草鱼过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)基因cDNA序列的克隆及其组成型表达

过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）是核激素受体超家族成员之一,分α,β,γ3个亚型,PPAR具有多种生物学效能,对其基因进行研究将有助于揭示草食性鱼类对营养物利用规律及其机制.通过简并引物克隆草鱼（C tenopharyngodon idellus）PPAR基因cDNA核心序列,应用3′RACE技术扩增该序列的3′末端序列,并对其进行序列分析,最后用荧光定量PCR方法比较草鱼肝脏、脑、脾脏、肌肉、脂肪和心脏的PPARα、PPARβ和PPARγ基因mRNA相对表达水平.序列分析结果表明,草鱼PPARα、PPARβ和PPARγ基因cDNA核心序列片段大小为631 bp,604 bp和651 bp,分别编码210、201和217个氨基酸,PPARγ经3′RACE后共获得大小为1331 bp的片段,编码337个氨基酸.草鱼与鲤鱼（Cyprinus carpio）、斑马鱼（Danio rerio）、鲈鱼（Lateolabrax japonicus）等鱼类PPAR氨基酸序列同源性很高,为71.4%~96.1%;与人（Homo sapiens）、大鼠（Rattus norvegicus）、小鼠（Mus musculus）、牛（Bos taurus）等哺乳动物PPAR氨基酸序列的同源性也较高,为65.0%~77.6%;与非洲爪蟾（Xenopus laevis）等两栖动物PPAR氨基酸序列的同源性约为67.0%.荧光定量PCR结果表明,草鱼PPARα于肝脏,PPARβ于肝脏、肌肉和心脏,PPARγ于肝脏的表达相对较高.相同物种不同PPAR亚型的同源性较低,而不同物种同型PPAR同源性很高,反映了不同亚型在结构上的差异,这与其在功能上的差异是相一致的.

PPARγ_2基因Pro12Ala多态性与2型糖尿病及其一级亲属血脂的相关性研究

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ2基因Pro12Ala多态性与2型糖尿病(T2DM)及其一级亲属血脂的相关性。方法将研究对象按WHO 1999年T2DM的诊断与分型标准分为T2DM组(156例,为T2DM患者且其家族中有血缘关系的T2DM患者≥2例)、T2DM一级亲属中正常糖耐量组即NFDR组(168例,为T2DM的一级亲属中糖耐量正常者)、无糖尿病家族史的正常糖耐量组即NC组(150例,与T2DM无血缘关系,且经口服糖耐量检测排除T2DM和糖耐量异常IGT者)。每组按体重指数(BMI)再分为肥胖组(BMI≥25kg/m2)和非肥胖组(BMI<25kg/m2)。应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测PPARγ2基因Pro12Ala多态性,比较不同基因型患者的血脂水平。结果 T2DM组患者BMI显著高于NC组(P<0.05);NC组、NFDR组、T2DM组甘油三酯(TG)依次增高,3者之间差异有统计学意义(P<0.05);胆固醇(TC)依次增高,但3者之间差异无统计学意义(P>0.05);T2DM组高密度脂蛋白胆固醇(HLD)显著低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05);3组的低密度脂蛋白胆固醇(LDL)差异无统计学意义(P>0.05)。T2DM组PA/AA基因型患者较PP基因型患者的TG、TC、LDL高(P<0.05),其中肥胖组PA/AA基因型较PP基因型患者的TG、TC、LDL高,差异有统计学意义(P<0.05),而在非肥胖组中的差异均无统计学意义(P>0.05)。NFDR组PA/AA基因型较PP基因型中TG、TC、LDL有增高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05),其中肥胖组中PA/AA基因型较PP基因型中TG、TC、LDL高,差异有统计学意义(P<0.05),而在非肥胖组中的差异均无统计学意义(P>0.05)。NC组PA/AA基因型与PP基因型患者的TC、TG、HDL、LDL水平差异无统计学意义(P>0.05),在NC肥胖组及NC非肥胖组中两种基因型患者的各血脂水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PPARγ2基因Pro12Ala多态性与西北地区汉族T2DM及其一级亲属血脂相关,以肥胖者明显,但可能对血脂的影响甚微。

