黑龙骨的化学成分

目的：研究黑龙骨的化学成分。方法：采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱色谱及RP-18柱色谱进行分离纯化,并运用波谱学方法对所分得化合物进行结构鉴定。结果：从黑骨藤中分得了7个化合物,经波谱解析分别确定为汉黄芩素（1）、7-甲醚黄芩素（2）、香草醛（3）、异香草醛（4）、杠柳苷L（5）、β-谷甾醇（6）、β-胡萝卜苷（7）。结论：化合物1、2为首次从该属植物中分离得到,化合物3~5为首次从该植物中分离得到。

黑骨藤根挥发性成分研究

目的:研究黑骨藤根挥发性成分。方法:利用水蒸气蒸馏法提取黑骨藤根挥发性成分,用 GC-MS 进行分离测定,色谱柱为 SE-30弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm),柱温50℃,保持2 min,然后以4℃·min^(-1)升温至230℃,保持5 min。载气为高纯度氦气99.999%;载气流量1.0 mL·min^(-1);分流比40:1。结合计算机检索技术对分离的化合物进行结构鉴定,应用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。结果:分离出26个成分,确定了21个化合物,占挥发油总量的95.61%。黑骨藤根挥发性成分大于1%的化学成分有5种,分别为:薁1.177%,α-雪松醇1.247%,芳樟醇1.248%,甲基萎叶酚2.297%,反式茴香脑83.013%。结论:本文对黑骨藤根挥发性成分的研究,为该类植物的进一步研究开发提供必要的试验数据。

复方黑骨藤提取物对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织中TNF-α、MMP-9和TIMP-1的影响

目的探讨复方黑骨藤50%乙醇提取物对类风湿性关节炎的治疗作用机理。方法构建大鼠完全弗式佐剂性(AA)关节炎模型,通过免疫组化法检测大鼠踝关节滑膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的含量。结果空白对照组、阳性对照组及复方黑骨藤提取物实验组大鼠滑膜组织中TNF-α、MMP-9及TIMP-1的阳性表达均与模型对照组存在显著或极显著性差异。结论复方黑骨藤提取物能显著减轻佐剂性关节炎大鼠关节肿胀,抑制TNF-α及MMP-9的表达,增强TIMP-1的表达,调整MMP-9/TIMP-1的失衡,从而减轻关节炎的症状和软骨破坏,对实验性类风湿关节炎的滑膜增生具有显著的抑制作用。

复方黑骨藤对佐剂性关节炎大鼠IL-4、IFN-γ及TGF-β1表达的影响

目的:研究复方黑骨藤对佐剂性关节炎大鼠模型血清中IL-4、IFN-γ和TNF-α及关节滑膜组织中TGF-β1的表达水平的影响,以深入探讨复方黑骨藤对类风湿关节炎的治疗作用及其相关机制。方法:构建大鼠弗氏完全佐剂性(AA)关节炎模型,通过ELISA与免疫组化方法分别检测大鼠血液中IL-4、IFN-γ、TNF-α的含量和大鼠膝关节滑膜组织中TGF-β1的含量。结果:模型组与正常组比较,血清的IFN-γ、TNF-α水平升高,IL-4和滑膜组织中的TGF-β1水平降低(P<0.01)。复方黑骨藤组与模型组比较血清中IFN-γ、TNF-α水平显著下降,IL-4、TGF-β1水平上调,与模型组有显著性差异。结论:本实验研究表明复方黑骨藤能显著抑制IFN-γ、TNF-α的表达,增强IL-4、TGF-β1的表达,调整大鼠Th1/Th2细胞及其细胞因子失衡,从而减轻关节滑膜炎症的持续发展和软骨破坏,对实验性类风湿关节炎的滑膜组织中T细胞增生及浸润具有显著的抑制作用。

双藤汤醇提取物对寒痹型胶原诱导型关节炎大鼠凋亡调节作用

目的：观察双藤汤对寒痹型胶原诱导型关节炎大鼠抗凋亡作用。方法：随机选取雄性SD大鼠分为空白组、模型组、双藤汤60、40、20 g/kg组、青藤碱28 mg/kg组,每组10只。除空白组外,其余各组构建模型。连续给药4周后测量动物足跖厚度;HE染色分析脾脏病理变化;免疫组化法检测脾脏Bax和Bcl-2蛋白表达,Western-blotting检测脾脏Caspase-1,Caspase-3和CytC蛋白表达。结果：与模型组比较,空白组、双藤汤60 g/kg和40 g/kg组和青藤碱28 mg/kg组足跖部肿胀程度下降;脾脏病理切片显示空白组、双藤汤60 g/kg和40 g/kg组和青藤碱28 mg/kg抑制脾小体萎缩减少并促进其发育;免疫组织法显示双藤汤60、40、20 g/kg组、青藤碱28 mg/kg组Bax蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达上调;蛋白印迹显示双藤汤60、40、20 g/kg组、青藤碱28 mg/kg组Caspase-1、Caspase-3、CytC蛋白表达受到不同程度抑制。结论：双藤汤可能通过调节凋亡途径中Bax、Bcl-2、Caspase-1、Caspase-3、CytC蛋白表达起到对寒痹型胶原诱导关节炎大鼠炎症的抑制作用。

