抗酸染色联合PAS染色和六胺银染色在感染性疾病病理学实验教学中的应用

为配合医学整合课程体系改革,结合临床病理诊断常用的感染性疾病的辅助诊断方法,将抗酸染色、高碘酸-Schiff(periodic acid-Schiff,PAS)染色和六胺银染色阳性病例切片引入病理学感染性疾病章节的实验教学,显示出病变组织致病微生物。通过对不同班级进行问卷调研,绝大多数同学认可特殊染色在感染性疾病章节中的应用,认为不仅丰富了课堂内容,学习了结核杆菌和真菌在病变组织中的形态学特征及其导致的组织病理变化,而且加深了对感染性疾病理论知识的理解,深刻认识到病理学研究内容除了疾病的病理变化之外,还要探讨疾病发生的病因以及好发部位。同时,这些增加的特殊染色切片改变了本章节实验教学切片普通光学显微镜下色彩的单调性——单一的“红-蓝”色调,丰富了镜下色彩,提高了学生的学习兴趣,活跃了课堂气氛。

PAS、AB染色法在软骨蛋白黏多糖检测中的运用

[目的 ] 探讨过碘酸雪夫氏反应PAS染色 (PeriodicAcidSchiff)及阿利辛兰AB染色 (AlcianBlue)组织化学分析法在检测软骨组织蛋白黏多糖含量中的运用价值。 [方法 ] 以原发性退行性骨关节炎动物模型的软骨为检测标本 ,分别采用PAS和AB染色法 ,观察软骨组织中蛋白黏多糖的含量。 [结果 ] PAS染色法中软骨组织基质中的中性黏多糖呈紫红色 ,软骨细胞内为无色。AB法中软骨细胞周围的酸性黏多糖呈深蓝色 ,基质呈淡蓝色。此外 ,随着动物模型关节炎程度的不断加剧 ,即软骨组织中蛋白黏多糖丢失的不断增加 ,标本中的紫红色和深蓝色也相应减退 ,直至消失。 [结论 ] PAS染色法和AB染色法能清楚地区分软骨基质中的中性黏多糖和细胞囊内的酸性黏多糖 ,并能对它们的改变进行量化分析。可作为软骨组织中黏多糖检测的有效方法。

改良PAS整块染色法显示肝糖原

目的:探讨PAS整块染色过程中固定与氧化同时处理与顺序处理对肝糖原显示效果的影响。方法:取成年家兔肝脏两小块,一块作固定与氧化顺序处理,另一块作固定与氧化同时处理,Schiff氏试剂染色,两组织块行石蜡切片,观察肝细胞内PAS反应阳性物质的深浅与分布特征。结果:两种方法均能显示肝细胞内糖原,PAS反应均为阳性,其中固定与氧化顺序处理法中PAS阳性强,阳性物质分布均匀,结构清晰。固定与氧化同时处理法中PAS阳性反应较弱,阳性物质分布不均。结论:PAS整块染色过程中固定与氧化顺序处理法优于固定与氧化同时处理法。

马尔尼菲青霉菌感染病例报告

目的 探讨马尔尼菲青霉菌的鉴定及临床表现 ,为早期诊断、治疗提供经验 ,降低死亡率。方法 取淋巴结穿刺液、血液进行真菌培养鉴定。结果 氢氧化钠涂片和革兰染色能检出马尔尼菲青霉菌所特有的孢子。结论 氢氧化钠涂片和革兰染色能早期发现真菌孢子 ,是一种快速、可行的方法 ,此外 ,组织病理学也可作为诊断马尔尼菲青霉病的一种很重要的方法 ,但需做过碘酸雪夫染色与荚膜组织胞浆菌病作鉴别。

大米蛋白水解机制研究——Ⅲ酶水解对大米蛋白-糖结合特性的影响

凝胶色谱洗脱组分分析和β-消去反应结果表明,酶水解所溶出的大米蛋白与糖分子仍以N-糖肽键形式连接。红外光谱分析显示酶解后可溶性蛋白和残余物蛋白中均含有糖组分。SDS-PAGE分离和Schiff试剂染色结果表明,13ku亚基是能抵抗碱性蛋白酶水解的糖蛋白。

