3)6μmol/L尼古丁作用于perforin/granzyme B预处理的细胞6 h时可见明显凋亡抑制现象,当检测其凋亡抑制蛋白XIAP和survivin mRNA的含量时,发现尼古丁组表达量较高,perforin/granzyme B组表达量明显降低,而当尼古丁联合perforin/granzyme B时表达量最高。结论:尼古丁可明显抑制perforin/granzyme B诱导的A549肺癌细胞凋亡现象,这种作用可能与凋亡抑制蛋白XIAP和survivin的表达上调有关。