红树林真菌草酸青霉(092007)的环二肽类成分

目的研究海南文昌红树林真菌草酸青霉(Penicillium oxalicum)的代谢产物,寻找新的抗肿瘤活性化合物。方法利用硅胶、Sephadex LH-20、ODS柱色谱及制备型高效液相色谱等方法进行分离,通过化合物的理化性质及各种波谱技术鉴定它们的结构,采用MTT法评价化合物体外细胞毒活性。结果从真菌菌丝体的丙酮提取物中分离得到6个环二肽类化合物,鉴定其结构分别为:环(苯丙-异亮)二肽[cyclo-(Phe-Ile)](1)、环(苯丙-缬)二肽[cyclo-(Phe-Val)](2)、环(异亮-亮)二肽[cyclo-(Ile-Leu)](3)、环(缬-缬)二肽[cyclo-(Val-Val)](4)、环(脯-缬)二肽[cyclo-(Pro-Val)](5)、环(脯-甘)二肽[cyclo-(Pro-Gly)](6)。体外活性表明:化合物1、3和5在50μg.mL-1下对肝癌细胞HepG-Ⅱ的抑制率分别为31%、32%、17%,对前列腺癌细胞LNCaP抑制率分别为50%、43%、53%。结论这些化合物均为首次从该属真菌的代谢产物中分离得到,其中化合物2、3和5具有一定的细胞毒活性。

一株青霉菌的分离鉴定及抑菌活性成分研究

从瑞香狼毒根际这一独特的生态环境中采用平板稀释涂布法分离出一株高抑菌活性的真菌,经形态学特征、ITS序列分析及与马尔尼菲青霉菌的比较分析表明,该菌为疣孢青霉菌YL-52(Penicilliumverrucu-losum YL-52),其Genbank注册序列号为EU914140。抑菌活性试验显示,其发酵液粗提物具抑菌广谱性,对细菌和植物病原真菌都有一定的抑制作用,其中对苹果干腐、苹果腐烂、番茄早疫病菌的抑制率达到80%以上。乙酸乙酯相TLC法系统预试结果表明,其主要成分为挥发油、黄酮、萜类、甾体及其苷类、酚性成分、内酯及香豆素和有机酸类。

产紫青霉β-葡萄糖醛酸苷酶基因的克隆与原核表达

产紫青霉(Penicillium purpurogenum Li-3)β-葡萄糖醛酸苷酶可定向转化甘草酸生成单葡萄糖醛酸基甘草次酸。根据β-葡萄糖醛酸苷酶氨基酸序列的同源保守区设计简并引物,PCR扩增克隆得到β-葡萄糖醛酸苷酶编码基因pgus(GenBank登录号:EU095019),该基因全长1815bp,编码604个氨基酸,理论单亚基分子量为67.77×103,含有4个潜在的N-糖基化位点。构建原核表达载体pET-28a(+)-pgus,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得高效表达pgus基因的重组菌。经IPTG诱导表达、Ni2+-NTA亲和层析柱纯化的重组酶PGUS-E,纯度达到95%以上,得率为25.6mg·L-1,SDS-PAGE分析检测分子量约为70×103,比酶活达到6368U·mg-1。

1株拮抗酵母菌对柑橘绿霉病菌的抑制作用

以柑橘绿霉病菌(Penicillium digitatum Sacc.)为供试材料,研究拮抗酵母菌(Kluyveromyces ma-rxianus)对柑橘采后绿霉病菌的抑制效果,并观察其对采后柑橘果实多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的影响。结果表明:拮抗酵母菌的菌株悬浮液和培养原液对柑橘采后绿霉病菌均有较好的抑制作用,但菌株培养上清液和热杀死液对柑橘绿霉病菌的抑制效果较差;与对照相比,接种拮抗菌与病原菌能够诱导柑橘果实PPO、POD和PAL活性的升高;拮抗酵母菌对柑橘绿霉病菌的抑菌机制与营养和空间的竞争以及诱导抗病性相关酶有关。

制革工业中去Cr^（3+）高效菌的筛选及其鉴定

从长沙金井制革厂的废水中分离得到抗三价铬细菌12株,真菌15株,耐铬试验发现菌株:B2、B5、F2和P1的耐铬能力强,去铬试验表明真菌B5去三价铬率最高,达50%。形态鉴定和ITS(内转录间隔区)序列分析表明,菌株B5为微紫青霉菌。研究结果为三价铬的微生物治理提供了新的优势菌种。