肺泡蛋白沉积症的临床研究

目的探讨肺泡蛋白沉积症(PAP)的临床特点、确诊方法和治疗效果。方法对7例经病理证实的PAP患者病史进行回顾性分析,观察支气管肺泡灌洗(BAL)和全肺灌洗前后症状、体征、影像学等的改变。结果PAP的临床表现有反复咳嗽、咳痰,进行性呼吸困难,慢性呼吸功能衰竭以及与临床症状不相称的影像学表现。BAL和全肺灌洗后PaO2显著提高(P<0.05),肺功能虽然有所改善,但无统计学意义(P>0.05)。大部分临床症状和X线表现有所改善。结论X线影像和CT扫描有助于早期诊断PAP,肺组织活检仍是确诊PAP的最可靠手段,支气管肺泡灌洗液的过碘酸雪夫染色阳性可作为确认PAP的重要依据。BAL和全肺灌洗能够有效地改善临床症状和血气交换功能。

口腔鳞状细胞癌中血管生成拟态的研究

目的:探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)中是否存在血管生成拟态(VM),观察其组织形态学特征、领域分布情况,分析其形成规律,并进一步阐述VM存在的临床意义。方法:筛选106例OSCC石蜡标本,进行CD34免疫组化染色结合过碘酸雪夫氏反应(PAS反应)双重染色检测OSCC中是否存在VM。结果:在106例OSCC患者发现15.09%(16/106)存在VM。VM与患者性别、年龄、淋巴结转移无关,与肿瘤组织分化程度有关,有VM组的OS-CC分化程度低于无VM组OSCC(χ2/Z=2.0340,P<0.05),差异有统计学意义。结论:OSCC中存在VM,恶性度越高OSCC形成拟态的能力越强。血管生成拟态参与口腔鳞状细胞癌血液供给,起到"替代供养器"的作用。

异硫氰酸荧光素染色在真菌性角膜炎中的应用

目的:寻找真菌性角膜炎组织切片快速、准确、方便操作的特殊染色方式。方法:采用经真菌培养均为阳性的真菌性角膜炎患者的角膜标本38例,常规固定脱水透明浸蜡,进行4μm石蜡切片,脱蜡至水,选用异硫氰酸荧光素(FITC)荧光法和过碘酸雪夫氏染色法(PAS)进行染色对比。结果:异硫氰酸荧光素法检测阳性率为97.4%(37/38),过碘酸雪夫氏染色法检测阳性率为86.8%(33/38)。结果比较有统计学差异(P<0.001)。结论:异硫氰酸荧光素法镜检真菌性角膜炎优于过碘酸雪夫氏染色法镜检。

星形细胞瘤不同区域血管生成模式的组织形态学观察

目的通过对星形细胞瘤水肿区和瘤体区的组织学观察,探讨其不同区域的血管生成,并观察拟态血管的形态学基础。方法对照磁共振精确留取51例星形细胞瘤水肿区和瘤体区组织后行CD34-PAS双染色。结果在水肿区发现CD34-PAS双染呈CD34、PAS均阳性的管道样结构,均为血管或微血管。在4例胶质母细胞瘤瘤体区发现除了占绝大多数的CD34、PAS均为阳性的血管或微血管外,还有:(1)拟态血管(PAS阳性且CD34阴性的物质形成的管状结构,其两侧有瘤细胞排列,内含红细胞);(2)PAS阳性且CD34阴性的物质形成内含红细胞的管状结构,其两侧无明显细胞排列;(3)PAS阳性和部分CD34阳性的血管或微血管;(4)PAS阳性且CD34阴性的血管或微血管。结论大部分星形细胞瘤水肿区和瘤体区血管生成模式仍然以血管或微血管形式存在,而一些高度恶性的星形细胞瘤瘤体区出现的拟态血管可能是血管生成不良的表现。

