平痫冲剂对PTZ致痫大鼠中枢神经系统NMDAR1和GABA-ARα1的影响

目的:探讨平痫冲剂抗癫痫的机制。方法:腹腔注射戊四唑制成慢性癫痫模型,通过免疫组织化学方法和显微图像分析技术检测大鼠颞叶及海马齿状回的谷氨酸受体(NMDAR1)和γ-氨基丁酸受体(GABA-ARα1)免疫反应的阳性细胞数(n)、阳性细胞面积比(Aa%)及阳性细胞积分吸光度(IA)。结果:(1)与正常对照组比较,模型组颞叶及齿状回NMDAR1的阳性细胞数、阳性细胞面积比上升,阳性细胞积分吸光度增加(P<0.01);而西药治疗组及中药小、中、大剂量组与模型组比较,颞叶及齿状回的NMDAR1阳性细胞数、阳性细胞面积比都有不同程度地下降,阳性细胞积分吸光度也有不同程度地减少(P<0.01)。(2)与正常对照组比较,模型组颞叶及齿状回GABA-ARα1阳性细胞数、阳性细胞面积比下降,阳性细胞积分吸光度降低(P<0.01);而西药治疗组和中药小、中、大剂量组与模型组比较,颞叶及齿状回的GABA-ARα1阳性细胞数、阳性细胞面积比都有不同程度地增加,阳性细胞积分吸光度也有不同程度地升高(P<0.01)。结论:平痫冲剂抗癫痫的作用机制可能是通过抑制颞叶及齿状回兴奋性神经递质受体NMDAR1的活性与表达,并激活其抑制性神经递质受体GABA-ARα1的活性与表达,从而降低大脑皮质的兴奋性,有效抑制癫痫的形成及发展。

基于iTRAQ技术对戊四氮点燃癫痫大鼠海马组织的蛋白质组学分析

目的:筛选癫痫大鼠海马组织差异表达蛋白(DEPs),为进一步探索癫痫的发病机制和药物治疗靶点提供思路。方法:采用戊四氮(PTZ)诱导建立SD大鼠癫痫模型(PTZ组),利用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)联合LC-MS/MS技术检测大鼠海马组织蛋白质谱,以PTZ组对control组蛋白表达量变化倍数>1.5或<0.67且P<0.05为标准筛选DEPs,并对DEPs进行基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因百科全书(KEGG)通路富集等生物信息学分析。结果:共筛选出80个显著DEPs,其中上调39个,下调41个。GO分析显示:上调的DEPs主要涉及细胞对神经生长因子刺激的反应、轴突发育、细胞表面受体信号通路、神经元迁移、肌动蛋白细丝解聚和信号转导等生物过程;下调的DEPs主要涉及三羧酸循环、柠檬酸盐代谢过程、丙酮酸-乙酰辅酶A生物合成过程、草酰乙酸代谢过程、粘附聚集体的调节等生物过程。KEGG通路富集分析显示:上调的DEPs主要参与腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路、肌动蛋白细胞骨架的调节、鞘脂信号通路、苯丙氨酸代谢和胰岛素信号通路等5条信号通路;下调的DEPs主要参与柠檬酸循环、碳代谢、乙醛酸和二羧酸代谢、代谢途径、氨基酸的生物合成和肌萎缩侧索硬化症等6条信号通路。结论:本研究通过iTRAQ蛋白质组学方法筛选出了癫痫海马组织的DEPs,对DEPs进行生物信息学分析所富集的代谢通路可能与癫痫的发病密切相关。

平痫冲剂对戊四唑致痫大鼠颞叶谷氨酸受体和γ-氨基丁酸受体的影响

目的探讨平痫冲剂抗癫痫的作用机制。方法腹腔注射戊四唑制成慢性癫痫模型,通过免疫组织化学方法和显微图像分析技术检测大鼠颞叶的谷氨酸受体(NMDAR1)和γ-氨基丁酸受体(GABA-ARα1)免疫反应的阳性细胞数(n)、阳性细胞面积比(Aa%)及阳性细胞积分吸光度(IA)。结果对于NMDAR1,模型组(B组)同正常对照组(A组)比较,颞叶NMDAR1的n、Aa%上升,阳性细胞积分吸光度(IA)增加(P<0.01);而西药治疗组(C组)、中药组(D组)与B组比较,颞叶的NMDAR1的n、Aa%都有不同程度的下降,IA也有不同程度的减少(P<0.01,P<0.05)。对于GABA-ARα1,B组同A组比较,颞叶GABA-ARα1的n、Aa%下降,IA降低(P<0.01);而C组、D组与B组比较,颞叶的GABA-ARα1的n、Aa%都有不同程度的增加,IA也有不同程度的升高(P<0.01,P<0.05)。结论平痫冲剂抗癫痫的作用机制可能是通过抑制颞叶兴奋性;经递质受体NMDAR1的活性与表达,并激活其抑制性;经递质受体GABA-ARα1的活性与表达,从而降低大脑皮质的兴奋性,有效抑制癫痫的形成及发展。

