胃蛋白酶的固定化及其在亲和层析法提纯Pepstatin上的应用

胃蛋白酶(pepsin)是人们较早认识(Spallanzani 1783)并命名(Schwann,1825)的单纯酶,在脲酶以后第二个得到了该酶的结晶。胃蛋白酶是胃液中的主要酶。

胃酶抑素A在抗小鼠播散性白念珠菌感染中的作用

目的评估分泌型天冬氨酸蛋白酶(Sap)抑制药胃酶抑素A(pepstatin A)在播散性白念珠菌感染中的治疗作用,并探讨Sap在小鼠播散性白念珠菌感染过程中的作用。方法制备播散性白念珠菌感染小鼠模型,不同剂量的胃酶抑素A应用于感染小鼠,观测其15 d内的存活情况;再以胃酶抑素A的最佳浓度0.6 mg.kg-1预先或感染后应用于小鼠,比较其15 d内的存活情况;均与氟康唑处理组、0.9%氯化钠溶液组进行比较。测定不同剂量的胃酶抑素A对小鼠肾菌落形成单位(CFU)的影响,进一步评估胃酶抑素A的抗白念珠菌活性。结果与0.9%氯化钠溶液组比较,胃酶抑素A的预防性用药对播散性白念珠菌感染小鼠有显著保护作用;最佳浓度为0.6 mg.kg-1,能显著延长感染小鼠的平均存活天数(P<0.01),提高存活率,其保护作用可达到使用1.0 mg.kg-1氟康唑的同等效果。0.6 mg.kg-1胃酶抑素A能显著减少白念球菌感染后第4天小鼠肾CFU。结论胃酶抑素A的预防性用药对播散性白念珠菌感染小鼠有显著保护作用,并间接提示Sap在播散性白念珠菌感染过程中有致病作用,且作用大部分发生在感染早期。

申克孢子丝菌接种的无毛小鼠皮损处蛋白酶抑制剂的作用

Chymostatin和 Pepstatin能分别抑制申克孢子丝菌产生的蛋白酶 和 ,为了证明在孢子丝菌病中 Chymostatin和 Pepstatin能通过抑制这些酶的活性而抑制真菌的生长 ,我们研究了在小鼠的皮损上外用蛋白酶抑制剂的效应 ,用 0 .1% Chymostatin,0 .1% pepstatin和 0 .1% chymostatin+0 .1%pepstatin软膏涂于无毛小鼠的申克孢子丝菌接种部位与对照组相比 ,单用一种成分时 ,皮损处结节大小的变化曲线表现分轻度抑制 ,而用含 chymostatin和 pepstatin的软膏 ,则强烈地抑制了结节的形成。本研究不仅证明了两种蛋白酶对申克孢子丝菌在体内生长的作用 。

胃酶抑素A通过上调p-ERK1/2的表达来保护大鼠脑缺血再灌注损伤

目的探讨胃酶抑素A(Pepstatin A)保护大鼠脑缺血再灌注损伤的潜在机制。方法将48只成年雄性健康Sprague-Dawley大鼠随机分配至假手术组(16只)、生理盐水对照组(16只)及Pepstatin A干预组(16只);大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型遵照Zea longa线栓法制备,即缺血2 h即恢复血流灌注,再灌注24 h后处死大鼠;干预组及对照组在脑缺血再灌注即刻分别经腹腔注射Pepstatin A配置液(0.2 mL/10 g)或等体积生理盐水;脑缺血2 h再灌注24 h时采用标准评分法行神经功能缺损评分;假手术组、对照组及干预组中随机各取8只检测脑梗死体积,余下8只大鼠行western blot检测p-ERK1/2及Caspase-3的表达水平。结果神经功能缺损评分显示,假手术组大鼠行为学表现正常,评分为0分,干预组大鼠的评分均显著低于对照组(P<0.05)。TTC染色显示,假手术组脑组织无梗死灶,干预组大鼠的相对脑梗死体积显著低于对照组(P<0.05)。Western blot检测显示,对照组p-ERK1/2蛋白的表达水平显著高于假手术组(P<0.05);干预组该蛋白的表达水平较对照组显著增加(P<0.05);干预组Caspase-3蛋白的相对表达水平显著低于对照组(P<0.05)。结论 Pepstatin A可能通过上调p-ERK1/2的表达来减少脑梗死体积及细胞凋亡发生,从而保护大鼠脑缺血再灌注。

3种蛋白酶抑制剂对鹿茸促细胞增殖活性的保护作用

目的:确定对鹿茸样品活性有保护作用的蛋白酶抑制剂种类及作用浓度。方法:选择金属蛋白酶抑制剂EDTA-2Na、胰蛋白酶抑制剂(Approtinin)和胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin),以MTT法检测其对NRK-49F细胞增殖活性和对鹿茸促细胞增殖活性的影响以及对鹿茸样品33℃放置不同时间的保护作用。用Bradford法测鹿茸样品蛋白含量并调整到作用浓度400μg/mL。结果:当EDTA-2Na、Approtinin和Pepstatin浓度分别小于200、50、400μg/mL时对细胞增殖活性没有影响。EDTA-2Na浓度为6.25和12.5μg/mL时对鹿茸促增殖活性有加强作用,但对于鹿茸样品高温下放置没有明显的保护作用。12.5μg/mL的Approtinin对鹿茸促增殖活性有促进作用,并且对鹿茸样品高温放置有明显的保护作用,6.25μg/mL时效果最佳(P<0.05)。12.5μg/mL的Pepstatin表现出对鹿茸促增殖活性的加强作用,并表现出对鹿茸样品高温放置的保护作用,但数据无统计学差异。结论:3种蛋白酶抑制剂中胰蛋白酶抑制剂对鹿茸促细胞增殖活性有较好的保护作用。