脂褐素三种染色方法比较

目的比较显示脂褐素的3种特殊染色方法,探讨哪一种方法更适合应用于临床病理诊断。方法分别采用三氯化铁-铁氰化钾、醛品红和PAS 3种特殊染色方法,检测HE染色石蜡切片中呈浅棕色或金黄色的颗粒是否为脂褐素。三氯化铁-铁氰化钾染色的脂褐素呈蓝黑色颗粒,醛品红染色的脂褐素呈深紫色颗粒,PAS染色的脂褐素呈红色颗粒。结果通过3种染色结果的比较,发现三氯化铁-铁氰化钾染色对比清晰,定位准。结论三氯化铁-铁氰化钾、醛品红、PAS三种染色均可用于显示脂褐素,但三氯化铁铁氰化钾染色方法优于其他两种。

声带鳞状细胞癌早期改变的病理学观察

目的探讨声带鳞状细胞癌早期病理学的特点,提高病理诊断水平。方法总结89例声带鳞状细胞癌早期改变病例的病理资料,对其石蜡切片进行HE染色、PAS染色及p53、Ki-67免疫组化染色;以59例声带角化症(分为单纯增生组40例和异型增生组19例)和30例声带浸润癌(浸润深度>3mm的癌)作为对照。结果在HE染色下,声带鳞状细胞癌的早期改变可区分为两种类型:Ⅰ型为上皮全层癌变型,占67.4%(60/89);Ⅱ型为上皮基底层及副基底层癌变型,占32.6%(29/89),又可分为Ⅱa和Ⅱb两个亚型。HE染色显示有可疑微小浸润者52例,PAS染色示其中的43例(83%)的可疑病灶周边基膜样物质消失,有微浸润,Ⅰ型微浸润的比例较Ⅱ型明显偏低(P=0.007)。HE染色下3例(3.4%,3/89)认为无微浸润者经深切证实有浸润,并经PAS染色确认。Ⅰ型和Ⅱ型的p53表达率差异无显著性(P=0.445),而Ki-67阳性率Ⅰ型高于Ⅱ型(P=0.048)。癌早期改变组的p53阳性率高于声带角化症伴单纯增生组(P=0.008),而与声带角化症异型增生组和声带进展癌组之间的差异无统计学意义(P=0.240,P=0.268)。癌早期改变组的Ki-67阳性率明显低于浸润癌组(P=0.000),并明显高于角化症伴单纯增生组(P=0.001),但与角化症伴异型增生组之间差异无显著性(P=0.248)。结论声带鳞状细胞癌早期改变可区分为Ⅰ型和Ⅱ型,Ⅱ型癌变可在不累及上皮全层的情况下,由上皮的基底层和(或)副基底层细胞直接向固有膜内增生及癌变,此型占全部病例的近1/3,早期浸润是Ⅱ型诊断的可靠依据;Ⅱ型的存在提示声带鳞状细胞癌的早期发生和演进可能存在不同的机制;PAS染色和p53、Ki-67免疫组化染色有助于声带鳞状细胞癌Ⅱ型早期的诊断。

糖蛋白PAGE分离后的糖基显色法

鸡卵清蛋白通过SDS-PAGE分离后,用过碘酸-希夫(PAS)显色法可以使卵清蛋白显红色,而用糖苷酶去除卵清蛋白的糖基可以去除相应的红色。考马斯亮兰染色结果显示,去糖基后的卵清蛋白分子量略有减小。可见,PAS可方便地使糖蛋白呈现红色。

棒曲霉素对KM小鼠肾脏的毒性效应

该研究以KM小鼠作为实验动物,研究2.5、5.0、7.5、10、15μmol/L五个浓度梯度下棒曲霉素对小鼠体重、肾脏系数等的影响,并通过各项肾脏切片染色试验验证PAT对肾脏的毒性损伤。其中PAT浓度对体重增长率基本无影响,两者之间几乎无相关关系;而随着PAT浓度增大,肾脏系数有逐渐增大的趋势,其中7.5μmol/L和10μmol/L PAT处理的差异显著(p<0.05);随着PAT浓度增加,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色后可观察到大片细胞基质和胞外基质,蓝紫色细胞核逐渐减少且细胞核密度逐渐降低,此外PAT浓度较高时出现了长条状空白;Masson染色后肾小球发生明显的纤维硬化情况,且胞间充血;过碘酸雪夫(Periodic Acid-Schiff,PAS)染色后出现了少量糖原,可知糖原没有被正常降解。因此,PAT浓度的增加会导致核密度降低、肾脏细胞皱缩、胶原纤维增加、糖原分解被抑制等问题,从而对KM小鼠肾脏造成严重损伤。研究结果将为进一步研究棒曲霉素对肾脏的损伤提供理论支持。