黑骨藤超高效液相色谱特征图谱的研究

目的:建立黑骨藤(Periploca forrestil Schltr.)超高效液相色谱(UPLC)特征图谱分析方法,为黑骨藤药材品质鉴别提供依据。方法:采用Aglient C_(18)(2.1 mm×100 mm,2.7μm)色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相,线性梯度洗脱,流速0.8 mL·min^(-1),柱温40℃,检测波长221 nm,进样量1μL。结果:以杠柳苷和绿原酸为参照物峰,标识出21批样品中有12个共有峰,其相似度均在0.9~1.0之间;四川产地标识15个共有峰,贵州地区标识16个共有峰,广西地区标识19个共有峰,云南地区标识21个共有峰。经过聚类分析和主成分分析,可知四川产地自成一类,贵州产地自成一类,广西和云南自成一类,同一类地区样品之间化学成分种类相差不大。结论:该方法高效、快速,重现性好,能够有效地区别黑骨藤4个产地植物的差异。

HPLC测定不同产地黑骨藤中杠柳苷的含量

目的:利用高效液相色谱分析不同产地黑骨藤中杠柳苷的含量,为黑骨藤药材的质量标准建立提供参考。方法:色谱柱:Alltech Apollo C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙睛-水(27∶73);流速:1.0 mL·min-1;柱温:25℃;检测波长:221nm。结果:线性范围为4.86～194.4 mg·L-1,相关系数为0.9999,平均加样回收率为98.5%,RSD=3.4%(n=5)。结论:本法操作简便,结果准确,重复性好,可用于黑骨藤的质量评价。

大孔树脂分离复方黑骨藤药物有效成分工艺的研究

目的考察大孔树脂分离复方黑骨藤药物有效部位的工艺条件。方法以黑骨藤中杠柳苷、秦艽中龙胆苦苷和元胡中延胡索乙素为检测指标,采用HPLC法考察3种大孔树脂(D-101、AB-8、NKA-9)对杠柳苷、龙胆苦苷和延胡索乙素的吸附分离性能,并考察分离纯化杠柳苷、龙胆苦苷和延胡索乙素成分的最佳工艺条件。结果用大孔树脂D-101作为填料,样品与填料的比为1∶10,样品质量浓度为50 mg/m L,上样后吸附1 h,用60%乙醇为洗脱液,在p H 7.0条件下,20 BV洗脱1 h。结论该优选的工艺简便可行,大孔树脂D-101可作为分离纯化复方黑骨藤药物中杠柳苷、龙胆苦苷和延胡索乙素成分的有效方法。

建立HPLC法同时测定复方黑骨藤中9种有效成分的含量

目的:建立HPLC法同时测定复方黑骨藤中落干酸、6’-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、杠柳苷、延胡索乙素、四氢小檗碱、延胡索甲素9种有效成分的含量。方法:采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-0.05%三乙胺+乙酸水溶液(B,pH=6.0)为流动相,梯度洗脱(0~5 min,5%A→8%A;5~5.5 min,8%A→11%A;5.5~20 min,11%A;20~30 min,11%A→30%A;30~40 min,30%A→40%A;40~42 min,40%A→55%A;42~53 min,55%A→75%A),流速1.2 m L·min^(-1),柱温25℃,检测波长为206 nm(延胡索乙素、四氢小檗碱、延胡索甲素)、225 nm(落干酸和杠柳苷)、243 nm(獐牙菜苦苷和獐牙菜苷)和275 nm(6’-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷和龙胆苦苷),进样量10μL。结果:落干酸、6’-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、杠柳苷、延胡索乙素、四氢小檗碱和延胡索甲素的质量浓度在一定范围内,与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为92.7%、90.9%、91.2%、94.9%、97.4%、94.6%、96.1%、90.9%和104.4%,RSD分别为2.1%、1.3%、1.1%、1.6%、0.7%、0.6%、1.8%、2.0%和1.4%;样品中上述9种成分含量范围分别为3.464~3.535、1.133~1.178、0.373~0.382、13.598~14.142、0.109~0.112、0.499~0.510、0.114~0.119、0.027~0.028和0.163~0.174 mg·g^(-1)。结论:经方法学验证,本方法可用于黑骨藤复方药物中9种有效成分的分析和含量测定,为复方黑骨藤药物的质量控制奠定基础。

正交试验优选复方黑骨藤提取工艺

目的:优选复方黑骨藤的提取工艺。方法:以总生物碱得率和干膏得率的综合评分为指标,采用正交设计考察乙醇体积分数、固液比、提取时间、提取次数对复方黑骨藤提取工艺的影响。结果:最佳提取工艺为药材粗粉加6倍量70%乙醇提取3次,每次1 h。结论:优选的提取工艺稳定可行,可用于复方黑骨藤新制剂的制备。