补脑止痫散对戊四氮慢性点燃癫痫大鼠模型GABA及其受体GABAα表达的影响

目的:探讨补脑止痫散对戊四氮(PTZ)慢性点燃癫痫大鼠模型γ-氨基丁酸(GABA)及其受体亚单位α(GABAα)表达的影响。方法:选取60只健康SD大鼠,随机分成6组(空白对照组、癫痫模型组、丙戊酸钠组、补脑止痫散低剂量组、补脑止痫散中剂量组、补脑止痫散高剂量组)。采用连续小剂量腹腔注射戊四氮(PTZ)的方法,建立癫痫大鼠模型(慢性点燃)。获得Ⅲ级以上发作后,停止给药。采用免疫组织化学法,检测各组大鼠海马区GABA及其GABAα的表达。结果:除空白对照组无癫痫样发作外,其余各组都出现Racine分级中的Ⅲ-Ⅴ痫样发作表现。丙戊酸钠组、补脑止痫散高剂量组GABA及GABAα表达明显上调,与模型组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论:补脑止痫散对戊四氮慢性点燃癫痫大鼠模型海马区内抑制性递质及受体有明显的上调作用,从而起到保护脑组织、缓解癫痫症状,进而减轻由癫痫导致的脑损伤的作用。

反复惊厥和大剂量抗痫药对大鼠海马pCREB的影响及草果知母汤的干预作用

目的探讨反复惊厥发作和大剂量苯妥英钠造成大鼠认知障碍模型中磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)的变化,并观察草果知母汤的作用。方法利用戊四唑(PTZ)诱导癫痫模型,再通过每日PTZ点燃癫痫和大剂量苯妥英钠注射造成大鼠认知功能障碍,然后分为每日发作模型组(A)、每日发作草果知母汤治疗组(B)、每日发作尼莫地平治疗组(C)、大剂量苯妥英钠组(D)、苯妥英钠草果知母汤治疗组(E)、苯妥英钠尼莫地平治疗组(F),用免疫组化和Western blotting方法检测大鼠海马组织pCREB的变化。结果B、C组大鼠pCREB表达均有明显提高,与A组比较,差异有显著性;E、F组大鼠海马部位的pCREB的变化与D组比较差异亦有显著性。结论草果知母汤改善癫痫每日发作和苯妥英钠所致大鼠的认知障碍可能是通过提高pCREB表达而发挥作用的。

灵芝孢子粉在点燃模型的作用研究

目的研究灵芝孢子粉对大鼠点燃模型的作用。方法建立大鼠戊四唑(pentylenetetrazole,PTZ)化学性点燃,观察孢子粉对点燃发作的影响。结果孢子粉500 mg.kg-1抑制PTZ化学点燃的发作(P<0.05)。结论孢子粉对PTZ化学点燃的发作有拮抗作用。

平痫颗粒对戊四唑点燃癫痫模型大鼠海马区凋亡调控基因蛋白表达的影响

目的:观察平痫颗粒在阻抗癫痫形成中对大鼠海马区凋亡调控基因Bcl-2,Bax蛋白表达的影响,探讨其抗癫痫作用的分子生物学机制。方法:选择60只45 d龄Wistar大鼠,随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组、平痫低剂量组、平痫高剂量组,每组12只。除正常对照组,其余各组大鼠均以戊四唑亚惊厥剂量35 mg.kg-1腹腔注射诱导癫痫模型。造模同时平痫高、低剂量组分别以1.66,0.42 g.mL-1的生药含量2 mL.d-1灌胃;阳性对照组给予等量3.6 g.L-1的苯巴比妥混悬液灌胃;模型组和正常对照组胃饲等量双蒸水,持续5周。采用免疫组化染色(SABC法)于3,5周末分别测定Bcl-2,Bax免疫阳性细胞。结果:①给大鼠连续注射戊四唑过程中,模型组大鼠癫痫发作级别随点燃周次增加逐渐升级,由第1周的Ⅰ～Ⅱ级至第4周时的Ⅵ级大发作。治疗组发作次数和级别相对明显降低,最高级别Ⅳ级,且组间发作级别、次数比较无显著性差异。②随着点燃周次的增加,在3,5周末Bcl-2表达模型组明显低于正常对照组(P<0.01),Bax表达模型组明显高于正常对照组(P<0.01);阳性对照组、平痫高、低剂量组Bcl-2表达均明显高于模型组(P<0.01),Bax表达阳性对照组、平痫高、低剂量组与模型组比较有明显降低(P<0.01)。结论:平痫颗粒可能是通过促进抗凋亡调控基因Bcl-2蛋白的表达,以及抑制促凋亡调控基因Bax蛋白的表达,从而减少神经元细胞的凋亡来阻抗癫痫。

戊四氮点燃猫癫癎形成过程中行为和脑电的动态研究

目的:观察戊四氮点燃猫癫癎形成过程中行为和脑电特征。方法:用低于急性致惊厥剂量的戊四氮(PIZ,25 mg·kg^1)给成年雄性猫每日肌肉注射,观察脑电活动和行为特征。结果:1周后,猫出现发作性面部抽搐,脑电为不对称近额部的散发性棘波,基本节律存在;2周后出现节律性点头,脑电为双侧对称性广泛的散发性棘慢波;16 d后出现发作性四肢强直,脑电活动背景节律变慢,棘慢波呈现阵发性;20 d后出现持续半小时以上的全面性强直阵挛发作,脑电活动为较多不规则的θ和δ波,棘慢波持续时间明显延长。结论:PTZ点燃猫癫癎形成过程中,其行为和脑电阶段性变化明显,与人类癫癎的局灶性继发全面性发作癫癎表现相似。