微生物对土壤中铅富集作用的研究

用3种不同培养基从铅矿厂周围土壤样品中筛选出了9株对重金属铅离子具有生物富集能力的菌株,其中4株真菌,3株细菌和2株放线菌。将富集能力最强的菌株初步鉴定为青霉属。研究了与土壤共培养条件下,该青霉菌在不同接触时间内对土壤可溶性铅的富集效果。结果表明,在温度为28℃,土壤初始铅离子含量为500 mg/kg时,土壤铅离子浓度随着青霉菌培养时间的延长而降低。在接种青霉菌24 h后,土壤中可溶态铅离子浓度已经显著下降;培养处理72 h后;土壤中可溶态铅离子含量降为121.75 mg/kg,最高富集率达到为96.54%;此后至96 h,可溶态铅离子浓度趋于稳定。因此,用青霉菌富集土壤中铅是有潜在应用价值的。

麻疯树叶部内生真菌对3种果树病原菌的抑菌活性研究

采用常规组织分离法,从麻疯树叶片内部分离得到一株出现频率极高的内生真菌菌株M1,经形态观察将M1菌株初步鉴定为一种青霉,通过与苹果腐烂病菌、桃流胶病菌、核桃溃疡病菌等3种供试病原真菌的平面对峙培养。结果表明,M1菌株对3种不同的供试病原菌均有抑制作用,拮抗系数均达II级,其中对苹果腐烂病菌的菌落造成变色坏死。说明麻疯树内生真菌具有作为生防菌的潜能。

扩展青霉在苹果汁中的生长与产毒特性

扩展青霉在加工过程中的二次生长与产毒是苹果汁中棒曲霉素的主要来源之一,了解扩展青霉在此过程中的生长与产毒特性,可为对其进行控制提供依据。试验以苹果汁为培养基,研究了扩展青霉在静置培养和摇床培养条件(200 r/min)下的生长与产毒特性。结果表明,在静置和摇床培养过程中,扩展青霉的菌体生长和毒素产量均呈先升后降趋势,菌体生长量的峰值均晚于棒曲霉素1 d;摇床培养中菌体生长和棒曲霉素的变化快于静置培养2 d;摇床培养中的菌体生长量远大于静置培养,但毒素产量与之相近。

基于PCR法快速检测扩展青霉

对PCR快速检测扩展青霉的方法进行了研究,重点考察了退火温度对检测结果的影响,评价了该方法的灵敏度,并考察了该法在苹果样品检测中的应用效果。结果表明,退火温度为51~61℃,扩展青霉3.5425 DNA扩增效果良好,纯菌培养所得菌体的DNA质量浓度的检测限为2.9×10^-3μg/mL,菌液的检测限低于15 cfu/mL,苹果样品对菌体DNA检测结果无影响。

山西省太谷县农田土壤真菌种类研究(Ⅰ)

为了明确山西省太谷县农田土壤真菌种类的组成,以及与相关作物之间的相互关系,研究采用稀释平板法,选用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)等进行分离、纯化,将各菌株鉴定到种。共选用山西太谷小麦田、玉米田与大棚黄瓜田中14个土壤样品、鉴定出曲霉菌7种,青霉菌4种。表明焦曲霉Aspergillus ustus、烟曲霉Asper-gillus fumigatus.土曲霉Aspergillus terreus、橘青霉Penicillium citrinum、扩展青霉Penicillium expansum是太谷农田曲霉和青霉中出现频率较高的种类。

从菌丝体中制备壳聚糖的研究

以青霉菌丝体为原料,在碱性溶液中,完成甲壳素的脱乙酰化,然后酸浸的方法把壳聚糖提取出来.利用微波技术,优化了制备工艺.采用NaOH浓度为5%,微波处理时间20 min,用2%的乙酸提取3 h,可得到收率为2%-3%、纯度为92%的壳低聚糖.

