子宫腺肌病PGP9.5、NGF的表达及其与痛经的关系

目的研究蛋白基因产物9.5(protein gene product 9.5,PGP 9.5)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)在子宫腺肌病(adenomyosis,ADS)在位内膜功能层和腺肌病灶中的表达及其与痛经的关系,探讨神经纤维及其生长因子在子宫腺肌病痛经中的作用。方法采用免疫组化SP法,检测ADS在位内膜功能层和病灶组织,对照组在位内膜功能层、肌层组织中PGP 9.5、NGF的表达;通过视觉模拟评分法(visual analogue scale/score,VAS)对ADS痛经程度评分,并分析其与上述因子的相关性。结果 PGP 9.5在ADS在位子宫内膜功能层中呈特异性表达;与对照组相比,PGP 9.5、NGF的表达在ADS在位内膜功能层和病灶中明显增高(P<0.05);ADS在位内膜功能层和ADS腺肌病灶中PGP 9.5、NGF的表达与痛经程度有显著相关性,差异有统计学意义(P<0.05),r分别为0.520和0.688,0.543和0.503。结论 ADS在位内膜功能层中PGP 9.5的特异性表达,可能为ADS诊断提供新的途径;ADS中PGP 9.5、NGF的高表达与其痛经程度呈正相关。

PGP 9.5及S-100蛋白在先天性巨结肠中的表达

目的 观察神经元和神经胶质细胞标志物 PGP 9.5和 S-1 0 0蛋白在先天性巨结肠 (hirschsprung disease,HD)中的表达。方法 采用 PAP免疫组织化学方法。结果 (1 )在对照组结肠壁神经丛中可见染色深浅不一的PGP9.5免疫反应性神经节细胞 ,神经纤维均匀分布在肠壁各层 ,并与肌纤维相平行。神经节细胞胞体对 S-1 0 0蛋白则表现为细胞状“空白区”。(2 ) HD结肠壁分化异常 ,PGP 9.5和 S-1 0 0蛋白免疫反应性神经纤维明显增生 ,分布紊乱 ,未见有 PGP9.5阳性神经节细胞。在增生的 S-1 0 0蛋白阳性神经纤维中偶见有细胞状的“空白区”。结论 神经丛中 PGP 9.5阳性反应的细胞团块和 S-1 0 0蛋白染色的神经丛中细胞状“空白区”,可特征性地提示神经节细胞的存在。实验证实 ,结肠壁神经发育异常是 HD的主要病理生理变化。

乌头碱影响KB_(V200)细胞Pgp蛋白表达的组化实验

目的:通过观察Pgp蛋白表达的细胞阳性率探讨乌头碱抗KBV200细胞耐药机制。方法:以免疫组化法,分别测定6.25μg/mL、12.5μg/mL乌头碱作用后的KBV200细胞Pgp蛋白阳性表达率。结果:对照组Pgp蛋白表达的阳性细胞为96%;而6.25μg/mL、12.5μg/mL乌头碱作用后Pgp蛋白表达的阳性细胞率分别为83%、30%。结论:乌头碱能够降低KBV200细胞Pgp蛋白高表达,部分逆转KBV200细胞耐药性。

PGP基因家族成员的结构和功能

通过对松材线虫耐药基因家族成员Bx-pgps的基因和蛋白质结构与功能的分析,对该家族成员的耐药机制进行了分析预测。从松材线虫基因组数据库中获得了与秀丽线虫pgp基因家族成员同源的基因,分别命名为Bx-pgp1至Bx-pgp10。对其疏水性、跨膜区域和拓扑异构结构等生物学特性进行了预测。结果表明:Bx-PGPs家族成员可能具有跨膜运输功能。

蛋白激酶C对Pgp介导的K562细胞耐药性的影响

目的 研究蛋白激酶C(PKC)在P 糖蛋白 (Pgp)介导的人类白血病K5 6 2细胞多药耐药中的作用。方法 用苔盼蓝拒染法检测药物敏感性 ,用免疫组织化学法检测Pgp的表达 ,用流式细胞仪检测细胞内柔红霉素 (DNR)积聚 ,用Takai法及Westernblot法分别检测PKC活性和PKCα含量。结果 耐药株K5 6 2 /D细胞对DNA及多种抗癌药物显示多药耐药性 ,并存在Pgp过度表达。K5 6 2 /D与敏感株K5 6 2 /S细胞相比 ,PKC总活性无明显差别 ,但PKCα含量显著增高。PKC激活剂TPA增加K5 6 2 /S和K5 6 2 /D细胞的PKC活性 ,使PKC和PKCα由胞质向胞膜转位 ,K5 6 2 /D细胞内DNA积聚减少。PKC抑制剂staurosporine减少K5 6 2 /S和K5 6 2 /D细胞的PKC活性及PKCα含量 ,增加K5 6 2 /D细胞内DNA积聚。结论 PKCα在K5 6 2 /D细胞中显著增高 ,上调PKC ,使K5 6 2 /D细胞内DNA积聚减少 ,下调PKC ,使K5 6 2 /D细胞内的DNA积聚增加 。