苦瓜多糖的分离纯化及其对PPAR激活作用研究

采用DEAE-52纤维素柱色谱和Sephadex G-100凝胶柱色谱对苦瓜多糖(MCP)进行分离纯化研究。利用高通量筛选法对苦瓜多糖的分离纯化产物进行降血糖降血脂活性研究。试验以SMMC-7721肝癌细胞为模型,确定了苦瓜多糖各个样品的合适浓度为50μg/mL,并以此浓度对PPARγ、PPARδ受体的激活能力进行了筛选。结果表明,苦瓜多糖分离产物MCP2和MCP4对PPARγ受体有激活作用,激活倍分别为1.726和1.602。MCP2-1和MCP2-2样品都能激活PPARγ受体,激活倍分别为1.593、1.678。MCP2、MCP2-1和MCP2-2是苦瓜多糖的降糖活性成分。

PPARα与非酒精性脂肪肝的最新进展

目前非酒精性脂肪肝的发病机制尚不清楚,但是脂质的沉积似乎是本病主要的原因,过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)是过氧化物酶体增殖物激活受体的核受体家族的三个成员之一。是脂肪酸水平变化的传感器,可影响人体的生理平衡包括在多种组织中脂质和碳水化合物的代谢。近年来,很多文献报道称PPARα可控制非酒精性脂肪肝的发展。在本文中,我们将总结PPARα在代谢活跃的肝脏中所参与的调节,就PPARα与非酒精性脂肪肝疾病之间的最新进展作一概述。

PPAR-γ对单核/巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1表达效应的研究

目的 研究配体罗格列酮活化的过氧化体增殖物激活型受体 γ(PPAR γ)对单核 /巨噬细胞转分化过程中酰基辅酶A :胆固醇酰基转移酶 1 (Acyl CoA :cholesterolacyltransferases,ACAT 1 )表达效应的影响。 方法 在RPMI1 640培养基中培养人单核细胞 (THP 1 ) ,加入佛波酯(PMA)培养 48h,细胞贴壁呈巨噬细胞样分化。运用免疫细胞化学、逆转录聚合酶链反应、蛋白质免疫印迹等方法 ,观察单核巨噬细胞转分化前后PPAR γ对ACAT 1mRNA和蛋白表达水平的影响。结果 单核巨噬细胞转分化前后ACAT 1表达增加 ,罗格列酮活化的PPAR γ可明显抑制A CAT 1的表达。结论 动脉粥样硬化事件的发生可能与ACAT 1表达增强有关。罗格列酮活化的PPAR γ可能通过抑制ACAT 1表达 ,巨噬细胞摄取脂质降低 ,从而减少泡沫细胞的形成 。

针灸治疗脑缺血炎症反应的新靶点—PPAR-γ

脑缺血后的炎症反应可加重神经损伤,激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)可抑制脑缺血后炎症反应,发挥神经保护作用,被视为缺血性卒中治疗新的药理作用靶点;针灸可通过抑制炎症细胞因子的合成、下调炎症介质及黏附分子的表达、抑制炎症细胞的功能等多种途径干预脑缺血后炎症反应,发挥脑保护作用。因此,筛选有效激发PPAR-γ活化的针灸方法,从PPAR-γ活化途径研究针灸治疗脑缺血炎症反应的作用机制,将是一个大有希望的研究方向。

PPARα,γ和δ:胰岛素抵抗治疗的靶点

胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是指外周组织对胰岛素的反应敏感性降低,是肝脏疾病和心血管病发生的共同基础,常常是高脂血症和2型糖尿病发病的前奏.过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs)属于核受体超家族的成员.PPARs激动剂可通过多种途径改善胰岛素敏感性,例如调节糖脂代谢、抗炎作用以及间接地改善氧化应激状态.这篇综述主要是回顾IR的病理机制及其治疗靶点:PPARα,δ和γ,并阐明针对此类靶点的胰岛素增敏药物的信号转导通路.

