载脂蛋白A-Ⅰ模拟肽对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响

目的:观察载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)模拟肽D-4F对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响,并探讨其机制。方法:巨噬细胞种植于24孔板,用1.85×107Bq/孔3H-胆固醇和含50μg/mL氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共同孵育24h后,给予不同浓度的D-4F(0～100μg/mL)干预24h,收集细胞用液体闪烁计数法检测胆固醇流出。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量,采用实时荧光定量PCR及Western印迹检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA及蛋白表达。结果:D-4F呈浓度依赖及时间依赖性促进巨噬细胞内胆固醇流出,增加细胞内cAMP水平,上调ABCA1mRNA和蛋白表达。8-Br-cAMP显著增加D-4F介导的胆固醇流出和ABCA1表达,而蛋白激酶A(PKA)抑制剂虽然对基础胆固醇流出及ABCA1表达几乎无作用,却可以抑制8-Br-cAMP对胆固醇流出和ABCA1表达的促进作用。结论:D-4F促进巨噬细胞胆固醇流出,cAMP释放及ABCA1表达,可能与激活cAMP-PKA-ABCA1通路有关。

应用RT-PCR方法检测牛消化道各段Ⅰ型肽载体mRNA差异表达的研究

已有的研究表明，消化道可以小肽的形式吸收氨基酸，但尚未很好地确定小肽的主要吸收部位。我们在另一项研究中对牛Ⅰ型肽载体（BPepTⅠ）第3～10结构域1566bp片段序列进行了测定（Genebank登录号：DQ309694），与绵羊相同区域片段序列同源性高达96．04％。本研究以BPepⅠ测序结果为基础，并参考绵羊的部分序列设计了跨内含子引物，荧光实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定了牛离体各段消化道黏膜或上皮组织BPepTⅠ的相对表达水平，以评估小肽在牛消化道的主要吸收部位。以持家基因β-actin为参比基因，结肠样品为校正样品（其相对表达量2^-△△CT值为1），研究结果表明：在整段消化道中，BPepTⅠ的相对表达量（2^-△△CT值）由高到低依次为回肠（30．62）、空肠（26．12）、瓣胃（22．61）、瘤胃（16．17）、十二指肠（11．97）、网胃（5．18）、皱胃（3．22）、盲肠（1．13）和结肠（1．00）。各段消化道BPepTⅠ相对表达量差异显著（P〈0．05），其中回肠相对表达量与空肠和瓣胃差异不显著（P〉0．05），与瘤胃、十二指肠、网胃、皱胃、盲肠、结肠差异显著（P〈0．05）；空肠相对表达量与瓣胃、瘤胃、十二指肠差异不显著（P〉0．05），与网胃、皱胃、盲肠、结肠差异显著（P〈0．05）；网胃、皱胃、盲肠、结肠的2^-△△CT值均在5．2以下，相互之间相对表达量的差异不显著（P〉0．05）。由BPepTⅠ基因相对表达活性可以将牛的各段消化道分为3组，回肠、空肠、瓣胃的活性最高，其次为瘤胃和十二指肠，网胃、皱胃、盲肠、结肠则；。

ApoA-Ⅰ及其模拟肽在动脉粥样硬化中的作用研究进展

动脉粥样硬化是一种炎症引起的慢性疾病,以巨噬细胞脂质代谢功能障碍导致的泡沫细胞形成为主要标志。载脂蛋白A(ApoA)-Ⅰ是高密度脂蛋白的重要结构蛋白组分,在机体脂质代谢过程中具有介导泡沫细胞胆固醇外流、维持机体胆固醇稳态、抗动脉粥样硬化的作用。此外,ApoA-Ⅰ作为一种多功能蛋白,在胆固醇逆向转运过程中起重要作用。ApoA-Ⅰ及其模拟肽可增强泡沫细胞胆固醇流出,具有抗动脉粥样硬化、抗炎、抗氧化等作用,在动脉粥样硬化性心血管疾病的防治方面具有很大的应用潜力。因此,对ApoA-Ⅰ及其模拟肽介导胆固醇外流的功能和特性的研究可为抗动脉粥样硬化药物的开发提供新思路。