卡门柏青霉-PG3脂肪酶基因的克隆、表达及活性分析

以卡门柏青霉-PG3为出发菌株,提取其总RNA,应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出860bp左右的片段,核苷酸序列分析表明其与甘油单-双酰酯脂肪酶(MDGL)基因(mdlA)一致。将此基因克隆到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导后,重组的脂肪酶(rMDGL)在宿主菌中得到表达,表达量可达菌体总蛋白量的45.2%。重组蛋白包涵体溶解、复性后用Ni2+组氨酸结合树脂螯合层析柱纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示为单一区带,其相对分子质量为41 000。以橄榄油为底物时没有检测到酶活性,以单硬脂酸甘油脂为底物时酶活性达到225 nmol/s。该基因在原核系统中表达仍具有酶活性,说明MDGL的糖基化对其生物学活性并不是必不可少的。

青霉固态发酵生产生淀粉糖化酶的条件优化

对青霉Penicillium sp.26固态发酵生产生淀粉糖化酶的培养条件、培养基组成和后续液体培养进行了优化。考察了加水量、添加物起始pH值、培养时间等培养条件及附加碳源、氮源、无机盐和表面活性剂等培养基组成和后续液体培养对产酶的影响。结果表明,适宜的固态发酵条件为含水量50%,添加物起始pH 3,固态发酵36h;通过单因素和正交试验得到适宜固态发酵基组成:麦麸10g,麦芽糖0.5g,KNO3 0.3g,ZnSO4 0.0029g,TW-20 0.05g,水10mL。以此优化条件进行固态发酵,生淀粉糖化酶活从104 U/g提高为210U/g,进行后续液体培养24h,生淀粉糖化酶活进一步提高为442U/g,较初始培养提高了3.25倍。

电流对钋青霉菌吸附和固定铅离子的响应机制

重金属铅污染是一种主要的环境污染类型,对生态以及人类健康存在着极大的威胁。如何修复铅污染是目前亟待解决的关键性问题。在众多的铅污染修复方法中,微生物修复法具有独特的优势。本实验中所使用的钋青霉菌是已被验证的对铅具有高耐受度和高吸附率的优秀菌种。在此基础上,本实验的主要研究目的在于进一步提高该菌种对铅的吸附、固定能力。实验采用双室电解池体系,分组设置0.5 V至1.5 V的梯度槽压,以观察不同电压下电流对钋青霉菌生长环境及对铅离子吸附作用的影响。实验结果表明,电流既可能促进也可能抑制钋青霉菌对铅离子的吸附和固定作用,其作用结果与外加电压的大小有关,在1.0~1.25 V的最适电压区间下,电流能增强钋青霉菌对铅离子的吸附和固定能力。

五种抗真菌药物对马尔尼菲青霉菌的体外抗菌活性观察

目的了解两性霉素B（AMB）、酮康唑（KET）、氟康唑（FCA）、5-氟胞嘧啶（5-Fc）和伊曲康唑（ICA）5种抗真菌药物对马尔尼菲青霉菌体外抗菌活性，为临床用药提供参考依据。方法 采用浓度梯度法（E-test）测试AMB、KET、FCA、5-Fc、ICA5种抗真菌药物对52株从不同AIDS患者骨髓、血液、皮肤损害标本中分离的马尔尼菲青霉菌酵母相和菌丝相的体外抗菌活性。数据采用U检验。结果 AMB、KET、FCA、5-Fc、ICA的90％酵母相马尔尼菲青霉菌的最低抑制浓度（MIC90）分别为0．250、0．160、24．000、4．000和0．006mg／L，最低抑制浓度（MIC）范围分别为0．004～0．500、0．0020．016、1．000～256．000、0.002～32．000和0．002～0．008mg／L；对90％菌丝相马尔尼菲青霉菌的MICoo分别为1．500、0．125、256．000、24．000和0．012mg／L，MIC范围分别为0．064～4．000、0．006～0．940、1．000～256．000、0．125～32．000和0．002～0．064mg／L。不同抗真菌药对双相马尔尼菲青霉菌的体外抗菌活性不同，以ICA最强，其次为KET。酵母相和菌丝相的马尔尼菲青霉菌对同一药物的MIC比较差异有统计学意义（AMB、KET、FCA、5-Fc和ICA的U值分别为4．2219、1．912、28．798、6．43、7．21，均P〈0．05）。结论 进行马尔尼菲青霉菌体外抗真菌药物敏感实验对临床有重要参考意义。