衰老对大鼠PPARα表达的影响及与胰岛素抵抗的关系

目的 观察衰老对过氧化体增殖物激活型受体α(PPARα)的组织表达的影响 ,在分子水平上探讨衰老过程中出现胰岛素抵抗 (IR)的可能机制。方法 用 Bergman创立的微小模型技术评价年轻鼠 (8～ 1 2 w龄 )和老年鼠 (2 4月龄 )的胰岛素敏感性 ,取大鼠肝脏提取总 RNA,采用半定量 RT- PCR法检测 PPARα及其目标基因脂蛋白脂酶 (LPL )、酰基 Co A合成酶 (ACS)、肉毒碱棕榈酰转运酶 (CPT ) m RNA水平 ,用 Westernblot法检测 PPARα蛋白表达情况。结果 与年轻鼠组比较 ,老年鼠组存在明显的 IR,而老年鼠组的 PPARα m RNA及 PPARα蛋白表达明显减少 ,目标基因 LPL、ACS、CPT m RNA也明显减少。结论 衰老过程中 PPARα表达减少可能与

AP1与NF-κB对PPARδ基因的转录调控作用

目的研究在过氧化物酶体增长因子活化受体δ(PPARδ)表达中的相关调控因子。方法用RT-PCR扩增人类PPARδ启动子序列,通过Deletion及观测各重组体转染活性,通过电泳迁移率变更分析(EMSA)、突变等方法确定核转录因子激活蛋白1(AP1)及NF-κB对PPARδ表达的作用。结果 Deletion及重组转染后发现AP1及NF-κB因子各自结合位点突变后转染活性明显降低,同时突变其转染活性无明显变化。结论 AP1及NF-κB均可以增强PPARδ的表达活性。

温阳补心汤对慢性心衰大鼠心肌线粒体能量代谢及MAPK/PPAR-γ信号通路的影响

目的观察温阳补心汤基于p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)信号通路对慢性心衰(CHF)大鼠心肌线粒体能量代谢的影响。方法在48只大鼠中随机抽取12只作为假手术组,其余运用腹主动脉缩窄法建立CHF模型,取造模成功36只大鼠,随机分为模型组、温阳补心汤组、琥珀酸美托洛尔组。温阳补心汤组和琥珀酸美托洛尔组给予相应药物,假手术组、模型组给予等量的去离子水10 mL/(kg·d),各组均每日灌胃1次。给药后8周,观察CHF大鼠各项指标变化情况。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠外周血中三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、氨基末端B型钠尿肽原(NT-proBNP)的含量;采用彩色多普勒超声检测大鼠心室功能;采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测大鼠心肌组织中p38MAPK、p-p38MAPK、PPAR-γ的蛋白表达量。结果与假手术组比较,模型组大鼠ATP含量显著下降,ADP、NT-proBNP含量显著升高(P <0.01);与模型组比较,温阳补心汤组、琥珀酸美托洛尔组大鼠ATP表达升高,ADP、NT-proBNP表达下降(P <0.05)。与假手术组比较,模型组p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达水平明显升高(P <0.05),PPAR-γ蛋白表达水平明显下降(P <0.05);与模型组比较,温阳补心汤组、琥珀酸美托洛尔组p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达水平下降(P <0.05),PPAR-γ蛋白表达水平升高(P <0.05)。琥珀酸美托洛尔组与温阳补心汤组的心室功能相关指标[左心室舒末内径(LVDD)、左心室缩末内径(LVDS)、左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期后壁厚度(LVPWD)、左心室收缩末期后壁厚度(LVPWS)],与模型组比较差异具有统计学意义(P <0.05)。结论温阳补心汤能改善心衰,延缓病情进展,其机制可能与p38MAPK通路被抑制及PPAR-γ通路被激活,促进线粒体合成有关。

压力负荷性大鼠肥厚心肌过氧化物酶体增殖剂活化受体α(PPARα)和肉碱棕榈酰转移酶(MCPT-I)mRNA的表达变化

目的 了解压力负荷性肥厚心肌PPARα和M CPT ImRNA的表达变化 ,探讨PPARα调控心肌线粒体脂肪酸摄取及维持能量和脂质平衡的作用。方法 观察大鼠腹主动脉缩窄术后 2、4、8、16周血流动力学参数、心室重塑指标、血清和心肌游离脂肪酸的含量及PPARα和M CPT ImRNA的表达变化。结果 随着肥厚程度的增加 ,压力负荷性大鼠血清和心肌游离脂肪酸蓄积增加 ,心肌PPARα和M CPT ImRNA的表达逐渐下调 ,而且与脂肪酸的利用下调相一致。结论 病理性肥厚心肌能量代谢底物发生改变 ,脂肪酸氧化不占主导地位 ;PPARα在转录水平上失活 ,对心肌线粒体脂肪酸摄取起重要的调控作用 ;