全反式维A酸对骨形态发生蛋白9诱导小鼠肝祖细胞成熟分化的作用及机制

目的探讨全反式维A酸(ATRA)对骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导肝祖细胞(HPCs)成熟分化的作用。方法BMP9、BMP9+1μmol/L ATRA及BMP9+10μmol/L ATRA分别作用于肝祖细胞14-19(HP14-19),荧光素酶报告基因检测清蛋白启动的荧光素酶(ALB-Glus)表达情况,Real-time PCR检测肝脏相关基因ALB、细胞角蛋白18(CK18)、酪氨酸转氨酶(TAT)、载脂蛋白B(ApoB)的mRNA表达水平,免疫荧光检测Alb、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A(UGT1A)的表达、高磺酸-希夫(PAS)染色和吲哚菁绿(ICG)摄取实验检测肝细胞的代谢及糖原合成功能,Real-time PCR及Western blotting检测维A酸(RA)信号通路相关分子维A酸受体(RAR)α、RARβ、RARγ及BMP9信号相关分子Samd1、Samd5、Samd8的表达。Ad-siRARα、Ad-siRARβ、Ad-siRARγ感染细胞,BMP9+10μmol/L ATRA处理,观察细胞形态及PAS染色结果,检测ALB、CK18、TAT、ApoB的mRNA水平表达。结果BMP9可显著诱导HP14-19的成熟分化,细胞形态呈现多角形铺路石样,Alb、CK18、ApoB及UGT1A表达显著上调,部分细胞具有代谢解毒及糖原合成功能。BMP9+1μmol/L ATRA处理后,细胞形态更加成熟,体积增大,ALB、CK18、ApoB及UGT1A表达较BMP9组显著上调(P<0.05),ICG和PAS染色阳性细胞数增多,与之相比,BMP9+10μmol/L ATRA的细胞呈现长梭形、纺锤形及多角形等多种形态,肝细胞相关标志表达降低,ICG和PAS染色阳性细胞数减少。1μmol/L ATRA显著增高RARα、RARβ、RARγ的表达,10μmol/L ATRA组较1μmol/L ATRA组仅RARα表达增高,BMP9不影响Samd1、Samd5、Samd8的表达水平,但上调其磷酸化。Ad-siRARα可改善10μmol/L ATRA诱导的细胞形态及PAS染色,Alb、CK18的表达显著上调(P<0.05)。结论1μmol/L ATRA可促进BMP9诱导的肝祖细胞成熟分化,10μmol/L ATRA会导致细胞分化减弱,过量ATRA可能过度激活RARα信号,影响肝祖细胞分化。

成年牦牛汗腺和皮脂腺的组织学特征

目的探讨青海健康成年牦牛汗腺和皮脂腺的组织学特征。方法从10头健康成年牦牛背部、肋部和腹部皮肤取样,运用HE、过碘酸-雪夫(PAS)和阿利新蓝-过碘酸-雪夫(AB-PAS)染色法,对汗腺和皮脂腺组织学结构进行观察与分析。结果青海成年牦牛背部、肋部和腹部皮肤的汗腺为单管状腺,属于顶浆分泌型腺体,其分泌物为中性和酸性混合液,腺细胞胞质中含有糖原。皮脂腺呈葡萄状、多叶且分支的泡状腺,属于全浆分泌型腺体,其分泌物为中性黏液,腺细胞胞质中含有少量糖原。汗腺的密度、直径、长度和体积从背部到腹部呈递减趋势,但距离皮肤表面的深度呈递增趋势,且部位间差异显著(P<0.05)。皮脂腺的密度、导管部直径和长度、分泌部直径和长度及距离皮肤表面的深度从背部到腹部呈递减趋势,且部位间差异显著(P<0.05)。结论青海成年牦牛背部、肋部和腹部皮肤的汗腺和皮脂腺形态学结构相似,但其密度、大小和深度差异显著,且从背部到腹部存在渐变趋势。与其他牛类相比,牦牛汗腺和皮脂腺的密度高,但前者的分泌功能不发达而后者发达,这可能与其为了适应高原高寒环境有关。