拉莫三嗪对慢性癫痫大鼠海马PGP、MVP表达及氨基酸含量的影响

目的考察拉莫三嗪对慢性癫痫大鼠海马P糖蛋白(P-glycoprotein protein,PGP)和主穹隆蛋白(major vault protein,MVP)的表达及氨基酸含量的影响。方法SPF级雄性SD大鼠采用戊四氮制备慢性癫痫大鼠并随机分为模型组、拉莫三嗪低剂量(5 mg/kg)组和拉莫三嗪高剂量(10 mg/kg)组,取健康大鼠为对照组,每组15只,所有组别灌胃给药,模型组和对照组灌胃给予生理盐水,给药体积均为1 mL/100 g。记录所有大鼠治疗前及治疗后的行为学特征及体质量,记录治疗后的癫痫发作时间和脑电波,免疫组化法及Western blot法检测海马中的PGP和MVP表达,由HPLC检测海马中天冬氨酸(aspartate,Asp)、谷氨酸(glutamate,Glu)和甘氨酸(glycine,Gly)含量。结果对照组大鼠活动正常。慢性癫痫模型组大鼠表现为活动减少、咀嚼、节律性点头,头颈上仰、前肢阵挛发作,少数大鼠竖尾或尾拍地面。拉莫三嗪组大鼠由早期的头颈上仰、前肢阵挛发作逐渐过渡到竖毛及嘴和面部肌肉抽搐,少见竖尾或尾拍地的情况。治疗前,与对照组比,模型组及拉莫三嗪组的体质量均明显降低(P<0.05),治疗后,与对照组比,模型组体质量、脑电图频率、海马的Gly明显降低(P<0.05),癫痫发作时间、脑电图波幅、海马的Asp、Glu、PGP和MVP增高(P<0.05),与模型组比,拉莫三嗪组的体质量、脑电图频率、海马的Gly明显升高(P<0.05),癫痫发作时间、脑电图波幅、海马的Asp、Glu、PGP和MVP降低(P<0.05),且呈拉莫三嗪剂量依赖性趋势。结论拉莫三嗪治疗慢性癫痫与降低海马PGP、MVP蛋白及改善海马氨基酸相关。

低频重复经颅磁刺激对氯化锂-匹鲁卡品慢性癫痫大鼠海马CA3区PGP、MRP1、MVP表达的影响

目的研究低频重复经颅磁刺激(rTMS)对氯化锂-匹鲁卡品慢性癫痫大鼠海马CA3区P-糖蛋白(PGP)、多药耐药相关蛋白(MRP)1及主穹隆蛋白(MVP)表达水平的影响。方法 60只大鼠随机分为对照组,模型组,假刺激组,治疗组,每组15只。采用氯化锂-匹鲁卡品腹腔注射构建癫痫大鼠模型,治疗组采用rT MS治疗,比较各组治疗过程中癫痫发作次数及CA3区PGP、MRP1及MVP的表达水平。结果治疗组癫痫发作频率低于模型组及假刺激组(P<0.05)。治疗组PGP、MRP1及MVP表达水平显著低于模型组及假刺激组(P<0.05),较对照组显著升高(P<0.05)。结论低频rTMS可抑制模型大鼠海马CA3区PGP、MRP1及MVP过度表达,低频rTMS的抗痫作用可能与之有关。

活动性肺结核患者血清Fad D9重组蛋白、sCD14-ST及单核细胞P糖蛋白水平及其临床意义

目的探讨活动性肺结核(APTB)患者血清Fad D9重组蛋白、可溶性白细胞分化抗原14亚型(sCD14-ST)、单核细胞P糖蛋白(Pgp)表达及其临床意义。方法选取96例APTB患者(APTB组),按照肺部病灶有无空洞和病灶肺叶数分亚组。同期选择体检健康且经γ干扰素释放试验检测阴性者(健康对照组,HC组)及阳性者(结核潜伏感染组,LTBI组)各48例。比较各组血清Fad D9重组蛋白、sCD14-ST、Pgp水平。评估Fad D9重组蛋白、sCD14-ST、Pgp诊断APTB和鉴别APTB、LTBI的价值。结果Fad D9重组蛋白、sCD14-ST、Pgp水平APTB组>LTBI组>HC组,且有空洞者高于无空洞者,病灶肺叶≥3个者高于<3个者(P<0.05)。Fad D9重组蛋白、sCD14-ST、Pgp对APTB诊断和APTB、LTBI鉴别有良好效能(P<0.05)。结论APTB患者血清Fad D9重组蛋白、sCD14-ST及Pgp明显升高,且与肺部病灶的严重程度有关。