PPAR受体双重/泛激动剂存在的问题及前景

过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)是一类配体依赖的核转录因子,属于核受体超家族。目前单纯的PPARγ激动剂类药物并不能有效预防糖尿病心血管并发症,而PPARα/γ双重激动剂能在增加胰岛素敏感性的同时还能预防心血管并发症。这类化合物正在临床试验并计划用于治疗伴有心血管并发症的2型糖尿病。研究发现,PPARα/γ双重激动剂具有意想不到的不良反应,这给临床应用带来了一系列的问题。现就PPAR受体双重/泛激动剂研究和发展中存在的问题及前景进行分析。

PPAR-γ配体对绒癌细胞系JEG-3体外增殖、分泌和侵袭能力的影响

目的观察PPAR-γ配体吡格列酮(PGZ)调节绒癌细胞系JEG-3的增殖、分泌h CG和体外侵袭、转移能力。方法用MTT法和IEMA测定细胞的增殖和分泌h CG。Matrigel侵袭模型分析细胞的迁徙和侵袭能力。结果小剂量PGZ对JEG-3有增殖抑制作用,随PGZ浓度的增加,JEG-3透过Matrigel膜的细胞数明显减少(P<0.01)。结论PGZ明显抑制JEG-3肿瘤细胞的生长和侵袭能力,提示PPAR-γ途径可能是妊娠滋养细胞肿瘤治疗的新方向。

LncRNA PFL通过AMPK-PPARα信号通路改善心肌纤维化

目的研究促纤维化长链非编码RNA(LncRNA PFL)改善压力负荷诱导的心肌纤维化同腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)-过氧化物酶增殖激活的α亚型受体(PPAR)α信号通路的激活是否相关。方法将60只大鼠随机分为A(假手术)组、B(压力负荷诱导的心肌纤维化模型)组、C(压力负荷诱导的心肌纤维化模型+LncRNA PFL抑制剂)组。采用苏木素-伊红(HE)染色检测心肌组织的病理形态和纤维化程度,羟脯氨酸(HYP)检测心肌质量,Western印迹测定心肌组织中AMPK、PPARα蛋白水平。结果与A组比较,B组和C组心脏重量指数(HWI)和左心室重量指数(LVWI)均显著升高(P<0.01);与B组比较,C组显著下降(P<0.01)。HE染色结果:与A组比较,B组和C组心肌细胞的炎症浸润和细胞间胶原纤维均显著增加,神经元细胞损伤程度加重(P<0.05);与B相比,C组显著好转(P<0.05)。免疫荧光结果:B组AMPK及PPARα蛋白水平明显低于A组和C组,且C组明显低于A组。RT-qPCR及Western印迹结果:B组心肌组织中AMPK和PPARαmRNA及蛋白表达显著低于A组和C组,且C组显著高于A组(P<0.05)。结论LncRNA PFL表达下调改善压力负荷诱导的心肌纤维化与激活AMPK-α信号通路有关。

过氧化物酶体增长因子活化受体(PPARs)与microRNAs

在细胞中,过氧化物酶体增长因子活化受体(PPARs)和microRNAs相互制约和调控从而影响相关细胞、组织和器官的功能,在脂肪细胞分化与代谢、炎症、癌症和心血管疾病等生理和病理过程中发挥重要作用.本文首先简要总结了PPARs发挥作用的分子机制;并分别以PPARs家族每一个成员(PPARα、PPARβ和PPARγ)为对象,分析了PPARs调控下的microRNAs表达及功能,探讨了microRNAs调控下的PPARs表达活性变化,并归纳了PPARs与microRNAs之间的调控关系;最后对PPARs相关microRNAs的应用前景进行了简单探讨.研究PPARs与microRNAs间的网络调控关系,可以为PPARs与microRNAs在理论和实践中的深入研究和应用提供参考.