水稻可溶性糖蛋白的纯化与鉴定研究

从水稻鲜叶中提取总蛋白,对总蛋白中的蛋白质含量进行了测定;通过硫酸铵沉淀将总蛋白提取液进行分级,从而达到了总蛋白细分和放量的目的。四级份的分级蛋白分别通过ConA-Sepharose 4B亲和层析进行糖蛋白纯化,按吸收峰收集的各级糖蛋白混合物进行冷冻干燥,得到干粉;结合PAS法染色和考马斯亮蓝R-250染色对四级份的糖蛋白样品鉴定,在其中3个级份中均检测出糖蛋白;由于感度的差异,按考马斯亮蓝R-250染色可检测出近30种糖蛋白(包括部分糖肽),按PAS法染色可检测到7种糖蛋白;对3种含量较高的糖蛋白进行了胶上纯化,3种糖蛋白的PAS法染色均证实了3种样品为单一的糖蛋白或者糖肽,分别命名为RG1、RG2和RG3。

糖尿病基础上的脓毒症模型

目的观察糖尿病(DM)对脓毒症炎症反应的影响。方法高糖高脂饮食喂养联合链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型,在此基础上通过盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症模型。留取心脏组织和全血标本,ELISA检测炎症因子TNF-α,中性粒细胞百分比计数,观察心脏组织糖原染色。结果 (1)糖尿病模型:与正常大鼠相比,糖尿病大鼠出现多饮、多食、多尿、体质量减轻的典型"三多一少"症状,血糖和体质量显著升高(P<0.001);心肌糖原染色结果显示:正常大鼠心肌细胞核染色,间质细胞及血管无染色;糖尿病大鼠心肌细胞和心肌微血管均染色且血管壁增厚,血管周围细胞核明显深染。(2)糖尿病基础上的脓毒症模型,造模后大鼠出现异常的行为活动和精神状态;Normal-CLP组血清TNF-α值显著高于Normal-Control组(P<0.01),明显高于Normal-Sham组(P<0.05)。DM-CLP组血清TNF-α值显著高于DM-Control组(P<0.01),明显高于DM-Sham组(P<0.05);Normal-CLP组外周血中性粒细胞百分比显著高于Normal-Control组和Normal-Sham组(P<0.01),DM-CLP组外周血中性粒细胞百分比显著高于DM-Control组和DM-Sham组(P<0.01)。结论正常大鼠和DM大鼠对脓毒症的炎症反应是不一致的,这可能与正常大鼠和DM大鼠体内免疫状态相关。

三种不同固定液对小鼠组织过碘酸雪夫染色效果比较

目的比较小鼠肝脏、肾脏、小肠三种组织在质量分数4%多聚甲醛液、Carnoy's液、Bouin's液三种固定液不同固定时间下的制片质量和过碘酸雪夫染色(PAS)效果,筛选出一种最为适用的固定方法。方法取成年雄性C57BL/6小鼠肝脏、肾脏、小肠,分别固定于三种固定液,固定时间分别是质量分数4%多聚甲醛液:24 h、48 h、72 h;Carnoy's液:4 h、8 h、12 h;Bouin's液:12 h、24 h、48 h,充分固定后,常规制作石蜡切片,然后进行PAS染色,对比观察染色效果。结果三种固定液对不同组织、不同固定时间下PAS染色结果存在差异。肝脏、肾脏、小肠经Carnoy's液处理12 h后PAS效果最佳,质量分数4%多聚甲醛液固定24 h基本满足观察检测效果,而经Bouin's液固定组织染色效果相对较差。结论 PAS反应对固定液和固定时间具有选择性,Camoy's液是组织进行PAS染色的理想固定液,但从固定效果、重复性、安全性、成本等多因素综合考虑,在PAS反应中,质量分数4%多聚甲醛液可以替代Carnoy's液。