人胚胎结肠肠神经系统发育的观察

目的 研究人胚胎结肠肠神经系统的发育过程 ,为进一步研究先天性巨结肠的发病机制提供参考。 方法 采用一抗为蛋白基因产物 (protein gene product9.5 ,PGP9.5 )和 S- 10 0蛋白抗体的免疫组织化学 PAP法 ,显示结肠肠神经系统中的神经元和神经胶质。 结果 人胚胎结肠肠神经系统发育有明显的阶段性。在胚胎发育早期 (胎龄 2～ 3月 ) ,肠管壁发育差 ,以后出现菲薄的平滑肌层和低平的肠粘膜 ,此期偶在原始肌间神经丛位置见S- 10 0蛋白免疫反应性神经 ;至发育中期 (胎龄 4～ 5月 ) ,肠壁分化出 4层结构 ,出现相当发达的绒毛 ,肌间神经丛中细胞明显增多 ,呈弥散分布于整个肌层间并逐渐迁移到粘膜下层和粘膜层 ,由初级和次级突起构成复杂的神经网络 ;至晚期 (6～ 9月 ) ,肠壁各层均增厚 ,肌间神经丛成簇分布 ,神经纤维构成的网络出现更为细小的 3级突起 ,粘膜下神经丛分化形成浅丛和深丛。 结论 结肠神经系的发育具有明显的阶段性。发育早期神经开始在肠壁肌间丛位置出现 ,发育中期神经成分在肠壁各层中出现并发育增生 ,晚期肠壁各层神经已分化和成熟 ,而在不同的发育阶段 。

乳腺癌细胞耐药机理及药物逆转的实验研究

目的:探讨乳腺癌早期耐药的机理,并寻求药物耐药逆转的方法。方法:采用流式细胞术检测经低浓度的阿霉素处理后的乳腺癌细胞系MCF7的多药耐药蛋白(MRP)和P糖蛋白(Pgp)表达,探讨耐药发生机制。用MTT比色法检测利多卡因与抗肿瘤药物合用后对抗肿瘤药物的增敏作用。结果:经低浓度阿霉素处理后,MRP表达明显增加,并随时间延长而进一步增加,而Pgp表达无明显增高。利多卡因在本身没有毒性的浓度下(2 mg/m l),与3种化疗药物合用后降低了3种化疗药物的半数抑制浓度,单用药物分别为(76.3±3.63)mg/L、(7.9±1.2)mg/L、(15.6±1.1)mg/L,合用分别为(10.5±2.9)mg/L、(1.97±0.62)mg/L、(3.32±0.8)mg/L,差异显著(P<0.01)。结论:MRP在肿瘤细胞早期耐药性起主要作用。利多卡因作为钙调蛋白阻制剂,在体外能有效逆转MRP引起的多药耐药,为进一步应用于临床提供理论依据。

便塞通合剂对便秘模型大鼠PGP9.5及SS在结肠组织中表达的影响

[目的]观察便塞通合剂对实验性便秘大鼠PGP9.5、SS的影响及其效果差异。[方法]将80只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、麻仁丸组、便塞通合剂组,每组20只,采用改良复方地芬诺酯法制作大鼠实验性便秘模型,除空白对照组和模型组不进行药物治疗外,麻仁丸组和便塞通合剂组分别给予麻仁丸0.3g·kg-1·d-1灌胃,便塞通合剂7.5g·kg-1·d-1灌胃。14d后处死全部大鼠,观察大鼠结肠组织病理学改变,采用免疫组织化学法检测结肠组织中PGP9.5、SS的表达水平。[结果]HE染色空白对照组大鼠结肠黏膜正常,模型组大鼠结肠黏膜有炎性细胞浸润,肌间神经丛神经细胞减少,可见空泡变性。通塞便合剂治疗后,近端结肠黏膜未见炎性细胞浸润,肌间神经纤维未见空泡变性。与对照组比较,模型组SS表达显著增加(P<0.05),PGP9.5表达显著减少(P<0.05);麻仁丸组和便塞通组均表现为下调SS的高表达状态,明显低于模型组(P<0.05),上调PGP9.5,明显高于模型组(P<0.05);而便塞通合剂组对其表达影响明显优于麻仁丸组(P<0.05)。[结论]便塞通合剂对便秘大鼠有较好的疗效,主要表现在控制黏膜炎症反应、降低组织中SS的表达水平,上调PGP9.5表达。