普罗布考对动脉粥样硬化兔肝脏PPARα表达的影响

目的探讨普罗布考对动脉粥样硬化模型兔肝脏的保护作用及其对过氧化体增殖物激活型受体α表达的影响。方法 16只新西兰大白兔给予高脂饲养8周后,随机平分为2组:高脂组饲以高脂饲料及1%淀粉;普罗布考组在饲以高脂饮食基础上每天给予0.25g普罗布考;另选8只兔为正常对照组给予普通饮食。14周末,处死所有动物,检测血脂、主动脉斑块面积、肝组织病理学等指标,并用RT-PCR和westernblot检测各组肝脏过氧化体增殖物激活型受体αmRNA和蛋白的表达量。结果与高脂组相比,普罗布考组动脉粥样斑块减少,肝脏脂肪病变明显减轻,血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇显著降低。高脂组肝脏过氧化体增殖物激活型受体αmRNA和蛋白的表达量明显低于对照组,而普罗布考可上调过氧化体增殖物激活型受体αmRNA和蛋白的表达量。结论普罗布考降低动脉粥样硬化模型兔血浆胆固醇水平,上调其肝细胞过氧化体增殖物激活型受体α表达水平,对动脉粥样硬化模型兔脂肪肝具有治疗作用。

颅咽管瘤中RARα及PPARβ/δ表达与RA作用的相关性

目的检测颅咽管瘤中RARα及PPARβ/δ的表达,分析其表达量与RA作用效果的相关性,探讨RA靶向治疗颅咽管瘤的分子机制.方法 RT-PCR法检测31例体外培养的颅咽管瘤细胞中PPARβ/δ、RARα的表达情况,MTT法测定RA对PPARβ/δ、RARα不同表达的颅咽管瘤细胞的抑制率,分析其表达情况与RA作用是否存在相关性.结果 RT-PCR结果显示,不同颅咽管瘤细胞中PPARβ/δ、RARα表达存在差别.31例原代培养的颅咽管瘤细胞按其核受体表达不同分为PPARβ/δ>RARα、RARα>>PPARβ/δ、RARα>PPARβ/δ3组;MTT结果显示在相同RA药物作用下RARα>PPARβ/δ组的抑制率明显高于RARα>PPARβ/δ组、PPARβ/δ>RARα和对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 PPARβ/δ、RARα的表达可作为评估RA治疗颅咽管瘤效果的有效指标.PPARβ/δ表达低的颅咽管瘤细胞对RA更敏感;靶向升高RARα或者靶向降低PPARβ/δ的表达都有益于颅咽管瘤的治疗.

PPARγ激动剂的研究进展

过氧化物酶体增殖剂活化受体γ(PPARγ)是一个由配体激活的核转录因子 ,属于核激素受体 (nuclearhormonereceptor)超家族。被激动剂激活以后 ,该受体可以促进葡萄糖的利用以及胰岛素的增敏。因此 ,PPARγ激动剂有希望成为一类全新的Ⅱ型糖尿病治疗药物。

卵形鲳鲹PPARα基因cDNA序列的克隆、组织表达及生物信息学分析

采用RACE-PCR 克隆卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator activated receptors-α,PPAR α）基因的cDNA 序列全长,并应用生物信息学方法分析其编码蛋白质的理化性质和结构特征.结果表明：卵形鲳鲹PPAR α 基因（GenBank 登录号KP893147） cDNA 全长1 930 bp,开放阅读框（ORF）为1 425 bp,共编码474 个氨基酸,其编码的蛋白质为不稳定蛋白,无信号肽和跨膜结构,二级结构由α 螺旋、β转角、伸展片段和无规则卷曲组成,且α 螺旋占较大比例;预测显示,该蛋白有PPARs 基因家族典型的DNA 结合区（DBD）和配体结合区（LBD）;序列对比表明,卵形鲳鲹PPAR α 基因与尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）、花鲈（Lateolabrax japonicas）、大黄鱼（Larimichthys crocea）、金头鲷（Sparus aurata）、军曹鱼（Rachycentroncanadum）等有较高的同源性（81% - 89%）;蛋白系统进化树分析显示,在人（Homo sapiens）、鼠（Mus musculus）、鸭（Gallus gallus）、花鲈、大黄鱼、军曹鱼等动物中,卵形鲳鲹的PPAR α 蛋白与军曹鱼的进化关系最为密切（94%）,与人（68%）、鼠（68%）、鸭（67%）等的同源性较低.荧光定量分析显示,卵形鲳鲹PPAR α mRNA 在脑、肾脏、肠、脾脏等组织表达水平较高,其次是皮肤、肌肉,在心脏、肝脏中表达量较低.