全反式维甲酸诱导肝前体细胞向肝细胞分化的研究

目的:探讨全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)对肝前体细胞分化的影响。方法:取孕14.5 d胎鼠制备肝前体细胞,瞬时转染带白蛋白启动子(Albumin promoter)的荧光素酶报告质粒pALB-Luc,以便实时检测细胞的分化状态。优化ATRA诱导条件,分别于诱导后3、6、9 d收集细胞总RNA,半定量RT-PCR检测分化相关指标的变化。并于诱导后11 d用苏木精-伊红染色法观察细胞形态的改变,PAS染色观察细胞的分化成熟程度。结果:ATRA浓度为1μmol/L时对肝前体细胞分化诱导作用最强。与对照组相比,随培养时间的延长,ATRA组分化早期指标膜蛋白(Delta like,DLK)、细胞角蛋白(Cytokeratin19,CK19)表达降低更为明显,而甲胎蛋白(Alpha fetal protein,AFP)、白蛋白(Albumin,ALB)表达更为升高。形态学观察细胞体积增大,呈多边形,核浆比率降低,相嵌紧密排列,可见双核细胞。PAS染色阳性率上升。结论:浓度1μmol/L的ATRA对肝前体细胞分化诱导作用最强,ATRA能诱导肝前体细胞分化为类肝细胞。

荧光染色法对组织病理诊断棘阿米巴性角膜炎价值的研究

目的:将荧光染色技术应用于组织病理诊断棘阿米巴性角膜炎(AK),并将阅片结果与HE染色和PAS染色的阅片结果进行比较,分析这3种染色方法的敏感性与特异性,探究荧光染色技术在角膜组织活检中检测阿米巴病原体的应用价值。方法:回顾性研究。收集2015-05/2020-06于山东第一医科大学附属眼科医院就诊的感染性角膜炎患者的手术切除标本74例75眼。根据角膜刮片、培养和组织病理诊断结果,将感染性角膜标本分为AK组和非棘阿米巴性角膜炎(NAK)组。将连续切片的组织分别行HE染色、PAS染色和荧光染色,分析3种染色方法对AK诊断的敏感性与特异性,使用受试者工作特征(ROC)曲线计算曲线下面积(AUC),并进一步分析在同一部位相同倍率视野下,计数三种染色方法找到棘阿米巴病原体的数量,明确荧光染色法对AK的诊断价值。结果:HE染色的敏感性为69%(27/39)、特异性为92%,PAS染色的敏感性为62%(24/39)、特异性为97%,荧光染色的敏感性为95%(37/39)、特异性为97%,3种染色方法对AK诊断的敏感性存在差异(χ^(2)=19.857,P<0.001);进行两两比较发现,HE染色、PAS染色与荧光染色诊断AK的敏感性有差异(P=0.003、<0.001),HE染色与PAS染色诊断AK的敏感性没有差异(P=0.978);AUC最大为荧光染色(0.960),其次分别为HE染色(0.804),PAS染色(0.794)。计数在同一部位相同倍率视野下,HE染色、PAS染色和荧光染色查见棘阿米巴包囊数量的中位数分别为4(0,11)、2(0,9)、12(3,33)个(χ^(2)=56.561,P<0.001);进行两两比较发现,HE染色和荧光染色、PAS染色和荧光染色找到棘阿米巴包囊的数量有差异(P<0.001),HE和PAS两种染色方法找到棘阿米巴包囊的数量没有差异(P=0.210),荧光染色的组织病理切片更容易辨别阿米巴病原体。结论:荧光染色技术应用于组织病理诊断AK的敏感性比HE染色和PAS染色高,可显著提高阿米巴病原体检测的阳性率。